Энтеробактерии: Руководство для врачей - Голубева И.В., Килессо В.А., Киселева Б.С., Прямухина Н.С., Татаринова С.Д.

Author: Голубева И.В. Килессо В.А. Киселева Б.С. Прямухина Н.С. Татаринова С.Д.

Tags: классификация и систематика микроорганизмов медицинская микробиология и паразитология медицина биология микробиология руководство для врачей издательство медицина

Year: 1985

Similar

Туберкулез. Руководство для врачей

Неотложная урология. Руководство для врачей

Раны и раневая инфекция: Руководство для врачей

Судебная медицина: (Руководство для врачей)

Text

ъ еР°бактерии
руководство для врачей
Под редакцией
академика АМН СССР, профессора
В.И.Покровского
Москва «Медицина-» 1985
ББК 52.64
Э67*
><?Гк 579.842.1/ 2(035)
И. В. ГОЛУБЕВА, В. А. КИЛЕССО, [б. С. КИСЕЛЕВА),
Н. С. ПРЯМУХИНА, С. Д. ТАТАРИНОВА, Н. к ХОМЕНКО,
Г. В. ЮЩЕНКО
Рецензент В. Р. СОБОЛЕВ, проф.
Энтеробактерии: (Руководство для врачей) /Авт.: 11. В.
Э67 Голубева, В. А. Килессо, |Б. С. Киселева\ и др.; Под ред.
В. И. Покровского. — М.: Медицина, 1985, 321 с. ил.
В пер.: 1 р. 70 к., 9000 экз.
Руководство содержит современные сведения по методам выделения, иден-
тификации и дифференциации представителей всех родов семейства Enterobacte-
riaceae, а также по определению эпидемиологических маркеров штаммов этил
бактерий (биоваров, фаговаров и др.). В нем изложены основные принципы и
анапы бактериологического исследования на энтеробактерии, отражающие накоп-
ленный к настоящему времени опыт мировой практики. Описаны методы уско-
ренной и упрощенной идентификации энтеробактерий. Значительное место отве-
дено питательным средам, рекомендуемым при исследовании на энтеробактерии,
которые систематизированы в соответствии с этапами бактериологического ана-
лиза с указанием их состава, принципа действия, коммерческого или рецептур
кого (в условиях лаборатории) изготовления. Помимо разделов по микробиоло-
гии эшеробактернй прикладного характера, в руководстве освещены новейшие
данные, касающиеся общих или теоретических вопросов этой проблемы.
Руководство рассчитано на микробиологов, бактериологов лабораторий СЭС.
4107000000—354
Э 039(01)—85 57“85
ББК 52.64
For summary see page 320.
ЭНТЕРОБАКТЕРИ И
Зав. редакцией И. В. Туманова. Редактор Л. Б. Богоявленская. Редактор издательства
Т. П. Осокина. Художественный редактор В. Т. Сидоренко. Оформление художника
Л. А. Рабенау. Технический редактор Н. И. Людковская. Корректор Л. Г. Воронина
ИБ № 4034
Сдано в набор 22.01.85 Подписано к печати 6.06.85 Т-02559 Формат бумаги 60*^90/16
Бумага тип № 1. Гари. лит. Печать высокая. Усл. печ. л. 20,00. Усл. кр.-отт. 20,00
Уч.-изд. л. 22,96. Тираж 9000 экз. Заказ Кв 817. Цена 1 р. 70 к.
Ордена Трудового Красного Знамени издательство «Медицинам
103062 Москва, ПетроверигскиЙ пер., 6/8
Московская типография № 11 Союзполиграфпрома
при Государственном комитете СССР по делам издательств,
полиграфии и книжной торговли. Москва. 113105,
Нагатинская ул., д. 1.
© Издательство «Медицина», Москва, 191
ПРЕДИСЛОВИЕ
Энтеробактерии — представители семейства Enterobacteria-
сеае на протяжении всей истории медицинской бактериологии
являются объектом постоянного и серьезного внимания специа-
листов. Работа по их выделению и идентификации составляет
немалую долю в деятельности бактериологов лабораторий
службы здравоохранения. В научно-исследовательских учрежде-
ниях эпидемиолого-микробиологического, гигиенического и ряда
других профилей с этими микроорганизмами также проводят
регулярные исследования.
Вместе с тем за последние 15—20 лет возросло значение раз-
личных энтеробактерий в патологии человека. Еше в недавнем
прошлом диагностические и профилактические бактериологиче-
ские исследования «на кишечную группу» предусматривали
поиски и выделение лишь ограниченного числа патогенных энте-
робактерий (шигелл, сальмонелл, энтеропатогенных эшери-
хий) —возбудителей кишечных инфекций.
Во второй половине нашего столетия развитие медицинской
науки и практики, научно-технический прогресс в целом, как это
ни парадоксально, имели своим следствием возникновение но-
вых проблем в медицине, в частности проблемы условно-пато-
генных микроорганизмов, их роли в патологии человека. Выяс-
нилось, что при определенных обстоятельствах, в так называе-
мых группах риска, этиологическое значение могут приобретать
самые разнообразные «оппортунистические» микробы. В возник-
шую проблему условно-патогенных бактерий оказались вовле-
ченными и многочисленные роды семейства кишечных бактерий,
как-то: Citrobacter, Klebsiella, Enterobacter, Hafnia, Serratia,
Yersinia и др.
Это предъявляло существенно возросшие и расширенные
требования к деятельности медицинских бактериологов, к их ра-
боте по идентификации и дифференциальной диагностике много-
образных и обладающих выраженными родственными связями
членов семейства Enterobacteriaceae. Естественно, что для реа-
лизации соответствующих задач необходимо было пополнить и
углубить знания в области биологии энтеробактерий, их класси-
фикации, методов диагностики.
В мировой литературе соответствующие материалы нашли
свое отражение в ряде руководств и монографий 60—80-х годов
[Kauffmann F., 1966; Sedlak J., Rische H., 1968; Edwards P.,
Ewing W., 1972], в нашей же стране, кроме переведенной моно-
графии Ф. Кауфмана, изданной в 1959 г., подобных работ не
было. Предлагаемое читателям руководство «Энтеробактерии»
призвано восполнить этот пробел и является оригинальным тру-
дом в отечественной медицинский микробиологической литера-
туре. Авторы его взяли на себя ответственную задачу изложить
в этой книге все необходимое специалисту-бактериологу для ра-
__.............. uivvnvn wnuinuvinnc jnicpuUdKiepHH b WOT-
ветствии с требованиями настоящего времени. Существенно
важным в этом плане было помочь читателю разобраться в весь-
ма сложном и неоднозначно решаемом вопросе о классификации
семейства энтеробактерий. Отсутствие единой современной меж-
дународной классификации затрудняло изложение вопроса в ру-
ководстве и потребовало для достижения унифицированного
подхода принятия одной из нескольких известных классифика-
ций, достаточно популярных в различных регионах мира. Выбор
был сделан в пользу классификации и номенклатуры энтеробак-
терий, представленных в 8-м издании «Определителя бак-
терий Берги» — Bergey's Manual of Determinative Bacteriology
(1974) и регламентированных International Code of Nomencla-
ture of Bacteria (1975). Определенное значение при этом имело
и то обстоятельство, что «Краткий определитель бактерий Бер-
ги» издан в русском переводе у нас в стране (1980) и доступен
для применения.
Развитие знаний в области биологии энтеробактерий, расши-
рение роли их в патологии человека потребовали ревизии суще
ствовавших ранее принципов и этапов бактериологического ис-
следования, пересмотра тактики идентификации, используемых
при этом методов и тестов. В связи со сказанным авторы боль-
шое внимание уделили изложению этих данных. Этап отбора и
транспортировки проб разнообразных материалов для бактерио-
логического исследования, имеющий самое серьезное значение,
изложен достаточно подробно, особое внимание уделено особен-
ностям тех или иных материалов.
Принципы и этапы работы по выделении» и идентификации
энтеробактерий представлены в значительной мере в соответст-
вии с принятыми в последние годы в мировой практике, при
этом подчеркнуто значение биохимических характеристик в диф-
ференциальной диагностике энтеробактерий как от других се-
мейств грамотрицательных микробов, так и в дифференциации
между родами в пределах семейства.
Руководство включает характеристики всех родов, представ-
ленных по классификации Берги (1974) в семействе энтеробак-
терий и снабжено дифференциально-диагностическими таблица-
ми. Ускоренные и упрошенные методы идентификации лигро-
бактерпй нашли т.чк;к<' ено;' отражение
Важнейшим условием эффективности бактериологических
исследований является адекватный выбор и правильное приго-
товление питательных сред, способствующие исключению воз-
можных расхождений в результатах исследовании. Руководство
содержит раздел «Питательные среды и реактивы» (для энтеро-
бактерий) с рекомендациями по их изготовлению и некоторыми,
сведениями по механизму действия.
При создании руководства авторы использовали данные оте-
чественной п мировой литературы, личный многолетний опыт ра-
боты с энтеробактериями, а также опыт подготовки кадров бак-
териологов.
4
Глава /
КЛАССИФИКАЦИЯ И НОМЕНКЛАТУРА
Микроорганизмы, принадлежащие к семейству Enterobacte-
riaceae. многочисленны и разнообразны но своим биологическим
свойствам. Их классификация и номенклатура многократно под-
вергались и подвергаются ревизии, дополнениям, изменениям,
однако до настоящего времени нет единой международной клас-
сификационной схемы.
Наиболее употребительными во всем мире были классифика-
ции Кауфмана [Katiffniann F., 1963—1966], позднее Юинга
[Ewing W., 1967—1972].
Однако в 1974 г. вышел каин।ачьими труд, созданный везу-
щими бактериологами разных оран, 8-е издание Bergey s Ma-
nual of Determinative Bacteriology «Определитель бактерий Бер-
ги», где главными критериями для разделения бактерий на
крупные таксоны служили морфология, физиология и биохими-
ческие свойства, отчасти генетический анализ. Для дифферен-
циации более мелких категорий некоторых бактерий использова-
ны особые признаки — серологические, отношение к бактериофа-
гам и колицинам.
Систематика бактерий совершенствуется и пополняется но-
выми критериями на базе химических, пммуиохимических, гене-
тических и других видов исследований. Привлечена и нумериче-
ская (числовая) таксономия.
В связи с тем что в работтаксопомистов прочно вошли ме-
тоды геноснстематики и числовая таксономия, целесообразно
дать краткое пояснение их принципов.
Причинны геноснстематики бактерий основаны на определе-
нии сходства и различий в их ДНК. И шесто, что ДНК содер-
жит генетическую информацию в форме кода, элементами кото-
рого являются 4 нуклеотидных основания: аченпн (А), гезчн"
(I )-—производные пурина. пптоэип НЧ и тимин СП проит
водные пиримидина. Структуры нуклеотидных оснований тако-
вы, что I' может соединяться только <- П. тоща как А только
с Т. образуя парные основания. Соотношение между комплемен-
тарными шарами Г-| П н А-f l' для opi ани.змов данного вида
постоянно, а у различных организмов колеблется в широких пре-
делах. Основная композиция ДНК может быть представлена
как отношение Г-фЦ/А-фТ и выражена в процентном содержа-
нии Г+Ц в ДНК (моль%).
Степень родства организмов может определяться по сход-
ству содержания Г-фЦ в ДНК. Однако при этом необходимо
учитывать и другие, критерии сходства, так как близость соста-
5
_______„u....n <iv является обязательным признаком родства.
У эволюционно далеких организмов может наблюдаться равное
процентное содержание Г4-Ц. Так, например, человек и Bacillus
subtills имею по 40% Г4-Ц в своих ДНК. Из этого следует за
ключить, что указанный метод имеет свои ограничения и может
свидетель^ твпвать лишь о том, что организмы с различным про-
центным отношением нуклеотидных оснований не могут считать-
ся родственными. Те, у которых они близки или идентичны, мо-
гут рассматриваться, как ро. швейные, но лишь с учетом других
таксономических критериев.
Родство двух микроорганизмов связано как с композицией
ДНК в целом, так и с последовательностью нуклеотидных осно-
ваний. Определение нуклеотидной последовательности в качест-
ве одного из методов геносистематики широко применяется так-
сономистами.
' Большое значение для определения последовательности нук-
леотидов получил метод молекулярной гибридизации ДНК с
ДНК (реассоциации ДНК). С помощью этого метода можно оп-
ределить родство микроорганизмов в пределах вида по степени
гомологии (сходство последовательности нуклеотидов), если она
достигает 80—90%.
Метод позволяет судить о близком родстве по способности
денатурированных отдельных нитей ДНК одних бактерий реас-
социировать перекрестно при инкубации в определенных усло-
виях с нитями ДНК других, образовывая спиральную гибридную,
молекулу. Метод гибридизации ДНК с ДНК также имеет отно-
сительные пределы точности, так как часть оснований в образо-
вавшихся гибридных ДНК оказывается ложиоспаренпымн. Кро-
ме того, степень гомологии ДНК может существенно изменяться
в зависимости от условий эксперимента [Блохина И. Н., Лева-
нова Г. Ф., 1976; Nester Е. et al., 1978; Bredley S., 1980].
Применяют и другие методы геносистематики [Петров-
ская В. Г., 1982].
Числовая таксономия — «исто математический метод класси-
фикации, где устанавливается родство между какими-либо груп-
пами бактерий по определению сходства многочисленных ха-
рактеристик. Метод стал доступным для исследователей с раз-
витием компьютерной техники В нумерической таксономии ос-
новной принцип иметь достаточное число признаков. По мне-
нию одних ученых, ценность признаков не имеет значения, тогда
как другие считают отдельные свойства сравнительно более ве-
сомыми. При испытании большого числа штаммов бактерий в
многочисленном ряде тестов применяют программу ЭВМ для
калькуляции коэффициента сходства каждой пары микроорга-
низмов и для составления на этой основе матрицы сходства
(дендрограммы). Те, что имеют более 90% сходства, обознача-
ют как единый вид; другие, более отличающиеся, классифициру-
ют как разные виды, на уровне 70% сходства образующие род
[Nester Е. et al., 1978; Jones D., Sackin M., 1980].
Однако еще ие решено — какой процент сходства должен
быть выбран, чтобы показать родство бактерий на уровне вида
и рода? Для всех ли групп бактерий он одинаков? Как много и
какие тесты должны быть избраны для таксономического экспе-
римента? и т. д. Поэтому в настоящее время таксоиомисты счи-
тают, что наиболее эффективным является сочетание методов
геносистематики и числовой таксономии с классическим, осно-
ванным на определении морфологии, ферментативных Свойств и
антигенной структуры бактерий.
В «Определителе бактерий Берги» (1974) использованы ре-
зультаты исследований энтеробактерий методом установления
гомологии по нуклеотидному составу ДНК (процент содержания
Г4-Ц), являющегося, как уже било сказано, одним из относи-
тельно эффективных методов геносистематики. Содержание
Г4-Ц в ДНК энтеробактерий установлено в пределах 39—59%.
«Определитель бактерий Берги» последнего издания получил
широкое международное признание. На этом основании настоя-
щее руководство базируется на классификации и номенклатуре
энтеробактерий по Bergey's Manual of Determinative Bacterio-
logy (1974). Помимо этого полного издания, был составлен его
сокращенный вариант, опубликованный в СССР иа русском
языке — «Краткий определитель бактерий Берпи» (1980).
По «Определителю бактерий Берги» (1974) Семейство Enlero-
bacteriaceae отнесено к Части 8 — грамотрицат'ельиым факуль-
тативно-анаэробным палочкам и имеет следующее определение.
। Семейство I. Enterobacteriaceae^Rahn' 1937 объединяет об-
ширную группу 1грамотрицательнь1х лалодек. гподвижньх пери-
трихов или неподвижных< образующих или не образующих кап-
су ты± Энтеробактерии спор ие образуют, • ие кислотоустойчивы.
Аэробы или факультативные анаэробы: Растут иа обычных пи-
тательных средах, но некоторые нуждаются в специальных рос-
товых добавках; питание осуществляют за счет органических
соединений; механизм. метаболизма, дыхательный и фермента-.
.тивньцу Образую т кисло.у при ферментации глюкозы, а также
других угдеродов^и спиртом с образованием гдзд < без газппб-
^разованияд Каталазопопо' <г ельны, за исключением одного се-
ровара нигелл (S. dysenteriae 1); окендазоотрицательны. Вос-
станавливают нитраты до лнтритов, за исключением некоторых
штаммов Erwinia. Содержание гуанина + цитозина (G-|-C) в
дезоксирибонуклеиновой хистоте равно 39—59 моль%.
Типовой род: Escherichia Castellani Chalmers 1919. (Типовой
род определен Юридической комиссией Международного коми-
тета систематической бактериологии в 1958 г.)
Семейство Enterobacteriaceae разделено на группы (трибы),
роды и виды. Рчодн объединены в группы иа основе гомологии
нуклеотидного состава ДНК.
К группе I (Escherichieae) отнесены роды Escherichia,
Edwardsiella, Citrobacter, Salmonella, Shigella; к группе II
(Klebsielleae) — Klebsiella, Enterobacter, Hafnia, Serratia; к
7
аблмца 1. Классификация семейства Enterobacterlaceae [no Bergey's Ма-
.05 Jeteripinative Bacteriology. 1974]
> 1W ’ 'W'
W F« - Подрод Вьд Групп»***
' ч Л Escherichia* i V -H. Edwardslella III. Clirobacler IV. Salmonella ! 1 V. Shigella £ q VI. Klebsiella A j VII. Enterobac- ter VIII. Hafnla % IX. Serratia X. Proteus XI. Yersinia XII. Erwinia H 1 |4 I II III IV 1. E. coli 1. E. tarda 1. C. freundii 2. C. intermedins 1. S. cholerae-suis** 2. S. hirschfeldii (S. paraty- phi C) 3. S. typhi 4. S. paratyphi A 5 S. schottmuellerl (S. par ityphi B) 6. S. typhimurium 7. S. enteritidis 8. S. gallinarum 9. S. salamae 10. S. arizonae 11. S. houtenae 1. S. dysenteriae 2. S. flexneri 3. S. boydii 4. S. sonnei 1. K- pneumoniae 2. K. ozaenae 3. K. rhinoscleromatis 1. E. cloacae 2. E. aerogenes 1. H. alvei 1. S. marcescens 1. P. vulgaris 2. P. mirabilis 3. P. morganii 4. P. rettgeri б; P. inconstans (Providencia) 1. Y. pestis 2. Y. pseudotuberculosis 3. Y. ente.-ccolitica \ f ' V t,i \ « V ,, f 1. Amylovora (со- держит 6 видов) 2. Herbicola (со- держит 3 вида) В. Carotovora (со- держит 4 вида)
• Здесь и далее авторы номенклатурных определений н другие данные не указаны.
• В таблицу включены некоторые серовары сальмонелл, особо отмеченные в «Опре-
делителе бактерий Берги».
Термин «Группа» в данном случае относится к роду Erwinia и соответствует таксо-
номическому понятию «кластер».
8
группе III (Proteeae) — Proteus; к группе IV (Yersinieae) —
Yersinia и к группе V (Erwinieae) — род Erwinia.
Основными таксономическими категориями признаны род и
затем вид. Рассматриваемое семейство состоит из 12 родов, ко-
торые имеют различное число видов. Особые таксоны внесены
в два наиболее обширных рода: Salmonella, который по фермен-
тативным признакам подразделен на 4 подрода, и Erwinia, где
имеется 3 группы, объединяющие 13 видов, 2 из которых имеют
варианты. В табл. I представлена классификация семейства
Enterobacteriaceae.
В табл 2 отражены основные биохимические характеристи-
ки и нуклеотидный состав ДНК бактерий всех родов, входящих
в главные группы (трибы), кроме V группы — Erwinieae [Ber-
gey’s. 1974).
Таксономические определения отдельных родов семейства
Enterobacteriaceae, представленные в Bergey’s Manual (1974),
здесь опущены. В соответствующих разделах настоящего руко-
водства приведены морфологические, биохимические и другие
свойства бактерий, существенные для идентификации родов, а
также для внутриродовой дифференциации.
Целесообразно остановиться немного на правилах номенкла-
туры бактерий. Бактерии отнесены к особому царству — Ргоса-
ryotae, представители которого отличаются от других живых су-
ществ в основном тем. что их генофор («ядро») состоит из ну-
клеоплазмы, не отделенной ядерной мембраной от цитоплазмы.
Разнообразие микрофлоры и ее особенности сделали необходи-
мым создание для правильного наименования бактерий особого
кодекса взамен ботанического, которым пользовались с момента
возникновения бактериологии. Работа в этом направлении про-
водилась с 1930 г., но лишь в 1976 г. был окончательно состав-
лен и утвержден Юридической комиссией Международного ко-
митета систематической бактериологии первый Международный
кодекс номенклатуры бактерий, полностью введенный в дейст-
вие (вместе с номенклатурой видов)* с 1 января 1980 г.
В основных разделах Международного кодекса и приложе-
ниях изложены все подробности о таксономических категориях,
их обозначениях, обязательной терминологии, орфографии, пра-
вилах оформления новых названий, публикации открытий и ряд
других положений, направленных на предотвращение различ-
ных ошибок и недоразумений.
Согласно правилам Международного кодекса название ви-
да — бинарная комбинация, состоящая из названия рода и еще
одного слова — видового эпитета. Все бактерии пишут по-патыни
(род с большой буквы, а видовые эпитеты, даже происходящие
от фамилий, с маленькой), например Shigella Hexneri. Рекомен
дованы также термины для внутриподвидовых названий' «био
* Approved lists of bacterial lames (I960). Русское издавав. — Одобрен-
ные списки названий бактерий (1982).
Та-блацг Я Основные биохимические характеристики гла иных групп Entero-
. . > Тест яли субстрат 1 Групп । (триба) I
Escherichia Edward- slella Glrobader Salmonella Shi- gella
Каталаза Оксидаза В' Г алактозидаза Газообразование из глюкозы при 37 °C KCN Myi.JT (кислота) Редукция нитратов Г+Ц, моль% + + + + + 5b--51 +11 +11+ -1-1+ ++++ + D + D D + 50-53 + 111 0.1 О
Углевод г:
Л ючит — — — — —
Арабинозе + — + +
Дульцит d — d D d
Эскулни d — d —
Ниозит — — —— d
Лактоза +/х — +/x D D
Мальтоза + + + +
Манпнт + — + + D
Салпиин d •— d — —
Сорбит + — + +
Сахароза d —— d — D
Трегалоза + — + +
Ксилоза d —— + + D
Источники
Цитрат Глюконат — — + + —
Малонат — d и —
d-Тартрат Реакция с метиловым красным d + + + + D + +
Реакция Фогег. - Проскауэра — — —
Белковые
Лргиннн Желатин (гидролиз) d — d + D —
'Сероводород на TSI (трехса- яарный «гар с железом) Индол + + + D D + D
Лизин (декарбоксилирование) + + +
Орнитин Мочевина (гидролиз) d + d (+) + d
Глутаминовая кислот. —— — —
Фенилаланин —
Условные обозначения: + реакции полой, г jj.br е; — р-лкцнн отрицатель-
реакции 1 — различные реакция дают р <зиыь штаммы очного вида или серовчря; X —
Примечание Род Erwinia (группа V, отсутствует в оригинале таблицы.
10
bacterliicei t e I по IV (no Bergey's Manual of Determinative Bacteriology, 1974)
Группа 11 Группа III Группа IV
Klebalella Enlerobacter Hafnia Serratia Proteus YerMnla
СП +,+ + + + + d 4- 52—59 + + 4- + + 52-57 + + d + + 53-59 s + 1 1 Q+ +g[ + 4- + 45-47
(инслотообраэование)
d + — d D D
+ + 4- — — +
—— ——
D —. — d D
+ D —— d D
J + — .— —
+ 4- + D +
+ 4- + D +
+ — + d D
I- + — D
+ -/X + D D
+ + + d +
+ + d D D
углерода
d + + +
4 I- + + +
3 +
d — D
D D + + I) + d +
реакции
D
(d) (+) + D —
— — — D D
d — — D D
d D + + d
+ + 4- D D
d (d) — D D
+
+ —
(J-) реакции положительные замедленные; D — виды одного во - чают вяалнчиые
поздние и иев-гуяяриыг лмттылыг р^икцнй. «много рода дают ря яичные
II
.Таблица 3. Наименование родов и видов энтеробактерий (по «Одобрен-
Cltrobsctei Edward- aielli Entero- bacter Erwinia Escherichia Hrfnia Klebsiella
С. diver- SUS С. frcun- <lii С. koseri E. angu- illimorti- fera E. tarda E. aero- genes E. agglo- merans E. cloa- cae E. amylovora E. ananas E. cancerogena E. carnegieana E. carotovora E. chrysanthemi E. cypripedii E. dissolvens E. herbicola E. mallotivora E. milletiae E. nigrtfltiens E. nimipessura- lis E. paradisiaca E. quercina E. rhapontici E. rubrifaciens E. salicis E. stewartii E. trachephila E. uredovora E. ad> carbo- xylata E. blat- tae E. coli H alvei K. mobilis K-ozaenac K. oxytoca К p.ieunio- niae K. rhino- scleroma- tis
• Списки составлены в алфавитном порядке.
Вар», «серовар», «фаговар» и другие вместо «биотип», «серо-
тип», «фаготип». Введение суффикса «вар» взамен «тип» объяс-
няется необходимостью резервировать в бактериологии это сло-
во для чисто классификационных целей (голотип, неотип ит. д.).
Термин «тип» используют в смысле «номенклатурный тип», обя-
зательный для каждой таксономической категории. При этом
название более высокого таксона должно происходить от «но-
менклатурного типа» более низкого ранга. Например, для се-
мейства Vibrionaceae типовым родом (type genus) является
Vibrio. Это правило применено еще не во всех случаях. Однако
именно в связи с этим Юридической комиссией Международно-
го комитета систематической бактериологии в 1979 г. было при-
нято решение об изменении наименования семейства Enterobac-
teriaceae с типовым родом Escherichia на Enterobacteraceae с ти-
повым родом Enterobacter. Естественно, что это не нашло отра-
жения в 8-м издании «Определителя бактерий Берги».
Однако вопрос о наименовании рассматриваемого семейства,
несмотря на указанное решение Международного комитета по
систематике бактерий, продолжает дискутироваться. Олин из со-
ставителей Международного кодекса номенклатуры бактерий —
S. Lapage (1982) еше раз подчеркнул правильность принятого
решения. В- поитивоположность этому опубликованы другие
12
•ым спискам названий Ьгктернй», 1980)*
AVuganella Proteus Provldencta Salmonella Serratia Shigella Yersinia
М. шог- ganii Р. incons- lans Р. mirabi- lis P. morga- uii P. myxofa- ciens P. retf.gi ri P. vulgaris P. aka- lifaciens P. re'tge- ri P. stua- rtii S. ari- zonae S. chole- nesub S. ente- ritidis S. lyplii S. typhi- muriuin S. fonlicola S. liquc- faciens S. marce- scens S. marino- i ubra S. odori- lera S. plymu- Ihica S. protea- maculans S. rubidaea S. boydii S. dysen- teriae S. flex- neri S. sonnet Y. entero- colitica Y. pestis Y. philomi- ragia Y. pseudotu- berculosis Y. ruckeri ,
предложения. Так, J. Fanner HI, D. Brenner и W. Ewing (1980)
наслаивали на консервации прежнего наименования семейства
(Enterobacteriaceae) с типовым родом Escherichia, вопреки пра-
вилам Международного кодекса номенклатуры бактерий.
В 1981 г. Юридическая комиссия Международного комитета си-
стематической бактериологии восстановила прежнее наимено-
вание семейства. Однако в 1982 г. М. Goodfellow и Н. Тгйрег в це-
лях соблюдения правил Международного кодекса номенклатуры
бактерий, предложили совершенно новое название семейства —
Escherichiaceae с. прежним типовым родом Escherichia. Послед-
нее предложение было единогласно отвергнуто Юридической
комиссией Международного комитета систематической бакте-
риологии и еще раз подтверждено ею на XIII Международном
микробиологическом конгрессе (Бостон, 1982) преимущество
сохранения прежнего наименования семейства — Enterobacte-
riaceae с типовым родом Escherichia, как исключение из правил
Международного кодекса номенклатуры бактерий [Brenner D.,
1983]. Эти решения, по-видимому, должны завершить затянув-
шуюся дискуссию
Составители «Опредетителя бактерий Берги» (19«М) отмети-
ли неудовлетворительное состояние классификации и номенкла-
туры многих Таксономических групп бактерий, а также их опи-
саний, частично завершенг’ых еще к 1970 г. Работа в этом на-
*4 правлении продолжена и в следующее изданий книги предпола-
тается внести ряд дополнений и изменений.
В опубликованных «Одобренных списках названий бактерий»
нет упоминания о семействе Enterobacteriaceae, как об отдель-
ной таксономической категории, что следует рассматривать как
недоразумение. Название родов и видов этого семейства в
«Одобренных списках названий бактерий» представлены в
табл. 3. Как видно из данных табл. 3, среди упомянутых пред-
ставителей перечисленных родов указаны микроорганизмы, не
имеющие значения в медицинской патологии. Кроме того, от-
дельные энтеробактерии отнесены одновременно к двум родам
(например, Morganella morganii и Proteus morganii; Proteus rett-
Таблица 4. Классификация семейства Ent xobacteriaceae [Edwards P.,
Ewing W., Identification of Enterobactei idceae, 1972]
Триба Род Вид
I. Ebvherichi ае II. Edwardsielleae 111 Salmonelleae IV. Klebsidleae V. Proteeae 1. Escherichia If. Shigella I. Ed“ ardsiella I. Salmonella 11. Arizona III. CUrobacter 1. Klebsiella 11. Enlerobacter III. Pectohacterium IV. Serratia V. Proteus I. Providencia 1. E. coli 1. S. dysenteriae 2. S flcxneri 3 S. boydii 4. S. sonnei 1. E. tarda 1. S. chclerae-suis 2 S. typhi 3. S. enlerilidis .1. A. hinshawit 1. (\freundii 1. K. pneumoniae 2 K. Ozaeeae 3. K. rhinosch-Tnmatis 1. E. cl< acae 2. E. ae-ogenes 3. E. hafniae 4 E. liquefaciens 1. P. carotovorum 1. S. marcescens (inarcescens) la. S. inarcescens (kiliensis) 1. P. vulgaris 2. P. mirabiiis 3 P morganii 4. P. rettperi 1 Г alcalifaciens 2 P stuartii
При ur пае. Первый вид, указанный в каждом роге, катается типовым видом
(type apeclea).
geri и Providencia rettgeri и др.). Нет сомнений, что и этот
документ 1 ребует дальнейшего совершенствования. Его состави-
тели во введении подчеркнули, что в их «компетенцию входили
только номенклатурные вопросы, но не таксономические».
В связи с изложенным мы не можем рекомендовать «Одоб-
ренные списки названий бактерий» для работы по идентифика-
ции энтеробактерий
В периодической литературе, учебниках и многих руковод-
ствах представлена классификация рассматриваемого семей-
ства, которую предложил W. Ewing, поэтому целесообразно для
справок и сопоставлений привести и его схему (табл. 4).
Однако н в классификацию, представленную в табл. 4, вне-
сены уже значительные изменения (Brenner D. et al., 1978].
Так, в семейство Enterobacteriaceae включена триба Yersinieae,
пополнены отдельны» роды, принадлежащие к трибам Klebsiel-
leae, Proteeae и Salmonetleae. Добавлены новые виды (напри-
мер. Klebsiella oxytoca, Proteus myxofaciens) или виды, уже из-
вестные под другими названиями (например, Enterobacter ag-
glomerans, именуемый в 8 м издании «Определителя бактерий
Берги». Erwinia herbicola) В то же время Erwinia в ранге три-
бы не фигурирует. Эту измененную схему классификации в не-
которых руководствах [Mac Faddin J., 1981] именуют по месту
ее разработки — CDC, сокращенно от Center for Disease Control
(СШЛ).
Все изложенное в данном разделе вместе с приведенными
примерами свидетельствует об отсутствии общепринятой систе-
мы объективных таксономических критериев, достаточно убеди-
тельных для микробиологов различных стран и разных научных
направлений. По-вилимомх. в ближайшие годы таксономия и
номенклатура семейства Enterobacteriaceae будут пересмоюены
в свете новых данных и утверждены Международным комитетом
систематической бактериологии с тем, чтобы стать руководящим
документом для бактериологов всего мира. В 1984 г. вышло 9-е
издание Bergey's Manual of Systematic Bacteriology, где приве-
дена новая классификация семейства Enterobacteriaceae (см.
Приложена I- 1).
• i 1 Глава 2
' FST>r ) rrj ________________
h.!!;•,€К" v
*... ОСНОВНЫЕ ПРИНЦИПЫ И ЭТАПЫ
-*>- БАКТЕРИОЛОГИЧЕСКОГО ИССЛЕДОВАНИЯ
• • !
Принципы бактеоиологического исследования, реализация
которых имеет важнейшее значение для его эффективности, сле-
дующие .
' 1. Обдуманный квалифицированный выбор материала, под-
лежащего исследованию; для клинических образцов — е учетом
характера и локализации патологического процесса, патогенеза
заболевания и его стадии; для объектов окружающей среды —
с учетом возможного значения их в качестве путей и факторов
передачи микроорганизмов — возбудителей инфекции, значения
в патологии человека, возможных сроков сохранения этих мик-
роорганизмов з тех или иных объектах.
2. Отбор проб материала для исследования в необходимом и
достаточном объеме с исключением возможности его дополни-
тельной контаминации. Обеспечение наиболее благоприятных
условий и сроков доставки материала для сохранения жизне-
способности искомых бактерий и подавления конкурирующей ,
микрофлоры, при наличии таковой в исследуемой материале.
3. Выбор оптимальною набора соответствующих питатель-
ных сред для первичного посева и накопления возбудителя с
учетом характера материала, свойств искового микроорганизма
и посевных доз.
4. Соблюдение классических принципов тщательг ,го изуче-
ния посевов на пластинчатых средах и правил отбора необходи-
мого числа колоний для выделения чистых культур и дальней-
шего их изучения.
5. Изучение фенотипических характеристик выделенных чис-
тых культур в первую очередь биохимических свойств с макси-
мально возможной стандартизацией условий их определения (в
частности, с использованием коммерческих питательных сред и
соответствующих реактивов)
При сомнении в чистоте культуры рассев на пластинчатые
среды (неингибирующие или слабоингибирующие).
6. Определение согласно классификационным таблицам так-
сономического положения выделенной культуры в соответствии
с задачами исследования (родовой, видовой, внутривидовой при-
надлежности).
Основанное на указанных принципах бактериопогическос ис-
следование проводят поэтапно! в определенной последователь-
ности.
1. Посев доставленного материала на пластинчатые среды и
среды обогащения Для некоторых видов материалов осуществ-
16
ляют предварительную подготовку йх для посева, а затем инку-
бацию посевов для всех видов при условиях, соответствующих
свойствам искомых бактерий.
2. Изучение чашек с посевами на пластинчатых средах и вы-
сев со сред обогащения на соответствующие пластинчатые сре-
ды. Выделение чистых культур из намеченных колоний для
дальнейшего изучения с использованием для этого комбиниро-
ванных сред для первичной идентификации.
3. Учет результатов посева в комбинированные среды после-
18—20 ч инкубации. Изучение морфологических и тинкториаль-
ных свойств. Посевы для воспроизведения тестов минимального,
дифференцирующего ряда. При предположении о выделении ши-
гелл или сальмонелл и наличии соответствующих эпидемиоло-
гических данных возможно ориентировочное изучение культур
в реакции агглютинации с поливалентными сыворотками и в
пробах с поливалентными бактериофагами.
4. Определение рода, а в ряде случаев и вида на основании-
учета результатов посевов в среды минимального дифференци-
рующего ряда. Серологическая идентификация видов (серова-
ров) для некоторых энтевобактерин. Посевы для определения,
дополнительных биохимических при шаков (при необходимости)..
5. Учет дополнительных биохимических тестов. Определение,
эпидемиологических маркеров.
МАТЕРИАЛ ДЛЯ ИССЛЕДОВАНИЯ
ОТБОР МАТЕРИАЛА И ТРАНСПОРТИРОВКА ПРОБ
При бактериологическом исследовании отбор материала ю
транспортировка проб являются ответственным этапом работы,,
в известной мере предопределяющим ее результаты. Успех ис-
следований по выделению тех или иных энтеробактерий из раз-
личных клинических материалов обеспечивается за стенами ла-
боратории или, как пишет S. Т. Cowan (1974), «у постели боль-
ного». Рстественно, что эффективность деятельности бактерио-
логической лаборатории зависит от многих факторов, но все по-
следующие усилия могут оказаться бесплодными, если на пер-
вом этапе допущены ошибки. Какой материал, в какие сроки,,
как брать — эти вопросы решают лечащие врачи или врачн-эпн-
демиологи, проводящие эпидемиологическое расследование. Во-
взаимопонимании и контакте этих специалистов с бактериолога-
ми. в знании патогенеза заболеваний, в неформальной подготов-
ке среднего медицинекого персонала, контроле за его деятельК"-
стью — залог правильных решений и действий по отбору и до
стачке материалов для исследования. В каждом конкретном^
случае необходимо учитывать клинические проявления заболе-
вания, его сроки, анамнестические данные, конкретную эпиде-
миологическую ситуацию, предполагаемый диагноз, преиму-
щественную Г „ализшию возбудителя на разных этапах лато-
2—817 - 17-
It. •*/ «г • Ь. 1
' генезе и показания к обследованию. Так, при заболевании брюш-
. «ым тифом в паратифами А и В важнейшим ранним методом
лабораторной диагностики является метод гемокультур, а иссле-
дование испражнений в эти же сроки является неоправданным.
В то же время при других сальмонеллезных инфекциях, дизен-
2 терии, прочих кишечных инфекциях метод копрокультур (иссле-
дование испражнений) наиболее эффективен с первых часов за-
болевания, а исследование крови на гемокультуру является ма-
лопродуктивным или просто ненужным. Известно, что энтеро-
бактерии вызывают заболевания н с некишечной локализацией
(патологического процесса. Это могут быть инфекции верхних
дыхательных путей, бронхолегочная патология, воспалительные
процессы желче- и мочевыводящих путей, раневые инфекции и
гнойно-септические заболевания, инфекции женской половой
•сферы и др. Исходя из этого, материалом для бактсриологиче-
•скпх исследований могут служить испражнения, рвотные массы,
промывные воды желудка, кровь, моча, слизь из зева и носа,
мокрота, желчь (дуоденальное содержимое), пунктат костного
мозга, соскоб розеол, гной, экссудат, пунктат различных орга-
нов, спинномозговая жи ткость, раневое отделяемое, отделяемое
цервикального канала матки, женское грудное молоко, содержи-
мое червеобразного отростка, желчного и мочевого пузыря при
•оперативных вмешательствах. При аутопсии исследованию под-,
гаергают кровь из сердца и синуса твердой мозговой оболочки,
кусочки органов (легкое, печень, почки, селезенка, мозг, матка),
.лимфатические узлы, отрезки тонкого, толстого кишечника,
желчного и мочевого пузыря и их содержимое, плевральный п
перитонеальный экссудаты и др. Отбор клинических материалов
следует проводить до применения антибиотиков и других химио-
терапевтических препаратов. Общим требованием к процедуре
•отбора проб клинических материалов является обеспечение
условий, исключающих контаминацию их за счет смежных обла-
•стей кожи, других органов н т. ц. Особенно важно обеспечить
асептические условия сбора тех материалов, которые в норме
не содержат микроорганизмов (кровь, спинномозговая жидкость
и др.). Ориентировочные рекомендации, касающиеся количества
•отбираемого материала, следует уточнять, корригировать с уче-
том выраженности клинической картины, дня заболевания
и т. п.; Так, например, объем крови для посева на гемокультуру
увеличивают от 5—10 до 20 мл при стертой картине заболева-
ния и в более поздние сроки. Эффективность и достоверность
результатов исследования секционного материала тем выше,
чем скорее после наступления смерти возможно получить мате-
риал для исследования.
Материалы, подлежащие бактериологическому исследова-
нию, собирают в стерильную посуду (банки, пробирки, флако-
ны), которую хорошо укупоривают, снабжают этикеткой с фа-
милией обследуемого и наименованием материала; надписи сле-
дует делать шариковой ручкой или карандашом, но не химиче-
18
скими чернилами (во избежание размывания). Каждый образен,
материала помещают в отдельную емкость. В сопроводительном
документе (направлении) необходимо указывать, какое учреж-
дение направляет материал, фамилию, имя, отчество и возраст
обследуемого, место работы; для детей — название детского уч-
реждения, школы, дату заболевания, предполагаемый диагноз
или показания к обследованию, дату и час взятия пробы ма-
териала, фамилию и должность лица, направляющего материал.
Испражнения. Оптимальным с точки зрения возможности
выделения возбудителя является получение испражнений сразу
после дефекации. Сбор их осуществляют из судна,, горшка, пе-
ленки, специальных лотков или другой посуды, тщательно де-
зинфицированной осветленным раствором хлорной извести (кар-
боловая кислота и лизол не пригодны) и многократно отмытой
горячей водой для полного удаления следов дезинфектанта. При
наличии патологических примесей (гной, слизь, хлопья) их обя-
зательно включают в отбираемую пробу. При невозможности
получения испражнений после дефекации материал собирают
непосредственно из прямой кишки с помощью ректальных ват-
ных или ватно-марлевых тампонов (укрепленных на деревянной
палочке или проволочной петле). Ректальный тамтюн вводят в-
прямую кишку на 8—10 см. При обследовании на носительство
сатьмонелл взятие материала ректальными тампснами малоэф-
фективно, в связи с чем у здоровых людей при отсутствии про-
тивопоказаний, выявленных лечащим врачом, целесообразно-
брать испражнения после дефекации, вызванной приемом соле-
вого слабительного (25—30 г сульфата магния или 10—15 г
глауберовой соли), обладающего одновременно желчегонным
действием. Эффект действия слабительного не всегда наступает
через обычно упоминаемые 2—3 ч и у многих людей имеет мес-
то лишь к следующему дню. Испражнения собирают указанным-
выше образом нз суден, горшков и др. или ректальным тампо-
ном из прямой кишки, но после днфекацнп
Весьма желательно посев испражнений осущеС1Влять непо-
средственно после их сбора или в пределах двухчасового пе-
риода; если это не удается, необходимо законсер-чровать мате-
риал, т. е. обеспечить стабилизацию количественных соотноше-
ний в микробной ассоциации с тем, чтобы преобладающая со-
путствующая флора при размножении не привела к отмиранию-
искомых возбудителей. Консервирование исследуемого мате-
риала может быть обеспечено воздействием физических (сохра-
нением при температуре 2—6 °C или высушиванием) и химиче-
ских факторов Наиболее широко в кач^тве химического кон-
серванта (транспортного раствора) используют глицериновую
смесь (нейтральный химически чистый глицерин и изотониче-
ский раствор натрия хлорида), для изготовления которой пред-
ложено несколько вариантов рецептуры Удобным способов
контроля качества консерванта при хранении является введение
в его состав двухцветного индикатора (метилового красного или
2*
19
i др.), по изменению окраски которого регистрируют сдвиг pH
'консерванта в неприемлемую кислую зону. Неплохие результаты
дает использование в качестве консервирующей транспортной
жидкости и буферного раствора фосфатов (pH 8,0). Кстати, при
Ц целенаправленном исследовании на наличие иерсиний следует
использовать именно фосфатный буфер, так как в присутствии
глицерина иерсинии быстро отмирают. Испражнения, помещае-
мые в жидкие консерванты, должны быть перемешаны в консер-
вирующей жидкости и по объему не превышать */3 ее. По опыту
зарубежных лабораторий неплохим консервирующим действием
обладает транспортная среда Stuart (1959), представляющая
собой раствор ряда солей натрия, калия и кальция с добавле-
нием 0,4% агар-агара. В некоторых случаях для транспортиров-
ки испражнений в бактериологическую лабораторию используют
накопительные среды (селенитовую, магниевую, желчный буль-
он или др.); при этом объем внесенных в них испражнений не
должен превышать */б объема среды; после доставки в лаборато-
рию и высева на пластинчатые среды дальнейшую инкубацию
ведут, как принято для посевов ь среды обогащения. Испражне-
ния, доставленные в лабораторию в консерванте или без консер-
ванта, до момента посева сохраняют на холоду (2—6°C). При
транспортировке проб испражнений на большие расстояния воз-
можно консервирование материала высушиванием (так назы-
ваемый метод высушенных капель). В этих случаях капши сус-
пензии испражнений наносят на стерильные полоски фильтро-
вальной бумаги (1,5—2X4—6 см), высушивают без доступа све-
та, помещают в стерильные пробирки и упаковывают так, чтобы
исключить воздействие света при транспортировке и хранении.
Кровь. Метод получения гемокультуры является убедитель-
ным при диагностике брюшного тифа и паратифов, но он может
.применяться и при лихорадочных' состояниях неустановленной
.этиологии, связанных иногда с энтеробактериями. Нанлучшие
результаты дает посев крови, взятой в самом начале заболева-
ния, даже в первые его часы, однако при отрицательных резуль-
татах исследования целесообразен повторный посев крови в те-
чение всего периода лихорадки, а также в разгаре рецидивов.
При взятии крови особённ. строго соблюдают требования асеп-
тики. Участок кожи в об части локтевой вены тщательно обраба-
тывают спиртом, смазывают йо. юм, затем вновь протирают
спиртом, после чего не следует пальпировать участок предпола-
гаемого введения иглы. Кровь берут стерильным шприцем в ко-
личестве от 10 до 15—20 мл (в зависимости от сроков заболе-
яния и выраженности клинических проявлений) и тут же у по-
стели больного с соблюдением правил ьсептики вносят во фла-
коны с десятикратнопревышающим объемом жидкой накопи*
"ельной среды (среда Рьпопорт, 10—20% желчный бульон) или
стерильной дистиллированной (по Клодницкогу), или водопро-
водной (по Самсонову) воды. Для ускорения выделения гемо-
культуры может быть использован посев по Блинкину (1948,
20
1963). В плоский флакон .(250 мл), на двух противоположных
стенках которого скошен питательный агар, содержащий 1%
глюкозы и 1% лактозы соответственно, вносят 100—150 мл
желчного бульона и посте контроля на стерильность засевают
кровь в обычном соотношении 1 : 10.
В отдельных случаях для посева на гемокультуру берут
сгустки крови, направляемой для серопогнческих исследований.
Все манипуляции при этом проводят строго асептически, после
«обведения» сгустка и отсасывания сыворотки сгусток растира-
ют в пробирке стеклянной палочкой и вносят в среду обогаще-
ния также в соотношении 1 : 10.
Рвотные массы и промывные воды желудка исследуют при
острых кишечных заболеваниях, сопровождающихся соответст-
вующей симптоматикой. Для бактериологического исследования
используют первые порции промывных вод. без добавления пер-
манганата калия (КМпО<) или других дезинфицирующих
средств. Материал (50—100 мл) доставляют в лабораторию в
стерильных банках с соблюдением упомянутых выше требова-
ний. Рвотные массы нейтрализуют 10% раствором натрия гид-
рокарбоната (NaHCOs).
Желчь (дуоденальное содержимое) подвергают исследова-
нию для выявления бактерионосителей, а также с диагностиче-
ской целью при наличии соответствующих показаний. Сбор ма-
териала осуществляют при дуоденальном зондировании (с со-
гласия врача-клинициста), собирая в отдельные стерильные
пробирки дуоденальное содержимое, пузырную желчь и желчь
из желчных протоков (порции Л, В и С соответственно). Сле-
дует обращать внимание на внешний вид получаемого материа-
ла и проверять его реакцию (pH) индикаторными бумажками.
Кислая реакция, белесоватый оттенок жидкости, наличие хлопь-
ев, свидетельствующие о примеси желудочного сока, делают ма-
териал непригодным для исследования на наличие энтеробакте-
рий.
Моча подвергается бактериологическому исследованию по
различным показаниям: выделение урннокупыуры при брюшном
тифе и паратифах (2—3-я неделя заболевания), обследование
на бактерионосительство, установление этиологии гнойно-воспа-
лнтельных заболеваний мочевой системы. После обмывания с
мылом наружных половых органов и ополаскивания стерильным
изотоническим раствором натрия хлорида область наружного
отверстия ур< тры осушпвают стерильным марлевым тампоном
или салфеткой, спускают первую порцию мочи, а среднюю (10—
20 мл) собирают стерильную баночку (флакон) с дальнейшим
оформлением и транспортировкой пробы согласно правилам,
упомянутым ранее.
Гиви, пунктаты органов, экссудат берут с помощью стериль-
ного шприца и пи ватного (марлевого) тампона, помещают в сте-
рильные пробирки и направляют в лабораторию в соответствии
с общими правилами. Пунктат костного мозга, получаемый при
21
стернальной пункции в лечебном учреждении, исследуют в осо-
бых‘случаях, когда получение культур из других материалов
оказалось безуспешным. Костный мозг (0,5—0,75 мл) вносят в
З мл стерильной бычьей желчи, желчный бульон или в среду
Рапопорт.
• Спинномозговая жидкость подлежит исследованию при забо-
леваниях, сопровождающихся менингеальным, мспипгоэпцефа-
лнтнческим синдромом. Спинномозговую жидкость получают
при люмбальной пункции в лечебном учреждении, соблюдая
при этом строжайшим образом принципы асептики. Пробу (3—
5 мл) вносят в стерильную пробирку и после соответствующего
оформления направляют в лабораторию. Во время транспорти-
ровки жидкость следует тщательно предохранять от охлажде-
ния. С этой целью пробирка с материалом может быть помеще-
на в термос.
Исследование розеол проводят при отсутствии гемо-, копро-
н уринокультур от данного больного и наличии у него хорошо
выраженных розеол. Участок кожи иад розеолой тщательно об-
рабатывают спиртом, промывают стерильным изотоническим
раствором натрия хлорида, осушивают стерильной марлей Об-
ласть розеолы подвергают скарификации, наносят на повреж-
денную кожу 1—2 капли желчного бульона, затем собирают
материал пастеровской пипеткой и засевают во флакон с желч-
ным бульоном. Материал может быть направлен в лабораторию
и в пипетке, после запаивания ее капилляра.
Операционный материал. Извлекаемые при оперативных
вмешательствах кусочки тканей, органов или их содержимое
(червеобразный отросток, желчный, мочевой пузырь), тампоны
с раневым отделяемым помещают (каждый образец раздельно)
в стерильную посуду и направляют в лабораторию, следуя об-
щим правилам.
Женское грудное молоко исследуют у больных женщин, на-
ходящихся в периоде лактации. После обмывания соска и об-
ласти кожи вокруг него мыльной водой, обработки спиртом и
обмывания стерильным изотоническим раствором натрия хлори-
да сцеживают несколько капель молока, а последующие 5—
10 мл собирают в стерильную посуду, пробу оформляют обыч-
ным порядком и направляют в лабораторию.
При наличии показаний слизь из зева и носа, отделяемое
цервикального канала матки забирают стерильными ватными
или марлевыми тампонами и либо непосредственно засевают в
< оответствующне питательные среды, либо направляют в лабо-
раторию в стерильных пробирках.
Мокроту собирают натощак. Посче того как пациент почис-
тит зубы и ополоснет рот, его просят энергично отхаркнуть
мокрогу в стерильную посуду; при наличии комочков гноя их
обязательно включают в пробу, направление в лабораторию
осуществляют по общим правилам.
Материал, полученный при патологоанатомическом вскры-
22
тии, исследуют для уточнения прижизненного диагноза или рет-
роспективной диагностики. Оптимальным с точки зрения качест-
венности, надежности результатов бактериологического исследо-
вания является отбор материала в максимально короткие сроки
(3—6 ч) после наступления смерти (ио избежание посмертной
инвазии микроорганизмов из кишечника в другие органы и тка-
ни). Материал для исслепонавия берут у секционного стола и,
по возможности, соблюдая правила асептики, здесь же подго-
тавливают материал и осуществляют его посев. Кишечное со-
держимое исследуют так же. как испражнения. Кровь из серд-
ца и желчь из желчного пузыря (3—5 мл) берут пастеровской
пипеткой. Место прободения пипеткой стенки соответствующего
органа предварительно прижигают раскаленным металлическим
шпателем или лопаточкой. Кровь засевают во флаконы со сре-
дой обогащения, желчь доставляют в лабораторию в стерильной
пробирке или проводят посев ее у секционного стола. Ткани и
органы обжигают с поверхности, затем разрезают стерильным
скальпелем или ножницами и из глубины извлекают кусочки
органа для посева методом отпечатков или для приготовления
суспензии исследуемою материала растиранием в стерильной
фарфоровой ступке с и ютоннческим раствором натрия хлорида
илн бульона. Полученную взвесь засевают на плотные питатель-
ные среды и при необходимости в среды обогащения. При пере-
сылке полученного при патологоанатомическом вскрытии мате-
риала для посевов и дальнейшего исследования в лабораторию
каждый образец органа, ткани и т. п. следует помещать в сте-
рильную посулу раздельно.
При необходимости исследования объектов окружающей сре-
ды (вида, пищевые продукты, смывы и др.) отбор и направле-
ние материала в лабораторию осуществляют согласно прави-
лам, разработанным для санитарно-бактериологических иссле-
дований.
ВЫДЕЛЕНИЕ И ПЕРВИЧНАЯ ИДЕНТИФИКАЦИЯ
При поступлении пробы исследуемого материала в лабора-
торию должны быть приняты меры по обеспечению наиболее
благоприятных условий для выделения из нее искомых микроор-
ганизмов. Следует по возможности скорее приступить к посеву
материала в питательные среды, также чрезвычайно важны пра-
вильный выбор сред для первичного посева, их качественное
приготовление, соблюдение правил техники посева и необходи-
мого режима инкубации посевов. До момента посева подлежа-
щий исследованию материал необходимо сохранять в прохлад-
ном месте, огражденном от прямых солнечных лучей.
При выборе питательных сред учитывают прежде всего про-
исхождение пробы клинического материала (испражнения,
кровь, моча и др.), предполагаемые виды энтеробактерий в со-
23
“ - ^аблица 5. Питательные среды для первичного посева в соответствии с исследуемым материалом
Исследуемив материал Энтеробактерии, которые могут содержаться в исследуемом материале Плотные среды для выделения Среды (бульоны) обогаш—ww ^5
Плоскнрева висмут-сульфит агар среды с анти- биотипами и Эндо для метода по- движного роста для протеев сч магниевая селенитовая Мюллера или Кауфмана желчный буль- он или среда Рапопорт глюкозный бульон буферная (для иеренний) £ с Эт-1 яля ЕЕ
I _ 2 3 4 5 6 7 8 9 10 п 12 13 14 15 16 17 18 19
Испражнения Shigella Salmonella Escherichia, Enterobacter, Hafnia, Serratia, Erwinia Qtrobacter Klebsiella Proteus Y. enterocolitica, Y. pseudotu- bercnlosis Edwardsiella ++ ++++ 4- 4- 4- + + 4- 4- 4- + 4- + 4- 4- 4- 4- 4- 4- + + + 4- + + 4- + + +
Кровь dysenteriae 1*, Escherichia, Citrobacter, Enterobacter S. typhi, S. paratyphi А и В (редко другие серовары саль- монелл) Klebsiella Proteus Y. enterocolitica, Y. pseudotu- be/culosis 4- + 4- + 4- 4- + 1 4- 1 + 4- + +

Рвотные массы. S. soenei (редко другие виды
промывные воды пи гели) + + 4-
желудка Salmonella + 4- 1 4- 4- 4- 4-
Escherichia, Klebsiella, Entero-
barter,. Hafnia - - 4- 4-
Citrobacter - - 4- 4- + t
Proteus 4 - 4- т
Желчь, дуоденаль- Salmonella + 4- -U 4-
ное содержимое Escherichia, Klebsiella, Entero-
barter + 4- 4-
Y. enterocolitica 4- 4-
Моча Salmonella + + 4- 4- 4- 4- 4-
Escherichia, Klebsiella, Entero-
bacter, Hafnia 4- *7” “7“
Citrobacter 4- 4— 1
ProtfcJS -г “Г т
Y. enterocolitica, Y. pseudotu-
зегсп. и„ _ 4- -г
Salmonella + + 4- 4- 4- 4- 4-
Гнои Escherichia, Klebsiella, Entero-
barter 4- 4-
Citrobacter 4- + +
Proteus 4- 4-
Y. enterocolitica, Y. pseudotu-
ЪегсикмЬ + 4- +
Спинномозговая S“hnone~a + 4- 4-
жидкость Ejcherichja, Klebsiella, Entero-
barter 4- 4-
Y. enterocolitica, Y. pseudotu- 1
berenloeis 4- т
Сосхоб с розеол S. typhi, S. paratyphi А и В 4- L±_ 1_ 4-
ко
’ -одолжение табл. '5
Плотные среды для выделения
Среды (бульоны) обогашаа»» i
Исследуемый материал 1 Энтеробактерии, которые могут содержаться в исследуемом материале 2 t : S > e < висмут-сульфит arap среды с анти- биотиками 1 № ЭМС Эндо для истода » подвижного поста >0. для протеев м т 10 at я V S я я 11 м | селенитовая _ Мюллер» млн " Кауфмана желчный буль- X ом или среда Рапопорт м глюкозный « бульон _ б, Герг»я °* (дл. иреннн!) 1 С 18 5 | Эт-1 или ЕЕ J
Операционный ма- териал Salmonella Escherichia, Klebsiella, Entero- bacter Qtrobacter Y. enterocolitica, Y. pseudotu- berculosis 4 4 4 4- 4- 4- + 4- 4- + + + + + + + +
Женское грудное молоко Слизь из зева и носа, мокрота, от- деляете церви- кального канала ' Salmonella ) Klebsiella Salmonella Ctt obacter Klebsiella, Enterobacter Y. enterocolitica, Y. pseudotu- berculosis 4 4 4 4 4 - 4- 4- 4- +4- +4-4- + + + + + + + + + + + + + + +
Материал, полу- ченный при пато- логоанатомнче- ском вскрытии Shigella Salt onella Escherichia, Klebsiella, Entero- bxter, Hafnia Citrobacter Proteus Y. enterocolitica, Y. pseudotu- berculosis 4 4 4- + 4- + + + + + + + + + + + + + + +
Условные обозначения: + рекомендуемая среда. -
япЛ»»Ы™?Л!!!?»Ги,!.Тг1гл,в1₽ S‘ dysenteriae • отмечали в период пандемии (1963—1970) дизентерии Шига в странах Центральной Америка ж
другпд региоивд мира.
ответствующей пробе, а также цель бактериологического иссле-
дования и учет другой информации (диагноз,-эпидемическая си-
туация и др.), содержащейся в сопроводительной документации.
В табл. 5 приведены различные клинические пробы, исследуемые
с целью выделения энтеробактерий; бактерии, которые могут
содержаться в пробах, и рекомендуемые плотные и жидкие пи-
тательные среды для их выделения или обогащения соответст-
венно каждой пробе.
- Из плотных сред, производящихся в нашей стране, высоко-
селективным действием в отношении сальмонелл обладает вис-
мут-сульфит агар. Селективными средами для выделения ши-
гелл служат среды с антибиотиками, а для одновременного вы-
деления и сальмонелл, и шигелл — агар Плоскнрева. В числе
коммерческих отечественных сред — агар с эозин-метнленовым
синим (ЭМС) и Эндо, будучи слабоселективными, являются в
основном дифференциальными средами. Разработаны специали-
зированные среды: для селективного выделения протеев среда
Газиумаровой (1978), а эдварлсиелл — среда Эт-2 Калины
(1981). Следует упомянуть и о предложенных оригинальных
средах для выделения сальмонелл из испражнений методом «по-
движного роста» [Литинский Ю. И. и др., 1976].
За рубежом широкое применение получили такие высокосе-
лективные среды для выделения сальмонелл и шигелл, как
SS-arap, дезоксихолатцитратный агар Лейфсона, ксилозо-лизин-
дезокснхолатный агар (XLD), НЕ-агар (Hektoen enteric) или
среды только для выделения сальмонелл — бриллиантовый зе-
леный — феноловый красный и ксилозо-лнзин-бриллиантовый
зеленый агары и др. В числе слабоселективных сред для выде-
ления энтеробактерий широко используют агар Мак Конки.
Как упоминалось, селективными средами для выделения ши-
гелл служат среды с антибиотиками, практическая разработка
которых в нашей стране принадлежит А. Б. Черномордику
(1957). В качестве их основ применяют обычные коммерческие
среды (Плоскиргва, ЭМС, Эндо) с добавлением антибиотика,
при выборе которого учитывают данные антибиотикограммы вы-
деляемых в данной местности штаммов шигелл. В числе анти-
биотиков в этих средах используют тетрациклин, стрептомицин,
левомицетин, а за рубежом нередко новобиоцин, ампициллин
и др. (в среде Мак Конки).
Предложено несколько способов внесения антибиотиков в
среду. Широко известен метод Черномордика (1958), при
которон предусматриваются две чашки Петри с какой-либо из
сред (Плоскирева, ЭМС, Эндо): в одной из чашек среда содер-
жит антибиотик, а в другой— нет. В целях экономии указанных
коммерческих питательных сред и чашек Петри были предло-
жены две модификации сред с антибиотиками с использованием
одной чашки Одна из этих модификаций Л. Б. Черномордика
и др. (1974) предполагает внесение антибиотика лишь в одну
половину чашки с какой -либо коммерческой средой, в то время
27
как другая половина чашки содержит ту же среду без антибио-
тика — метод градиентных чашек. В другой * одификации анти-
биотиком пропитывается полоска фильтровальной бумаги, поме-
щаемая под агаровым слоем, вокруг которой создается зона кон-
центрации айтибиотггха, граничащая с обеих сторон полоски с
зонами среды без илтибиотика— метод бумажной полоски,
предложенный В. К. Матвеюком (1975).
В связи с наблюдаемыми различиями в спектре антибиотнко-
устойчивости у шигелл разных видов частота их выделения на
средах с одним антибиотиком в зависимости от вида шигелл мо-
жет колебаться от 20 до 30%. С целью нивелирования этих ко-
лебаний рекомендуется внесение в соответствующую среду двух
антибиотиков с использованием двух бумажных полосок, каж-
дая из которых в отдельности пропитана одним из двух анти-
биотиков [Прямухина Н. С. и др., 1979; Черномордик А. Б.
и др., 1980].
Ценность сред с антибиотиками теснейшим образом связана
с осуществлением и оперативным учетом результатов контроля
за спектром антибиотикоустойчивости шигелл. Отмечено, что в
условиях меняющейся тактики применения антибиотиков в тера-
пии дизентерии, ветеринарной практике и др. штаммы шигелл
могут не только приобретать новые, но и утрачивать прежние
маркеры устойчивости. Последнее следует иметь в виду при кон-
струировании сред с антибиотиками [Прямухина Н. С. и др.,
1980].
Для посева проб материала, обычно содержащих разнооб-
разную микрофлору (испражнения, гной, секционный материал
и др.), наиболее целесообразно применять высокоселективные
среды, а для проб, обычно не содержащих микроорганизмы
(кровь, спинномозговая жидкость и др.), — слабоселективно-
дифференциальные среды. Однако учитывая возможность выде-
ления из испражнений или другого материала в качестве возбу-
дителей заболеваний не только патогенных, но и условно-пато-
генных энтеробактерий, которые могут сильно подавляться на
высокоселективных средах, оптимальным является одновремен-
ное применение тех и других сред.
Среды, рекомендуемые для накопления некоторых энтеробак-
терий, не выпускаются отечественной промышленностью, их гото-
вят в лабораториях в соответствии с рецептурой, прилагаемой
в специальном разделе данного руководства.
В числе указанных (табл. 5) жидких обогатительных сред
несколько сред предназначено для накопления сальмонелл. Из
них селенитовый бульон, магниевая среда, среды Мюллера или
Кауфмана рекомендуются для посева таких материалов, как ис-
пражнения, гной и др., а желчный бульон, среда Рапопорт —
для материалов, обычно не содержащих микроорганизмы
(кровь, спинномозговая жидкость и др.).
Попытки разработки специализированной среды для накоп-
ления шигелл (при исследовании клинических проб материала)
28
пока были безуспешными. В связи с этим пытались применить
для шигелл «сальмонеллезныеэ среды обогащения. Многочис-
ленными работами доказано, что из этих сред определенным
эффектом обогащения только в отношении S. sonnei обладает
селенитовый бульон, другие среды для накопления шигелл не
пригодны. По общему признанию наиболее подходящей в каче-
стве накопительной среды для шигелл служит грамнегативный-
(GN) бульон [Hajna Л., 1955]. изготовление которого в виде су-
хого коммерческого препарата осуществляется рядом зарубеж-
ных фирм (Difco, BBL и др.).
Благоприятной средой для накопления клебсиелл и энтеро
бактеров при исследовании таких материалов, как слизь из зева
и носа, кровь и др., является глюкозный бульон.
В нашей стране предложены специализированные среды (см.
табл. 5) для накопления протеев — среда П-1 [Калина Г. II.,
1975] клебснелл — среда К-1 [Калина Г. П., 1980], иерсинпй
[Ющенко Г. В., 198G], эдвардсиелл — среда Эт-1 [Калина Г. П.,
1981].
Большинство из указанных в табл. 5 плотных сред выпуска-
ются в виде отечественных сухих коммерческих препаратов. Хо-
тя приготовление этих сред очень просто, однако качество их
зависит от тщательности выполнения даже самых несложных
процедур. Так, делая навеску сухой массы, следует не только се
точно взвешивать, но и быть уверенным в исправности весо",
кроме того, важно не допускать потерь при переносе навести.
Необходимо обеспечить полное растворение порошка в соответ-
ствующем объеме дистиллированной воды, а при нагревании и
кипячении взвеси не допускать пригорания. Перед употребле-
нием среды необходимо убедиться, что она достаточно подсуше-
на и на ее поверхности отсутствует конденсационная влага.
Исследуемую пробу материала засевают прямым посевом в=
чашки с плотными селективно-дифференциальными средами и
одновременно в жидкую среду обогащения с последующим высе-
вом нз нее на указанные пластинчатые среды. На плотные высо-
коселективные среды, включая среды с антибиотиками, посевного-
материала наносится больше, чем на слабоселективиые. При
одиоврсмениом применении сред обоих типов для высева мате-
риала из одной и той же пробы посев на слабоселективную сре-
ду может быть сделан шпателей, использованным перед этим
для посева на высокоселективную среду, т е. без внес >ьи i в нее
новой порции материала.
Для посева на плотные питательные среды используют стек-
лянный шпатель или проволоку (желательно платиновую)г
вмонтированную в специальную рукоятку, которая заканчивается)
петлей. При посеве на поверхность агара у края чашки нано-
сят 1—2 капли исследуемого материала и растирают его непре-
рывными движениями шпателя на небольшом участке агараг
после чего, оторвав шпатель от поверхности, продолжают расти-
рание нм же на оставшейся не засеянной части среды. Поверх-
2»
"ость irupa в чашке Петри мгжет быть также засеяна петлей.
(Нанесенный.у края чашки исследуемый материал распределяют
> поочередно на. каждой секторной четверти агара непрерывными
движениями Петли из стороны в сторону, повертывая чашку под
углом 90°. Перед каждым последующим сектором петля должна
стерилизоваться, благодаря чему достигается рост изолирован-
•яых полонии. В среды с бумажными полосками, пропитанными
1нтибнлтнками, посевной материал наносят на агар в зоне поло-
сок, распределяя его вначале в этой зоне, а затем по остальной
поверхности агара.
Посевы выращивают при температуре 37 °C на пластинчатых
питательных средах в течение 18—20 ч (48 ч на висмут-сульфит
агаре), в средах обогащения максимальный срок инкубации по-
севов не должен превышать 18 ч (кроме желчи и крови). Это
•связано с тем, что обычно селективные среды обогащения недо-
статочно токсичны, чтобы полностью подавить рост эшерихий,
энтерококков и других непатогенных микроорганизмов. Однако
в первые 8—12 ч в селенитовой среде число эшерихий снижает-
•ся, а после 12 ч эти бактерии начинают размножаться [Leif-
•son Е., 1936]. Теоретическим обоснованием этого феномена слу-
жат данные Н. П. Чижовой (1972), исследовавшей механизм се-
.лективного (для сальмонелл) действия указанной среды.
Как известно, рост бактерий в селенитовой среде сопровож-
дается восстановлением селенита натрия до свободного селена,
но какого-либо научного объяснения неодинакового токсического
действия селена на энтеробактерии не приводилось. Оригиналь-
ными исследованиями Н. П. Чижовой были установлены разли-
чия в способах восстановления селена сальмонеллами и эшерн-
хиями. У первых этот процесс осуществляется внеклеточно, а у
вторых — внутриклеточно, что и сопряжено с гибельными для
клеток эшерихий изменениями в морфологической структуре и
• функциональной деятельности. Автором показано также, что
свойственное эшерихиям внутриклеточное восстановление селена
происходит лишь в первые 12 ч, в более поздние сроки отмеча-
ется появление и накопление селенитрезистентных мутантов
эшерихий, которые приобрели способность восстанавливать се-
лен аналогично сальмонеллам.
Таким образом, выявленные Н. П. Чижовой закономерности
являются теоретическим обоснованием необходимости непродол-
жительных (в пределах 12—18 ч) сроков выращивания посевов
в селенитовой среде.
При целенаправленном исследовании на У. enterocolitica и
У. pseudotuberculosis посевы в жидкую среду обогащения инку-
бируют в условиях холодильника (4ГС), проводя первый высев
из нее на плотную среду через 6—18 ч. Последующие высевы
делают на 2-е сутки и затем через каждые 2—4 дня на пкотя
женин 14 сут (при отрицательных результатах). Чашки с посе-
вами для выделения иерсиний инкубируют при 25—26 °C, про-
сматривая их через 18—20 ч и повторно на 2-е сутки
.30
txt. Образцы всех исследуемых материалов желательно сохра-
нить в холодильнике до следуюшею дня и при необходимости-
[Следует проводи-ь повторный высев. При невозможности сохрапе
<лия пробы в указанных условиях следует получить материал за-
ново для повторного исследования. При слишком густом росте,.
затрудняющем выделение культуры, рекомендуется рассев в
чашку с селективно-дифференци 1льпой средой.
Помимо указанных общих правил посева исследуемого мате-
риала, требуется соблюдение особенностей посева соответствен-
но характеру пробы.
Если испражнения доставлены без консерванта, их суспен-
дируют в изотоническом растворе натрия хлорида в соотноше-
нии 1 : 10. На высокбсе пективных средах количество посевного-
материала необходимо увеличить в 3—б раз jto сравнению со
.слабоселективными средами. В среду обогащения испражне'ия
вносят в соотношении 1 :5 и тщательно перемешивают. Прн
взятии материала ректальным тампоном его погружают в среду
обогащения. Пробирки с посевами помещают в термостат, а
по окончании инкубации делают высевы па плотные селектнвно-
дифференцна льные среды.
Кровь. После посева крови, выполненного как указано вы-
ше, и инкубации в термостате трехкратно делают высев (еже-
дневно) на плотные среды Эндо, ЭМС или елааошелочной агар,,
а при отрицательном результате — еще на 6 е и 10-е сутки.
При посеве рвотных масс и промывных вод желудка с
целью накопления возбудителя используют соответствующие-
среды двойной концентрации при соблюдении соотношения за-
севаемого материала и среды 1:1.
Желчь (дуоденальное содержимое) засевают во флаконы с
50 мл питатг льного бульона в соотношении I : 10 и на плотные
селективно-дифференциальные среды. Оставшуюся желчь также-
помещают в термостат.
Мочу после центрифугирования или без него з..севают в сре-
ды для обогащения двойной концентрации в соотношении 1:1.
Гной, пунктаты органов, экссудат, слизь из зев^ и носа, мок-
роту, отделяемое цервикального канала матки засевают в жид-
кие и плотные питательные срелы для обогащения и выделения.
Спинномозговую жидкость центрифугируют н осадок засева-
ют на питательные среды для обог щепия и выделения.
Соскоб с розеол засевают, как указано выше, в среду обога-
щения.
Операционный материал — содержимое удаленного червеоб-
разного отростка или кусочек другого органа (ткани), желчного
и мочевого пузыря исследуют, как испражнения, желчь и мочу,
соответственно.
Женское грудное молоко засевают в жидкие и плотные пи-
тательные среды для обогащения и выделения
Материал, полученный при патологоанатомическом вскры-
тии, засе нот либо непосредственно на плотные среды прикос-
31-
«вовением (отпечатком) поверхности среза органов к агару, либо
*тщательно измельчают в стерильных фарфоровых ступках при
добавлении небольшого количества жидкости (питательный
бульон, изотонический раствор натрия хлорида). Полученную
взвесь засевают на плотные среды и, если это необходимо, в
среду обогащения. Кровь, мочу, желчь исследуют соответственно.
Изучение и интерпретация характера роста иа плотных сре-
дах как предварительный этап* идентификации микроорганизмов
требуют большой тщательности и определенного практического
опыта. От начальной оценки колоний в первую очередь зависит
исход бактериологического исследования. При этой оценке учи-
тывают различные характеристики колоний, относительное чис-
ло колоний каждого типа, чистоту культуры, видимые реакции
в среде, наступающие в результате метаболизма бактерий.
Визуальную характеристику колоний получают, держа чаш-
ку в одной руке и осматривая поверхность агара на наличие
микробного роста, а также просматривая его в проходящем
дневном или искусственном свете. Во время осмотра чашку на-
клоняют в разных направлениях при достаточном освещении
так, чтобы свет мог падать под различными углами; кроме того,
можно применять также ручную лупу.
В числе характеристик колоний учитывают их размер (диа-
метр в миллиметрах), форму, возвышение над поверхностью
(плоская, выпуклая), особенности края (ровный, волнистый
я др.) и поверхности (блестящая, матовая и т. д.), цвет, плот-
.ность (прозрачная, мутная) и консистенцию (вязкая, пленчатая
•и др.).
Обращают также внимание на возможное образование пиг-
мента, наличие специфического запаха, изменение цвета среды.
Бее эти признаки колоний и другие культуральные свойства
энтеробактерий различных родов подробно описываются в соот-
ветствующих главах. Решающее значение при оценке роста эн-
теробактерий на пластинчатых средах имеет дифференциация
зю окраске изолированных колоний, зависящей от отношения
бактерий к дифференцирующим компонентам сред.
В качестве дифференцирующих субстратов в средах для вы-
деления энтеробактерий используют углеводы, аминокислоты
и др., утилизация которых выявляется с помощью различных
индикаторов (табл. 6, 7).
ч Дифференцирующим субстратом в среде Плоскирева, Эндо,
.Мак Конки служит лактоза, по отношению к которой отличают
бесцветные колонии бактерий, не ферментирующих этот углевод
(шигеллы, сальмонеллы и др.), от окрашенных колоний бакте-
рий, обладающих этой способностью (большинство эшерихий,
клебсиелл, энтеробактеров, некоторые представители цитробак-
теров и др.).
Единственным, дифференцирующим признаком на висмут-
сульфит агаре служит образование сероводорода, при наличии
которого колонии имеют черную окраску с металлическим блес-
£2
3-817
Таблнца 6. Харагтерисп.ча колоний энтеробактерий на высокоселективно-дифференциальных средах
Цвет колоний-Ъ записи KociJ^oi
Среда Дифференци- рующие ком по- Индикатор ферментации углеводов образования сероводорода декарбокеинровашя лизина
ненты + — -н — + —
Б зитоагар Пло- схирева В зсмут-с, лъфит агар &>-згар Д»зогсиголат- iihtdi гиыЛ агар Лейфсоаа НЕ-агар XLD-arap Эт-2 Лактоза Глюкоза, сульфит висмута Лактоза, тиосуль- фат натрии Лактоза, тиосуль- фат натрия Лактоза, сахаро- за. салицин, тио- сульфат натрия Лактоза, сахаро- за. ксилоза, ли- зни. тиосульфат натрия Глюкоза, маннит, лизни, тиосульфат натрия Нейтральный красный Сульфат железа Нейтральный красный. цитрат железа Нейтральный красный, цитрат железа Бромтимоловый синий. кислый фуксии, аммоннй- железа цитрат Нейтральный красный. аммо- ннй-железа цит- рат Аммон нй-железа цитрат Розовый, красный Красный То же Оранжевый, желтовато- PO3OL—1й Желтый Бесцветный » » Снне-зеле- ный. зеленый Бесцветный Черный, зеле- ный С черным цен- тром То же » > » » Бесцветный Без черного центра То же » » » » Красный С черным цен- тром Бесцветный Без черного центра
Таблица 7. Xi t ктеристик! колоний энтеробактерий на слабоселективно-
дифференциальных средах
• Среда ш Дифференци- рующие компо- ненты Индикатор Цвет колоний в зависимости от фермевтацвн углеводов
+ —
ЭМС Эндо Мак Конки Лактоза, саха- роза Лактоза > Эозин, метиле- новый синий Основной фук- син Нейтральный красный Темно-синий с ме- таллическим блес- ком, розовый Красный с метал- лическим блеском розовый Красный Бесцветный > >
ком и характерное почернение среды под ними; некоторые саль-
монеллы. формируют колонии с зеленой окраской различной
интенсивностн и разных оттенков. В некоторых средах использо-
ваны сложные дифференцирующие системы, дающие возмож-
ность по двум илн нескольким признакам различать колонии
большего числа представителей энтеробактерий. Так, SS-arap и
дезоксихолатцитратннй агар Лейфсона позволяют дифференци-
ровать колонии энтеробактерий по продукции сероводорода и
ферментации лактозы, НЕ-агар — не только по продукции серо-
водорода, но еще и по ферментации трех углеводов, a XLD-
агар — к тому же и по декарбоксилированию лизина.
Дифференциация колоний эдвардсиелл от других энтеробак-
терий на среде Эт-2 основывается на сочетании комбинирован-
ного использования их свойств образовывать сероводород, де-
карбоксилировать лизин и на отсутствии способности сбражи-
вать маннит. Эдвардсиеллы формируют колонии с черным цент-
ром, в то время как другие энтеробактерии, в том числе и про-
дуцирующие сероводород, но не обладающие лизиндекарбокси-
лазой (Р. vulgaris, Р. mirabilis) или ферментирующие маннит
(сальмонеллы, цитробактеры), таких колоний не образуют.
В основе среды для выделения протеев лежит подавление
роста сопутствующей микрофлоры входящим в ее состав поверх-
ностно-активным веществом, который не препятствует росту
протеев.
В зависимости от поставленной цели, характера исследуемо-
го материала, обследуемого контингента и др. микробиолог, изу-
чая колонии, определяет дальнейший ход бактериологического
анализа, включая их отбор.
V При наличии «подозрительныхг на шигеллы или сальмонет-
лы лактозоотрицательиых колоний они подлежат первоочередно-
му отсеву (не менее 3—5 колоний). При отсутствии таких коло-
ний с целью выделения условно-патогенных энтеробактерий для
дальнейшего изучения снимают по нескольку колоний, различ-
ных по форме и окраске.
34
г । Методика отсева колоний имеет большое значение для полу-
чения чистой культуры бактерий. Колонию следует снимать ма-
лой бактериологической петлей или иглой, прикасаясь к поверх-
ности колонии в центре. Охлаждать петлю или иглу прикосно-
вением к визуально свободной от роста поверхности питатель-
ной среды нельзя, ибо следует помнить, что на селективных для
шигелл и сальмонелл агаровых средах эшерихии и другие энте-
робактерии растут плохо, часто ие способны ферментировать
лактозу и формировать визуально выявляемые колонии. Поэто-
му при изоляции колоний, подозрительных на патогенные энте-
робактерии, рядом лежащие колонии других микроорганизмов
одной петлей могут быть перенесены в среды для биохимической
идентификации, где сапрофиты, ие подвергаясь более селектив-
ному подавлению, нормально развиваются, образуя тем самым
смешанную культуру и обусловливая ложные результаты биохи-
мических тест< в.
Г Одним из эффективных вспомогательных методов при опреде-
лении чистоты культуры и ориентировочного распознавания ко-
лоний может служить метол микроскопии колоний в косопрохо-
дящем свете по Landy (1950). Для этой цели испытуемую куль-
туру рассевают по поверхности чашки с питательным агаром
так, чтобы обеспечить рост изолированных колоний. Принцип
методики изучения колоний при косом освещении отличается от
обычного метода микроскопии тем, что объект рассматривают
не в проходящем свете, а освещенным косо направленным лу-
чом, обусловливающим цвс гное окрашивание рассматриваемых
колоний и выявление строения их поверхности. Этого эффекта
достигают с помощью зеркальца от бинокуляриоп лупы или
микроскопа, помещенного на столе между лупой и осветителем
вогнутой стороной вверх и слегка повернутого так, чтобы обес-
печить угол падения луча 41—42 °C. Зеркальце помещают на
равном расстоянии (12—14 см) между осветителем и центром
предметного стопика лупы. Для удобства работы зеркальце за-
жимают специальным устройством. Используют увеличение
Х40. При правильной установке узкий пучок света от лампы
осветителя с помощью зеркача должен освещать скользящим
светом центр чашки с посевом, где создается наиболее правиль-
ное освещение.
Молодые колонии (10—18-часовые), находящиеся в гладкой
форме, при косом освещении имеют гомогенную структуру по-
верхности и цвет, характерный для энтеробактерий отдельных
родов: розово-голубой у шигелл, зелено-желтый у сальмонелл
и т. д. При известном навыке, ориентировочная дифференциация
колоний некоторых энтеробактерий становится доступной. Коло-
нии шероховатой и переходных форм светятся более тускло, их
цвет перестает быть типичным, а приобретает зеленовато-серые,
бежевые тона. Поверхность колоний становится исчерченной —
концентрически, рачиально пли в виде ячеек [Пехчецкая В. Я.
и др., 1957; Хоменкс II. А., 1961]
3*
35
i Установлено, что цветное свечение колоний — это оптический
феномен, связанный с волновой природой света и его дифрак-
цией. Разница 1 цвете зависит от ширины микробных клеток, со-
ставляющих колонию. Гомогенность или исчерчеиность поверх-
ности и яркость свечения обусловлены ориентацией бактерий в
колонии, их взаиморасположением [Акатова Н. С., 1966].
Микроскопию колоний в косопроходящем свете широко ис-
пользуют также при селекционной работе с энтеробактериями н
микроорганизмами других семейств.
и При обычном исследовании оценка колоний ограничивается
указанными характеристиками, после чего отобранные колонии
пересевают на среды для первичной идентификации. При чрез-
вычайных эпидемических ситуациях на этом этапе могут быть
проведены дополнительные исследования. Так, некоторые из
числа тестов, предназначенных для определения родов или ви-
дов энтеробактерий и дифференциации их от представителей дру-
гих семейств, могут быть применены для ориентировочного изу-
чения колоний (при условии их изолированного роста). Иссле-
дования могут быть направлены на прямое определение индола,
когда небольшую часть испытуемой колонии наносят на полоску
фильтровальной бумажки, пропитанной реактивом Ковача; не-
медленное появление красного цвета указывает на наличие ин-
дола. С целью определения наличия цитохромоксидазы часть
колонии втирают в участок бумажной полоски, содержащей
реактив, выявляющий этот фермент. Быстрое, через несколько
секунд, появление соответствующего окрашивания выявляет ци-
тохромоксидазную активность. ы Для прямой серологической
идентификации небольшое количество материала из колонии
суспендируют в маленькой капле изотонического раствора нат-
рия хлорида и затем соединяют с каплей специфической агглю-
тинирующей сыворотки. Можно также малое количество испы-
туемого материала размешать бактериологической петлей непо-
средственно в сыворотке. Появление бактериальной агглютина-
ции свидетельствует о наличии соответствующего антигена.
Указанные тесты могут служить лишь для весьма ориентиро-
вочного представления об изучаемых бактериях, а выявленные
с их помощью свойства требуют последующего уточнения при
работе с чистыми культурами.
। Как указывалось, чистые культуры подвергают дальнейшему
изучению на комбинированных средах, позволяющих осущест-
влять их предварительную идентификацию по сочетанию ряда
признаков, важных для определения семейства, родов или неко-
торых видов энтеробактерий. К числу таких сред в нашей стра-
не относят коммерческую среду Клигдера, прототипом которой
является зарубежная KI, а также агар Олькенинкого, двухслой-
ную комплексную среду (ДУКС) и трехсахарный агар с солями
железа (обозначаемый за рубежом TSI), которые готовят по
рецептурным прописям (см. раздел «Питательные среды и реак-
тивы») .
36
nuuB зарубежной микробиологической практике используют,
кроме упомянутых К1 и TSI, агар с лизином и солями железа
(LIA), полужидкий агар с орнитином (МЮ) и др., выпускаемые
в виде сухих коммерческих препаратов.
Посев на указанные среды проводят вначале по скошенной
части в виде прямой линии, затем в толщу агарового столбика
и заканчивают по скошенному агару штрихом. Следует иметь
в виду, что укол в толщу агарового столбика не должен дости-
гать дна, с тем чтобы не нарушились условия для сбраживания
глюкозы в относительно анаэробных условиях. Посевы инкуби-
руют при 37 "С до следующего дня, учитывать результаты необ-
ходимо не позднее чем через 18—24 ч.
Первоосновой многих комбинированных сред послужила сре-
да Ресселя [Russell F., 191IJ, предназначавшаяся для выявле-
ния образования кислоты и газа при ферментации глюкозы и
лактозы. В 1917 г. I. Kligter модифицировал ее добавлением
сульфатного железа и тиосульфата натрия с целью выявления
продукции сероводорода. Состав сред Клиглера и TSI аналогич-
ны, за исключением содержания в последней еще и сахарозы.
Агар Олькенинкого представляет собой вариант трехсахарного
агара, в котором в качестве индикатора сероводорода использо-
вана соль Мора и включена мочевина.
В табл. 8'Показаны реакции энтеробактерий иа средах Оль-
кеницкого и Клиглера. О ферментации лактозы (сахарозы) на
этих средах судят по изменению цвета агара в скошенной час-
ти, а о ферментации глюкозы — в столбике, в котором при газо-
образовании появляются пузырьки (разрывы среды или ее от-
слоение от стенок пробирки). Образование сероводорода уста-
навливают по почернению среды ниже скошенной части агара,
а при его интенсивной продукции наступает почернение всего
столбика среды. В среде Олькеницкого при росте культуры, гид-
ролизующей мочевину, происходит щелочение, вследствие чего
вся среда приобретает ярко-красный цвет. В случае указанного
расщепления мочевины в среде Олькеницкого учет ферментации
углеводов невозможен. При интенсивном образовании сероводо-
рода в этой или в средах Клиглера и TSI, когда целиком вся
среда чернеет, учет ферментации углеводов затруднителен.
Однако следует помнить, что процесс образования сероводорода
протекает в кислой среде, поэтому почернение столбика свиде-
тельствует о расщеплении глюкозы, свойственном всем энтеро-
бактериям. ДУКС, разработанная в 1978 г. Г. П. Калиной, ли-
шена указанных недостатков. В ДУКС, как и в агаре Олькениц-
кого, можно определить ферментацию глюкозы, лактозы и саха-
розы, образование сероводорода и наличие уреазы (табл. 9).
Преимущество ДУКС обусловчено послойным расположением
мочевины, субстратов для индикации сероводорода н углеводов,
что не мешает учету ферментации последних. Уместно отметить,
что определить образование сероводорода можно лишь с по-
мощью упомянутых сред Клиглера. Олькеницкого, TSI, ДУКС.
37
Таблиц 8. Первичная идентификация .лтгроб и терий по биохимическим
реакциям в комбинированно* среде
Реакции в сре* *•е Ольке- ннцкого, Кл глера Предполагаемые £Нтеробгктер1..:***
лактоза <«) саха> ром* глю- коза серо- водород моче- вина* •
— к — — S igella, некоторые Серовары сальмонелл, Esche- richia, Hafaia^P. inconstans, Serratia, Y. tnteroco- HHca ZV
— кг — S. paratyphi А и некоторые другие серовары саль- монелл, некоторые биовары S. flexneri 6, Esi he- richia, Hafnia, P inconstans, Serratia
— к + — S. typhi н некоторые другие серовары сальмонелл
—• кг + — Salmonella, Citrobacter, Edwardsiella
•о + к — — Escherichia, Citrobacter или не энтеробактерии
+ кг — — Escherichia, Citrobacter. Klebsiella, Enterobacter, Serratia
+ кг + — Citrobacter
• • + Proteus (кроме P. inconstans). Yersinia
• г • + Proteus (кроме P. inconstans)
— — — He энтеробактерии
+ > >
Условные обозначения: К — кислота; КГ — кислота н газ; Г — газ; • учет
р ... ий затруднен; — реакции отрицательная; + реаицня положительная. '
* При применении среды Олъкеницкого.
*• При использовании средь* Кпнглерг проводят пара-тельный посев в среду с моче-
виной (по Преусу или Кристенсену) либо посев с прнз<ененнги соответствующего теста
СИБ.
••• Не включены сведения по роду Erwinia, тан как при обычном (37 “С) культивиро-
вании пос. иа пластинчатых средах указанные энтеробактерии, как правило, ие рас-
тут или дают замедленный ску. . I рост.
Использовать индикаторные бумажки, пропитанные раствором
ацетата свинца нельзя, так как этот метод приводит к ложно-
положительным результатам.
Используя агар типа Клиглера (СССР), можно еще ориен-
тировочно определить у исследуемой культуры способность к
нндолообразованию. Для этого под пробку пробирки со средой
помещают индикаторную бумажку, пропитанную раствором па-
ра-диметиламинобензальдегида. Однако обычно суждение отно-
сительно продукции индола возможно при применении сред с
богатым содержанием триптофана (бульон из триптического пе-
ревара казеина, бульон Хоттингера, пептонная вода с 0,3%
триптофаном, полужидкий агар Хоттиигера для определения по-
движности).
По реакциям на комбинированных средах, в частности по от-
сутствию ферментации лактозы, может быть проведена предва-
рительная дифференциация шигелл и сальмонелл от других эн-
теробактерий, хотя среди последних имеются лактозоотрица-
тельные варианты. Характерным для шигелл в огличие от
сальмонелл является отсутствие газообразования в глюкозе
38
Таблица 0. И-“еге ie окраски в ДУКС при различных биохимических
peuuu IX <1К*. ,ц ।
Свой ерыч Изменение окраска в среде Фермента* цня Образо- вание серово- дорода Гидро- лиз моче- вины
глю- козы лгктс- mi (са- харозы)
Нижний столбик Черно-фиолетовый —
Темно ’-леный —
Зеленый —
Светло зе <еиый ——
перхний столбнк * Скошенная часть Желтый Малиновый Лиловый Фиолетовый Узкое черное кольцо Ширс-ое » » Обширное почернение всего столбика Отсутствие почернения или слегка серый оттенок Оранжевый с neper"том в красный и малиновый, желтый + 1 + + _1_ + 1 + + +++1
(кроме некоторых биоваров S. flexneri 6), хотя анаэрогенные
варианты возможны в каждой родовой группе. Также предста-
вители родов Salmonella, Citrobacter, Edwardsiella, Erwinia мо-
гут быть ориентировочно определены на этих средах по образо-
ванию|,сероводородаа представители родов Proteus и Yersinia —
по гидролизу<мочевины^
Другие энтеробактерии, не образующие сероводород и не
гидролизующие мочевину, дифференцировать с помощью комби-
нированных сред сложно, так как ни ферментация лактозы (са-
харозы), ин образование газа в глюкозе не являются четкими
признаками для дифференциации родов семейства Enterobacte-
riaceae.
В < ]язи с тем что набор указанных признаков является не-
достаточным для идентификации рода бактерий, определение
антигенной формулы исследуемой культуры с помощью реакций
агглютинации на стекле на этом этапе проводить не следует.
Исключение возможно лишь при чрезвычайных эпидемических
показаниях. Для серологического исследования следует брать
культуру, выросшую на комбинированной среде, после того как
проведены пересевы с этой среды на дифференциально-диагно-
стические среды для последующей идентификации. Полученные
результаты серологической идентификации необходимо рассмат-
ривать как сугубо ориентировочные, которые должны быть уточ-
нены после завершенной биохимической идентификации рода и
повторного серологическою исследования.
39
При сомнении в принадлежности изучаемой культуры к се-
мейству Enterobacteriaceae целесообразно применить следующие
тесты, дифференцирующие семейства микроорганизмов: морфо-
логия (палочка, кокк) с окраской по Граму (4- или —),
OF-тест, т. е. тип расщепления глюкозы — окисление (О) или
ферментация (F), определение ферментов в тестах на цитохро-
моксидазу и нитратредуктазу (редукция нитратов в нитриты).
На основании тестов, указанных в табл. 10, приведены ха-
рактеристики Enterobacteriaceae и некоторых микроорганизмов,
не относящихся к этому семейству, присутствие которых в про-
бах материала и рост на питательных средах возможны при ис-
следовании на энтеробактерии. Как идно, для энтеробактерий
характерными признаками являются палочковидная форма кле-
ток, грамотрицательная окраска, расщепление глюкозы фер-
ментацией; отсутствие цитохромоксидазы и способность восста-
навливать нитраты в нитриты (за исключением некоторых био-
варов Enterobacter и Erwinia).
Выяснение морфологии клеток и отношения к окраске по
Граму у сомнительных культур следует считать первоочеред-
ным, так как при этом исследовании могут быть выявлены ха-
рактерные морфологические особенности (например, кокковая
форма и др.), которые сразу же без других тестов дадут пред-
ставление о микроорганизме. Известно, что при окраске по Гра-
му выявляется способность микроорганизмов удерживать или
утрачивать окраску (генциан- и кристалвиолет) при последую-
щем воздействии спиртом, в зависимости от чего их относят со-
ответственно к грамположительным или к грамотрицательным.
Относительно механизма окраски микроорганизмов по Граму
наиболее убедительной считают химическую теорию [Мар-
ков К. И., Бырдаров Св., 1965]. В ее основе лежит установление
различия в составе клеточной поверхности грамположительных
и грамотрицательных бактерий. У первых на поверхности содер-
жится в 8 раз больше рибонуклеата магния, чем дезоксирибо-
нуклеата магния, а у вторых это соотношение составляет
1,3: 1,0. Предполагают, что рибонуклеат магния в грамположи-
тельных бактериях образует с генцнанвиолетом и раствором
Люголя слабо растворимое в спирте соединение, благодаря чему
окраска этих бактерий сохраняется.
Как считают, в большинстве случаев интерпретация резуль-
татов окраски мазка по Граму не представляет трудностей,
однако некоторые грамположительные микроорганизмы, в част-
ности представители рода Bacillus, могут иметь грамотрицатель-
ную окраску. Напротив, некоторые штаммы грамотрицательных
родов Acinetobacter и Moraxella проявляют тенденцию не обес-
цвечиваться спиртом, поэтому выглядят грамположительными.
Для уточнения таких «грамсомиительныхж реакций предло-
жены особые методы. Так, G. Cerny в 1976 г. опнеал метод диф-
ференциации грамположительных и грамотрицательных бакте-
рий, основанный на цветной реакции выявления аминопептида-
40
Таблица 10, Дифференциации антероб шт« рий от (-^которых других грам-
отрицательиых микроорганизмов
'Х. Дмфферен- цнрующве ^Хтесты Мнкроор-^Х. ганмтмы Морфология OF-т-ет £ L 1! Редукция нитратов
Enterobacteria- ceae Небольшие полиморфные пэлочки; подвижные (перитрнхн) или непо- движные; без капсулы или с капсу- лами F — +
Pseudomonas Прямые или изогнутые одиночные па- лочки; подвижны: (моно- или лофс трнхи); без капсул, часто образую щне пигмент синего, зеленого, фиоле- тового и др. цвета О + X
Vibrio Короткие изогнутые или прямые па- лочки; одиночные нлн S-обрязующие нити, спирали; подвижные (моиотри- хи); без капсул F + +
Aeromonas Прямые палочки с закругленными концами нлн кокковндиые; распола- гаются поодиночке, парами, цепочка ми; подвижные (моиотрихи) или не подвижные F + +
Plesiomonas Прямые палочки, располагаются по одиночке, парно или цепочками; по- движные (лофотрихн) F + +
Flavobacterium • 1 Тонкие палочки или кокковидные фоп мы; подвижные (перитрнхн) иля не- подвижные* •• •** О или —. F X
Moraxella // Однородные нли полиморфные, корот- кие толстые палочки, часто кокковид- ные; неподвижные — + X
Alcaligenes Одиночные палочкн, кокковые иле кокковитиые формы, подвижные <пе ритрнхи) — + X
Aclnetobacter /J Короткие толстые папочки или кокковидные формы; парно или по- почками; неподзижны?; без капсулы или с капсулами о, -г — —
У с ло ы а обозиачеяиа: О — окает ее. F — ‘‘трмпггацм; — отсутстм.
активности.
* При росте на твердых питательных средах образуют колонии желтого, оранжевого,
красного или коричневого цвета, оттенок пигмента вависИт от состава среды и темпера-
туры культнвяровявня.
•• Кроме F. menlngoseptlcum.
•** Кроме едяинчиых штаммов Aclnetobacter calcocuetlcue.
41
—г_„ м vcnuonuM присуща грамотрицательныы бактериям.
Этот способ, хотя и быстрый (на процедуру затрачивается 10—
15 мин), но не вполне специфичен в отношении Bacillus.
В Японии значительно раньше применяли метод, позволяю-
щий отличить с помощою КОН-теста грамотрицательные микро-
организмы от грамположительных. Возможно из-за того, что
автор метода Е. Ryu описал его еще 1938 г. на японском язы-
ке, метод этот до недавнего времени оставался достоянием ука-
занной страны. Лишь после того, как метод был апробирован
Т. Gregersen (1978) и опубликован в Европе, его стали приме-
нять в других странах.
В основе метода с КОН лежит способность клеточной стенки
грамположительных бактерий сохранять целостность при воз-
действии гидроокиси калия, тогда как клеточная стенка грамот-
рнцательных микроорганизмов разрушается при указанном воз-
действии.
Постановка пробы с КОН предусматривает суспендирование
петли суточной агаровой культуры в капле 3% раствора КОН
на предметном стекле. При положительной реакции, свойствен-
ной грамотрицательным микроорганизмам, жидкость в капле
становится вязкой, нити слизи тянутся за петлей на 0,5—2 см
н даже дальше. Учет этой пробы более удобен на черном фоне.
Образование слизистой консистенции после обработки грам-
отрнцательных бактерий КОН обусловлено, как указывает
Т. Gregersen, выходом из их клеток ДНК, являющейся вязким
компонентом. Автор, исследовавший представителей 70 родов
или видов грамположительных и грамотрицательиых микроор-
ганизмов, наблюдал четкие положительные реакции у энтеро-
бактерий.
Определение типа расщепления глюкозы (OF-тест) проводят
с помощью среды Хыо — Лейфсона [Hugh R., Leiison Е. 1953].
В этой среде в качестве углевода использована глюкоза, фер-
ментация которой характерна для представителей семейства
Enterobacteriaceae, хотя могут быть применены и другие углево-
ды. При ферментативном процессе исходное расщепление глю-
козы происходит в анаэробных условиях первичным фосфорили-
рованием до образования соединения глюкоза-6-фосфат. Окис-
лительный процесс расщепления глюкозы в отличие от этого
начинается не с фосфорилирования, а с прямого окисления кар-
боксильной группы с образованием глюконовой кислоты и про-
текает в присутствии атмосферного кислорода.
Для постановки OF-теста испытуемую культуру засевают
уколом в столбик среды в двух пробирках, в одну из которых
затем поверх среды наслаивают стерильное вазелиновое масло
(0,5—1 мл). Посевы проводят иглой (или маленькой петлей), не
доводя ее до дна пробирки на 5—6 мм, инкубируют при 37 °C
в течение 1—4 сут. Так как в среду в числе других компонентов
входит агар в небольшой концентрации (что создает полужидкую
консистенцию среды) и индикатор pH — бромтимоловый синий
42
(придающий среде зелеиовато-оливковый цвет), при учете реак-
ции могут быть определены не только окисление или фермента-
ция углевода (глюкозы), но также газообразование и подвиж-
ность. Изменение цвета среды в обеих пробирках иа желтый
свидетельствует о расщеплении глюкозы ферментацией (F), из-
менение аналогичного характера только в открытой пробирке
(не залйтой вазелиновым маслом) — об окислительном процессе
(О), а сохранение неизменного цвета в обеих пробирках — об
отсутствии какого-либо метаболизма глюкозы (—).
Важными тестами, отличающими энтеробактерии от ряда
других бактерий, ягляются также определение цитохромоксида-
зы и способности воссстанавлнвать нитраты нитриты, свиде-
тельствующей о присутствии у них нитратредуктазы.
Цитохромы — желе юсодержащие гемопрот* иды, которые в
завершающем этапе аэробною дыхания доставляют кислороду
электроны (водород) с последующим образованием воды (Н2О).
Из числа цитохромов в составе некоторых грамотрицательных
бактерий содержится цитохром С. Благодаря ферменту оксида-
зе, свойственной аэробным или факультативно анаэробным мик-
роорганизмам, происходит окисление цитохрома С, который спо-
собен использовать некоторые красители ь качестве искусствен-
ных акцепторов водорода, обусловливая нх переход в „крашен-
ное состояние [Калина Г. П., 1982; Koneman Е. et al., 1979].
Классический метод определения наличия цитохромоксидазы
связан с именем Эрлиха и воспроизведен им на животных* в
1885 г. Для выявления этого фермента у микроорганизмов на
поверхность 18- -20 часовой агаровой культуры наносят каплю
1% водного раствора пара-диметилфенилеидиамина и добавля-
ют каплю 1 % спиртового раствора а-нафтола. При положитель-
ной реакции через 1—3 мин появляется ярко-синее окрашива-
ние, обусловленное образованием индофенола синего. Цитохром-
оксидазу (по Эрлиху) можно определять с помощью коммер-
ческого бумажного индикатора (СИБ), выпускаемого Горьков-
ским НИИ эпидемиологии н микробиологии РСФСР (в соответ-
ствии с прилагаемым к нему наставлением).
Классический метод выявления цитохромоксидазы подвер-
гался модификациям. Одной из них является широко применяе-
мый за рубежом метод Ковача, предусматривающий использо-
вание одного реактива—1 % водного раствора пара-тетраметил-
фенилендиамнна. который наносят на культуру (несколько ка-
пель). При положительной реакции через 20—30 с появляется
темно-красное окрашивание, обусловленное переходом упомяну-
того реактива под воздействием окисленного цитохрома С в
вурстеровский синий.
Механизмы реакций в тестах на цитохромоксицазу по мето-
дам Эрлиха и Ковача различны, поэтому их результат у некото-
рых микроорганизмов бывает неодинаков. Так, в числе грам-
отрицательных микроорганизмов, от которых иногда необходимо
дифференцировать энтеробактерии, один из нидов Flavobacteri-
43
um — F. menlngosepticum в тесте no Эрлиху дает отрицатель-
ную реакцию, а в тесте по Ковачу — положительную. Лишь за
этим исключением у всех приведенных в табл. 10 микроорганиз-
мов характер реакций в тестах на наличие цитохромоксидазы,
определенных обоими методами, совпадает.
Микроорганизмы, обладающие редуктазой, способны извле-
кать кислород из нитратных соединений, например из нитрата
калия (KNO3), восстанавливая их в нитритные (KNOa). В есте-
ственной среде обитания микроорганизмов этот процесс обычно
протекает в анаэробных условиях. При этом могут быть восста-
новлены и другие продукты — аммоний, свободный азот, окись
азота и гидрооксиламин. Для выявления редукционной активно-
сти микроорганизмов применяют тест, который выявляет нитри-.
ты. Для этого в питательную среду, содержащую нитрат калия/
вносят одну петлю суточной агаровой культуры и инкубируют
при 37 °C в течение 4 сут. Как было показано в специальных'
исследованиях еще в 1962 г. I. Daubner, энтеробактерии редуци-j
руют нитраты в нитриты в первые 8 ч инкубации. В то же вре-
мя у других микроорганизмов эта способность проявляется в
поздние сроки (до 4 сут). В связи с этим целесообразнее прово-
дить учет реакции ежедневно.
Для выявления нитритов в пробирку с инкубированной сре-
дой добавляют по 1 мл растворов А и Б (см. раздел «Питатель-
ные среды и реактивы»). При положительной реакции через не-
сколько минут появляется красное окрашивание, а при отрица-
тельной — цвет среды не меняется. Для подтверждения отрица-
тельного результата реакции необходимо в ту же пробирку до-
бавить небольшое количество цинковой пыли. Ионы цинка, если
в среде присутствуют невосстановленные нитраты, восстанавли-
вают последние в нитриты (химический процесс), в результате
чего появляется красное окрашивание.
ДИФФЕРЕНЦИАЦИЯ РОДОВ
Идентификация выделяемых в процессе бактериологического
исследования культур, подозреваемых на принадлежность к се-
мейству Enterobacteriaceae, складывается из нескольких этапов.
Этап первичной идентификации с использованием тех или иных
комбинированных сред (Олькеницкого, Клиглера, ДУКС или не-
которых других, применяемых за рубежом) позволяет опреде-
лить 4—5 признаков, на основании которых однозначное реше-
ние об отнесении культуры к пределенному роду невозможно.
Результаты первичной идентификации лишь ориентируют в вы-
боре наиболее рационального и обосиоваиного направления, по
которому должна идти дальнейшая идентификация культуры.
Выраженность родственных связей энтеробактерий как по био-
химическим свойствам, так и в отношении антигенной структуры
потребовала ревизии старых представлений о диагностической
значимости отдельных свойств культур.
44
• > В общей биологической характеристике эИ1еробактерий осо-
чное место отводят ферментативным свойствам, так как именно
они по признанию таксономистов служат первоочередной осно- '
вой для дифференциации в пределах семейства Enterobacteria-
сеае (на роды, виды и др.). Эти свойства признаны наиболее ге-
нетически стабильными; каждому роду присущ в определенной
мере собственный спектр биохимических признаков, а выявле-
ние их технически несложно и позволяет получить достаточно на-
глядные результаты. Надежность биохимической дифференциа-
ции родовых групп энтеробактерий основывается на использо-
вании совокупности, т. е. набора тестов.
Подкомитет по Enterobacteriaceae Международного комите-
та систематической бактериологии рекомендует для специализи-
рованных учреждений (лабораторий) набор, включающий более
35 тестов. Неприемлемость такого набора для практических бак-
териологических лабораторий очевидна. Специалисты разных
стран поставили цель найти тот минимум наиболее значимых
дифференциально-диагностических тестов (минимальный диффе-
ренцирующий ряд), который обеспечивал бы достаточную для
практических лабораторий достоверность результатов идентифи-
кации энтеробактерий.
Были предложены различные схемы, составленные по принци-
пу алгоритмов, исходящие из первоначальной дифференциации
культур на o6pa3VK>imie и не образующие сероводород и индол,
расщепляющие и не расщепляющие лактозу, что позволяло с
учетом этих свойств определить более рациональный выбор тес-
тов в ходе дальнейшего исследования. Известны примеры ис-
пользования ЭВМ для составления соответствующего набора.
Так, для идентификации энтеробактерий были разработаны ал-
горитм и программа на основе широко распростраиениой схемы
Edwards — Ewing [Андронова II. И., 1980]. При помощи ЭВМ
автор показала, что набор из II биохимических тестов (образо-
вание индола, реакции с метиловым красным и Фогеса—Про-
скауэра, наличие уреазь*, лизиидекарбоксилазы, фенилаланин-
дезамнназы, газообразование в глюкозе, ферментация инозита,
сорбита, арабинозы и рамнозы) дает воможность надежно иден-
тифицировать свежевыделенные штаммы в 86,8% случаев.
Другие исследователи разработали новые комбинированные
среды и использовали их сочетания с ранее предложенными для
ускорения и упрощения процедуры идентификации. Американ-
ские исследователи [Ewin W., 1973 и др.] считают возможным
комбинировать среды LIA (среда, содержащая лизин и соли же-
леза), MIO (среда для определения подвижности индола и орни-
тиндекарбоксилазы) и трехсахарный агар с железом (TSI) или
агар Клиглера. В эти среды одновременно вносят часть колонии
снятой петлей с п .астиичатой селективно-дифференциальной
среды, а также помещают под пробку с LIA- или MIA-средой ин-
дикаторную бумажку на нндол. Дополнительно к ним одномо-
!ентн_ можно использовать мочевину но Кристенсену, цитрат
45
Симонса и пептонную воду (для определения индолообразовання
с применением реактива Эрлиха или Ковача). Эта 6-пробироч-
ная система позволяет идентифицировать 90% культур энтеро-
бактерий или боль; в течение 24 ч, причем сочетание определяе-
мых признаков дает большую информацию о культуре на самом
раннем этапе исследования. Возникшая одновременно необхо-
димость в получении требуемых результатов в более ранние
сроки и менее трудоемким путем привела к работам по созда-
нию многочисленных коммерческих тест-систем (описание наи-
более известных из них дано в разделе «Ускоренные методы*).
В нашей стране также были разработаны рекомендации по
применению наиболее рациональных наборов дифференциально-
диагностических тестов для дифференциации родов энтеробакте-
рий. Наиболее известны рекомендации Всесоюзного центра по
эшерихиям [Киселева Б. С., Голубева И. В., 1973, 1977]. В ра-
боте 1973 г. авторы рекомендовали одновременное использова-
ние минимального набора из 6 тестов, предусматривающего воз-
можность определения родовой принадлежности на основании
способности утилизировать цитрат в среде Симонса и малонат
натрия, образовывать сероводород, гидролизовать мочевину, де-
заминировать фенила танин и по наличию или отсутствию под-
вижности. Такой метод может быть оправдан в некоторых лабо-
раториях при работе с поступающими для идентификации чис-
тыми культурами. t
Для практических бактериологических лабораторий, зани-
мающихся выделением культур энтеробактерий на среды для
первичной идентификации, более уместна предложенная теми
же авторами в 1977 г. схема определения родов энтеробакте-
рий, учитывающая при подборе необходимых тестов дифферен-
цирующего ряда результаты, получаемые на комбинированных
средах типа Олькеницкого или др. (образование сероводорода,
гидролиз мочевины, ферментация лактозы и глюкозы с образо-
нием газообразных продуктов).
Тот же принцип подбора дополнительных дифференциальных
тестов, исходя из результатов, полученных на комбинированных
средах (по «ключевым биохимическим тестам*), реализован в ре-
комендациях, названных системой СУЛГ—сероводород, уреаза,
лактоза, глюкоза (газ) в работах Л. М. Устименко н киевских
авторов (1978).
Как указывалось в предыдущем разделе настоящего руко-
водства, при выполнении исследований на энтеробактерии изо-
лированные колонии выделяют с селективно-дифференциальной
(пластинчатой) среды и пересевают в одну из комбинированных
сред. Таким путем определяют образование сероводорода, фер-
ментацию глюкозн (включая газообразование), лактозы, саха-
розы и гидролиз мочевины (на среде Олькеницкого). Следует,
однако, помнить, что у бактерий трибы Klebsiellae гидролиз мо-
чевины необходимо проверять на средах с мочевиной по Преусу
или Кристенсену.
16
I 4-Культура, выросшая на комбинированной среде, может быть
(Далее изучена с использованием всех тестов минимального диф-
ференцирующего ряда (табл. 11) или избирательно в необходи-
мом в данном случае наборе.
Наборы тестов, входящих в минимальный дифференцирую-
щий ряд, в рекомендациях разных авторов варьируют в отноше-
нии 2—3 компонентов, однако в основной части они совпадают
и опыт отечественных и зарубежных исследователей свидетель-
ствует об обоснованности их использования [Киселева Б. С., Го-
лубева И. В., 1973; Андреева 3. М., Лавровская В. М. и др.,
1983; Ewing W., 1973; Koneman Е. et al., 1979; Martin W., Was-
hington J. П, 1980, и др.].
Приведенная далее схема дифференциации Enterobacteria-
ceae с использованием комбинированных сред (Олькеницкого
или Клиглера и мочевины по Нреусу или Кристенсену, см. схе-
му 1) преследует цель помочь бактериологу в выборе наиболее
значимых биохимических тестов с учетом результатов, получен-
ных иа комбинированной среде. Применение указанной схемы
в сочетании с рядом дополнительных признаков, очевидных уже
на начальных этапах изучения некоторых культур (особенности
колоний, образование пигмента, способность к роению и др.),
позволяет сузить перечень предполагаемых родов и более ра-
ционально выбрать тесты для дальнейшей дифференциации. Для
подбора необходимых тестов используют таблицы 11, 12, а так-
же характеристики соответствующих родов энтеробактерий, при-
веденные в руководстве, учитывая при этом значимость тех или
иных конкретных тестов для идентификации определенных ро-
довых групп. Так, когда в число рассматриваемых родов входит
Proteus, особое место отводится тесту на фенилаланиндезаминазу
(имеются публикации, свидетельствующие о корреляции резуль-
татов определения этого фермента с определением триптофанде-
заминазы). В дифференциации Escherichia и Shigella первооче-
редными тестами являются ацетатный, цитратный тест Кристен-
сена, а также определение подвижности. При определении пред-
ставителей родов Hafnia и Yersinia учитывают изменение ряда
признаков при различных температурах культивирования (22—
25°C и 37°C). . I J
Целесообразно кратко остановиться на наиболее употреби-
тельных тестах (см. табл. 11).
Посевом на среду Симонса определяют способность энтеро-
бактерий утилизировать цитрат как единственный источник
углерода, а в ацетатном тесте таким источником является аце-
тат. Для посева на эти среды используют минимальную дозу,
снимая рост микробов без прикосновения к поверхности среды
или суспендируя петлю культуры в изоп эпическом растворе нат-
рия хлорида. При положительно»* результате наблюдают рост
на средах и появление синего окрашивания (при использовании
в гриде бромтимолового индикатора), при отрицательном—.от-
сутствие роста и изменения цвете среды.
47
® Таблица 11. Дифференциация родовых групп Ent irobacteriaceae по биохимическим свойствам
Тест или субстрат Escherichia Shigella (/\ Salmonella с| i Citrobacter {» 4 1 J j s G i 1 L. f V a •8 V c Ш Hafnia . Serratia Proteus 'o I . Yersinia-—i <£, Edwardslella Erwinia-*— J
Комбиниро- ванная среда Сероводород . Л-ктоз. * 4 Глюкоза (газ)- /г > Мочевина +7- +L- — 1+11 +I+1 + x" X I++I t (+). - -7+ ++ + , . ... Ill Л, + 1 + 1 1 lx|
Минимальный I и*фередци - оший ряд Мочевина (по Преусу или Кристен- сену) •• ДВ '-ость ' xi + x;^i । * 1 ± *1 1itl11l| + |х i'll '.X '.+ + 1 + + + + + 1 Z+> xlx+l^x +t i i+++i;.i± 1« . h4 I 1 1 X + ++-X 1 1 x 1 + +x x ++x+1 l+x X -7+ + -7+ + -7+ X X + X 1 1 + ++xlI++I ’4:®+*'1 1 **
ИНДОЛ Фениляланян дезаминаза Цитрат Симонса
Ацетат натрия Лнзнндекарбохснлаза Орнитиндекарбокснлаза ( реакция с метиловым Среда J красным Кларка । реакция -Фпгесз — 1 цдрмауува Сорбит
У с л о в и .в обозначения: здесь и во всех другпх таблицах
руководства + положительная реакция через 18—24 ч у 90% штаммов
или боиее;
— отрицательная реакция в течение всего срока наблюдения у 90%
штаммов или более;
(+) «медленно (позже 24 ч) положительная реакция у 90% штам-
мов или более;
+. — ч_ще положительная, реже отрицательная реакция у 90%
штемдоз или
+ ше отрицательная, реже положительная реакция у 90%
штаммов или более;
+ <+> ч*щь положительная, реже замедленно положительная ре-
i квд. у 9011 I ггаммов Г— более;
<+> замедленно положительная, реже положительная ре-
акция у 90% штамме в или более;
—, ( + ) чаще отрицательная, реже замедленно поьожптельиья реак-
ции у 90% штаммов или более;
( + ), — чаще замедленно положительная, реже отрицательная ре-
акция у 90% штаммов или более;
X различные результаты реакция: +, ( + ),—.
* При получении на комбинированной среде нелегки: ре iy.«M i год
эти тесты повторяют на отдельных средах (жидкие -ин полужидкие
среды с лактозой, глюкозой).
•* Среду непс bjj ют для дифференциации слабо гидролизующих
мочевину эитеро5е..1ерий (в среде Олькеиицкого).
К. pneumoniae.
• •••• Без. У. pestls.
Erwinia herbicola
<317
3
3
♦
4
a
s
&
to
В
ж
,3
о Таблица 12. Биохимические свойства родовых групп Enterobacteriaceae
" V ' V. —
Тест или субстрат Escherichia гг Shigella Salmonella 1 Ъ А Cltrobader Edwardslclla ‘ »'• * f- ’u - Klebsiella* J Jl Enterobacter Hafnla Serratia Proteus 1 ' 5 Г i Yersinia” < / *7 . \«а Ш
Цитрат Симонса — — +, - + — + + X (37° C) +(22 °C) + X — +
Мочевина — — — X — (+) (+). - — X +. - '-• + —
Малонат натрия — — + + — + +. - X — — — X
Фенилаланипдезамипаза — — — — — — — — — +_2 — X
Сероводород — +. - +. - + — — V. •— + . - — +
Подвижность +. - — +. - + + — + X (37 °C) +(22 °C) + +. - —(37 °C) +(22 °C) +. -
Индол +. - + 1 + + — — — + . - + —
Реакция с г «типовым красным + + +' + + + — + (37 °C) —(22 °C) X(37 »C) + + —
Реакция Фогеса — Проскауэра — — — — — +. - + X (37 °C) + (22JC) X (37 °C) + — X
Лизинд карбоксилаза +. - — +. —• + + - + + \ + — —* —
Аргининдегидролаза X + +. (+) X — — +. - — — — — —
Орнитиндекарбоксилаза X -; + + X + + + + + X -7
* Глютаминовая кислота + + — — • — — — — + • •
Желатин — — -, (+) — — —- (+) — •z + - X r +
%
-KCN — + + — + • + + + + — X
Ацетат натрия +.(+) — X X X .+' + (+) X X X X
Цитрат Кристенсена X — X + + + - + + + X + * г
Ц тлоб озг — — X X — + + X. X X +. - •
Глюкоза (газ) +. - + +. - + + + + X X X —Г
-Адоннт + — — X — +. - X — X + X —
Арабиноза X X + + ~~' + + + с — X +
Глицерин + X + + (+)”.' + + —. + + + X + X
Дульцит X X +. - X — + X — — — — —
Инозит + — X + — + + — X —, + X X
Ксилоза X X X + — + + + X +. - X +
Лактоза у X -.(+) + + . С+) — + + (+) + — — X
Мальтоза X X + + + + + + +. - + +
Маннит + +. - +* f+ + + + + + + +
Ра”нозт X X + +; + + + — X +. - +
- Рафиисйа X X + X — + + — — — — •
Салицин + ~ X — — X — + X X + X +. - X
Оха1,оза ~ _'Х — —- X — + + X + X чма ««L +
5* Сорбит X V X + + + + —- + + + X
Условны. обозначении: • не изучено.
• К. pneumoniae.
•• Приведены свойства без Y. pestls,
••• Erwinia herbicola*
определения способности бактерии к гидролизу мочеви-
ны применяют среды* с этим субстратом (по Преусу или Крис-
тенсену). При положительном результате (щелочение среды)
появляется синее окрашивание в среде по Преусу и красно-ма-
лииовое в среде по Кристенсену (индикатор феноловый крас-
ный); при отрицательном — пожелтение среды по Преусу и от-
сутствие изменения в окраске среды по Кристенсену.
Для выявления утилизации бактериями малоната посев про-
водят в жидкую среду или на поверхность плотной среды, со-
держащей этот субстрат. При положительном результате (щело-
чение) появляется синее окрашивание, при отрицательном —
цвет не изменяется или наступает пожелтение среды.
Среду с фенилаланином засевают массивной дозой штрихом
по скосу агара и через сутки инкубации добавляют на поверх-
ность выросшей культуры несколько капель 10% раствора хло-
рида железа. При дезаминировании фенилаланина наблюдают
зеленое окрашивание разной интенсивности, при отрицательной
реакции добавленная жидкость и среда имеют желтый цвет.
Т^Дляi определения'подвижносп^культуры делают посев уко-
лом в столбик 0,3—0,4% полужидкого агара, не доходя до дна
пробирки. Подвижные штаммы растут диффузно, вызывая помут-
нение среды, неподвижные — растут строго по уколу. Слабопо-
движные штаммы вызывают помутнение отдельных участков
агара обычно вблизи укола. На этой же среде, проверенной на
наличие триптофана, покраснение индикаторной бумажки, прЬ-
питанной раствором пара-диметнламинобеизальдегида, встав-
ленной под пробку пробирки, указывает на продукцию индола,
отсутствие окрашивания — на отрицательный результат. Опре-
деление индола возможно также с помощью реактивов Эрлиха
или Ковача, которые добавляют к культуре, выращенной в без-
углеводной жидкой среде: в пептонной воде, бульоне Хоттинге-
ра илн бульоне из триптического перевара казеина. Появление
красного кольца на границе соприкосновения жидкостей указы-
вает на положительный результат.
Для определения способности культур декарбоксилировать
лизин и орнитин проводят посевы в среды с этими аминокисло-
тами и в контрольную пробирку с основой среды. После посевов
в опытные и контрольную пробирки вносят стерильное вазели-
новое масло для получения слоя 4—5 мм. При положительной
реакции (щелочение) наблюдают появление синего или фиоле-
тового окрашивания в зависимости от используемого индикатора
параллельно с появлением желтого окрашивания в контрольной
пробирке; при отрицательных результатах среда в пробирках
с аминокислотами и в контроле — желтая. Инкубация до 4 сут.
Реакции Фогеса — Проскауэра и с метиловым красным про-
водят для определения путей ферментации глюкозы с образова-
нием ацетилпетилкарбинола (ацетоин) и 2,3 бутиленгликоля.
Для постановки этих реакций используют среду Кларка в объе-
ме не менее 5 мл. Посев проводят обычной петлей. Инкубация
52
при 37 °C, для Halnia — при 22—25 °C. Результаты первоначаль-
но учитывают через сутки. Из среды с суточныв ростом культу-
ры переносят по 1 мл в две пробирки. В одну из них дооавляют
1 каплю реактива метиловый красный и следят за изменением
окраски — появление красной окраски указывает на положи-
тельный результат, при отрицательной реакции среда приобре-
тает желтый цвет. Во вторую пробирку для постановки реакции
«Рогеса—Проскауэра добавляют С,5 мл 6% спиртового раство-
ра а-иафтола и 0,2 мл 40% раствора КОН. Учет реакции прово-
дят в течение первых 5 — 10 мни (лучше после встряхивания
пробирки) или после 1—2 ч пребывания в термостате. При по-
ложительной реакции отмечают вишневое окрашивание, при
отрицательной — отсутствие окрашивания. Однако в большин-
стве случаев четкие результаты в указанных реакциях получают
через 2—3 сут инкубации.
Необходимо отметить, что тесты, имеющие преимущественно
диагностическое значение при выделении культур, предположи-
тельно относят (по поведению на комбинированной среде) к па-
тогенным энтеробактериям (шигеллам, сальмонеллам).
Так, выделение лактозоотрицательиых, ферментирующих
глюкозу (без гача), не образующих серовод [>»>л и не гидроли-
зующих мочевину культур позволяет предполагать их принад-
лежностБ~К~шигеллам. В этих случаях первоочередное значение
приобретают тесты определения подвижности (при 37 и 22°C),
утилизации ацетата_цатрия, и нитрата в среде Кристенсена, де-
заминироваич _фенилаланива. На этом этапе целесообразно и
использование теста с поливалентный дизентерийным бактерио-
фагом.
Для культур предполагаемой сальмонедлезной- природы
(лактозоотрицательнь'е^ферментнруюЩИЕТГЛКЯсозу-с образова-
нием газа, образующие и не образующие сероводород, не гид-
ролизующие мочеьину) первостепенное диагностическое значе-
ние имеют следующие тесты: определение индолорбразования,
утилизация ци-рата Симонса и малоната натрия, дезаминирова-
ние фенилаланина и декарбоксилирование, лизина. Так же как
в примере с шигеллами зчеь уместна постановка пробы с бак-
териофагом (поливалентным, сальмонеллезнь'м)._
При исследование культур, направленных на идентификацию
в методические центры бактериологической службы, их исследо-
вание начинают с контроля чистоты культур рассевом на неин-
гибирующие (кровяной, слабощелочной агар) или слабоингиби-
рующие дифференцирующие (Эндо, ЭМС) пластинчатые среды.
Дальнейшему изучению ио биохимическим и серологическим
свойствам подлежат культуры, выделенные из изолированных,
характерных по своим свойствам колоний.
Как отмечалось, дополнительным тестом для подтверждения
принадлежности куль-ур к шигеллам или сальмонеллам слу-
жит проба с соответствующим поливалентным роплспецифиче-
ским бактериофагом Для шигелл используют диагностический
53
жидкий бактериофаг, а при его отсутствии — лечебный дизенте-
рийный фаг. Для идентификации сальмонелл служит сальмонел-
лезный О-бакте] иофаг, являющийся поливалентным родоспеци-
фическим. Можно использовать также лечебный поливалентный
сальмонеллезный фаг. Фаги используют в неразведенном виде
или в разведении в зависимости от титра, указанного на этикет-
ке препарата.
Методика испытания культур иа чувствительность к фагу.
Наносят две капли 2- или 18-часовой бульонной культуры испы-
туемого штамма (можно применять также взвесь суточной ага-
ровой культуры в изотоническом растворе хлорида натрия) тон-
ко оттянутой пастеровской пипеткой или петлей диаметром 4—
5 мм на хорошо подсушенный слабощелочной агар (pH 7,2—7,4)
в чашки Петри. После подсыхания на одну из капель петлей
или пастеровской пипеткой меньшего диаметра наносят фаг, а
на другую — (в качестве контроля) каплю стерильного бульона.
В одной чашке можно испытать одновременно 5—6 культур.
После постановки пробы чашки помещают на 18—20 ч в термо-
стат при 37 °C. Положительную реакцию (наличие лизиса) опре-
деляют по появлению на месте нанесения фага четко очерченно-
го сливного лизиса (+ + + +), полусливного (+ + +) или
сосчитываемого числа (++,+) отдельных негативных коло-
ний, отчетливо видимых невооруженным глазом. При отсутствии
лизнса в местах нанесения фага наблюдают сплошной рост
культуры, как и в контроле.
Антигены. Для бактерий ряда родов заключительным этапом
анализа является серологическая идентификация. Антигены и
антигенная структура таких бактерий, как сальмонеллы, шигел-
лы, эшернхии, цитробактеры, отчасти протеи и клебсиеллы, изу-
чены достаточно глубоко. Менее известна антигенная структура
гафний и иерснний. Антигены остальных представителей семей-
ства изучены явно недостаточно, вследствие чего диагностиче-
ские препараты для их серологического испытания не разрабо-
таны.
Из числа известных антигенов энтеробактерий значение для
серологической идентификации имеют три: О-, К- и Н-антигены.
О-антиген расположен в клеточной стенке бактерий. Он
представляет собой липополисахаридо-протеиновый комплекс.
В этих соединениях содержится полисахарида около 60%, липи-
да— 20—30%, белка — от 3 до 12%. Липид связан с токсиген-
иостью, протеин обусловливает иммуногенность, полисахарид
является компонентом, определяющим антигенную специфич-
ность. Липополисахарид (ЛПС) расположен во внешней мемб-
ране и лишь незначительные участки его обнаруживают за пре-
делами клеточной стенки (специфические боковые цепи полиса-
харида О-антигена).
Полисахариды энтеробактерий содержат основное ядро
(R-специфическая часть), состоящее из 5 базальных сахапов:
гептозы, КД О (кето-деоксиоктулонат), глюкозы, галактозы и
5*
глюкозамина, и боковые цепи (S-спепифическая часть). Боко-
вые цепи несут детерминантные группы антигена и отличаются
у разных бактерий по составу дополнительных сахаров (рамно-
за, манноза, фукоза, абеквоза, колитоза и др.), по их количе-
ству, расположению и типу связей между молекулами.
По углеводному составу липополисахаридов было установ-
лено 33 хемотипа энтеробактерий. Некоторые из них являются
общими для ряда бактерий
О-антиген устойчив к физико-химическим воздействиям. Так,
он выдерживает нагревание при 120 °C в течение.2’/а ч, сохра-
няя основные антигенные свойства — агглютиногенность, агглю-
тчнабельность и агглютинннсвязывающую (адсорбционную)
способность. На свойства О-антигена не оказывают действия
спирт, 0,5% раствор формалина, нормальный раствор хлористо-
водородной кислоты (N 1ICI) и некоторые другие химические ве-
щества.
Полноценный О-антиген характерен для S-форм бактерий.
Нарушение синтеза ядра или боковых цепей, возникающее под
действием мутагенных факторов, приводит к постепенной дегра-
дации О-антигена (На-, Rh-. Rc-, Rd-, Re-мутанты) и к переходу
культуры от S- к полной К форме. S—»-R вариации приводят к
потере серологической специфичности и снижению гидрофильно-
сти полисахаридов, последнее проявляется в виде спонтанной
агглютинации при кипячении микробной взвеси. Обычно R-му-
танты можно определять по внешнему виду колоний («шерохо-
ватые» формы), но могут встречаться и переходные варианты:
«скрытая» или «серологическая» R-форма, когда бактерии из
внешне гладкой колонии не обладают серологической специфич-
ностью, при кипячении онн образуют хлопья. Появление S—>-R
мутаций затрудняет серологическую идентификацию энтеробак-
терий, а иногда делает ее невозможной.
К-атигеиы— капсульные или оботочечные структурные
элементы клеточной стенки, характеризуемые.как кцелые поли-
сахариды. Онн расположены более поверхностно, чем 0-антиге-
ны,'вследствие чего иногда полностью их экранируют. Послед-
ним объясняют феномен инагглютипабельносги “живых К+
(плюс) бактерии в О-сыворотках.
Однако в последние голы высказано предположение, что
К-антигены некоторых бактерий щ являются самостоятельными
антигенами, а представляют собой дополнительную химическую
группировку, присоединяющуюся к о<:новно1. у. О-антигену [Ors-
kov F., Orskov I., 1978J.
К-антпгечы серологически обособлены и не дают перекрестных
реакций.. Примером истинной капсульной формы_ К-антигена
являются К-антнгены клебснелл.
К-антигены менее устойчивы к воздействиям различных фак-
торов и являются неоднородными в этом отношении. По своим
свойствам и в зависимости от химио- и терморсзистентности
К-антигены обознаппют как А-, В , L-, М , Vi-янтигеиы.
55
Н-антигеиы являются веществом белковой природы (фла-
геллин),~из которого состоит жгутиковый аппарат подвижных
энтеробактерий. Полагают, что флагеллины различных бактерий
отличаются по первичной структуре белковых субъединиц. Жгу-
тики располагаются вне клетки в виде длинных нитей. В кле-
точной стенке локализуются так называемые крючок и базаль-
ное тельце, несущие функции прикрепления жгутика и обеспече-
йия его вращательного движения. Энтеробактерии являются п<е-
ригрихами (жгутики расположены по всей поверхности клетки).
У Н-антигенов сальмонелл наблюдаются фазовые вариации.
Н-антигены, как белковые соединения, термолабильны, одна-
ко их агглютиногенные свойства нарушаются более замедленно,
чем агглютинабельность и агглютиниисвязывающая способность,
например лишь при кипячении в течение 2 ч. Обработка 0,5—
1% раствором формалина не влияет на антигенные свойства
Н-антигенов.
Характерные для каждого рода особенности О-, К- и Н-анти-
генов и антигенная структура бактерий приведены далее в соот-
ветствующих разделах. На основании данных об антигенной
структуре энтеробактерий проводят их серологическую иденти-
фикацию.
При установлении родовой принадлежности культур возмож-
на постановка ориентировочной серологической пробы выделен-
ной культуры с соответствующими поливалентными (к шигел-
лам, сальмонеллам или др.) сыворотками. Результаты ее могут
служить дополнительным ориентиром в выборе необходимых
дифференциально-диагностических биохимических тестов.
Проведение последующей идентификации энтеробактерий
подробно описано в разделах, посвященных отдельным родам
семейства Enterobacteriaceae.
Глава 3
ХАРАКТЕРИСТИКА РОДОВ.
ВНУТРИРОДОВАЯ ДИФФЕРЕНЦИАЦИЯ
РОД ESCHERICHIA
Обширная группа бактерии, включенная в род Escherichia,
состоит из близких по биологическим свойствам микроорганиз-
мов. Эта группа объединяет лаьтозоположнтечьнце.и лактозо-
отрицательные. разновидности, в том числе безголовые, извест-
нье ранее под другими названиями (Paracolon, Alkakscens —
Dispar и др.). Средн эшерихии насчитывается большое число
разновидностей, отличающихся между собой по ферментатив-
ным, серологическим свойствам и подвижности, по чувствитель-
ности к бактериофагам н колнцинам, по степени антагонистиче-
ской активности и патогенности. Естественным местом обитания
эшерихий является содержимое толстого _кишечника людей,
млекопитающих животных, большинства птиц и многих Пресмы-
кающихся, рыб и насекомых. С испражнениями эшерихии попа-
дают во внешнюю среду.(почва,вода. овощи, фрукты и др.), где
легко приспосабливаются к новым условиям существования.
Знаменательным было открытие этих бактерий Т. Escherich,
педиатр — профессор клиники детских болезней в Граце, искав-
ший возбудителя «детской холеры», свирепствовавшей в то вре-
мя, выделил в 1885 г. из кала больного младенца бактерии, за-
подозрив их как возбудителя детской диареи. Вскоре он обнару-
жил аналогичные микроорганизмы в кале здорового ребенка, а
затем и в содержимом кишечника людей разных возрастов, ко-
торые были названы Bacterium coli commune (Escherich T.,
1886].
Однако в начале века выяснилось, что в действительности
это не одна разновидность, а группа бактерий coli.
Эшерихии вызывают кишечные инфекции и парентеральные
формы эшерихиизсв, протекающие как менингит, сепсис, энце-
фалит, множественный неврит, пиелит, пиелонефрит, цистит, хо-
лецистит, перитонит, аппендицит, панкреатит, пневмония, брон-
хиальная астма, назофаришит, отит, конъюнктивит, офтальмит,
тиреоидит, пиемические, септикопнемические и токснкосептиче-
ские осложнения; выделяются при раневых, а также ожоговых
заболеваниях, у хирургических больных и при особых формах
шизофрении.
Эшерихиозная инфекция характеризуется полиморфизмом
клинической картины заболевания, что связано не только с эпи-
демиологической ситуацией, возрастом и состоянием защитных
57
сил организма заболевшего, но и с биологическими свойствами
самого возбудителя. В этом плане особый интерес представляют
генетические детерминанты — плазмиды, которые насчитывают-
‘СЯ~в билБШом количестве у~бактерпй этого рода и относительно
легко передаются от одной разновидности эшерихий к другой, а
также от энтеробактерий других родов.
Классификация и номенклатура. В основу систематики
эшерихий были положены разные принципы, в связи с чем эти
бактерии по-разному называли. McConkey (1905) по фермента-
ции сахарозы и дульцита разделил всю группу на В. coli com-
mune, В. coli lactis, В. lactis aerogenes, В. neapolitanum, к кото-
рым I. Kligler (1914) добавил E. coli communion В 1921 г.
McLevine, применив качественные реакции на образование аце-
тилметилкарбинола (реакции с метиловым красным и Фоге-
са — Проскауэра), a S. Koser — на усвоение мочевины и лимон-
ной кислоты, разделили группу coli на две подгруппы: Coli и
Aerogenes. Тот же принцип разделения бактерий Coli—Aerogenes
был принят в систематике Bergey (1925). Параллельно с пере-
численными появился термин В. paracoli для лактозоотрицатель-
ных вариантов В. coli. В дальнейшем исследователи обнаружи-
ли новые разновидности среди этих бактерий и ввели дополни-
тельные обозначения.
Наиболее долго существовала получившая широкое призна-
ние классификация [Минкевич И. Е„ 1949], согласно которой
группа Coli разделялась на 8 видов: В. coli commune, В. aeroge-
nes, В. citrovolum, В. cloacae, В. coli anaerogenes, В. aquatilis
communis, В. coli mutabile, B. paracoli. Одпако, как теперь вы-
яснилось, эта классификация объединяла бактерии, принадле-
жавшие не только к Escherichia, но и к другим родовым груп-
пам (Citrobacter, Enterobacter и др.). В 1953 г. по решению
Международного комитета по номенклатуре было упразднено
родовое название Bacterium и В. coli получили наименование
Escherichia coli.
Первая международная классификация эшерихий принята на
5-м Международном конгрессе микробиологов (1951). Род
Escherichia был разделен па два вида: Е. coli (включая Alkales-
cens — Dispar) и Е. freundii (включая Bethesda — Ballerup). По
предложению Международного Подкомитета по Enterobacteria-
сеае (1958) в составе рода Escherichia рассматривают только
один вид — Escherichia coli. Подкомитет считает, что так назы-
ваемая группа Alkalescens — Dispar не может занимать особого
места в систематике Escherichia, так как безгазовые, неподвиж-
ные, ла^тлзоптрицатеяьные Е. со1!’1Плеютс5Г~среди разных серо-
"логических О-групп. В последнем издании «Определителя бакте-
рий Берги» (1974) род Escherichia представлен одним видом
Е. coli.
К^алее вид Е. coli разделяют на.серовары. на основании раз-
личий в антигенной структуре (по О-, К- и Н-антигенным комп-
лексам).^
58
Большим научным достижением явилось открытие у эшери-
хий поверхностных К-антигенов (1944—1947), что объяснило
непонятные и непсддававшиеся ранее изучению особенности се-
рологических свойств этих бактерий. В результате интенсивного
изучения антигенной структуры эшерпий в J947 г. была создана
дифференциально-антигенная схема КяггПшянп — Knipschildt —
Vhhlne [КаиИгпатг Г„ 1966], которая легла в основу диагности-
ки серологически обособленных разновидностей эшерихий.
Это дало возможность в 1950 г. впервые сравнить между со-
бой штаммы, обнаруженные в разных странах при групповых
заболеваниях диареей детей раннего возраста, и выделить оди-
наковые по антигенной структхре микроорганизмы. ’1ак были
установлены возбудители эпи гемических колиэптеритов детей,
получившие название энтсропащгениы.х Е c.pli (I.PEC). ,
В международном плане имеется договор! шбСть о Порядке
размещения символов антигенов: н^дгерром месте. 0,. на вто-
ром К и на третьем II. В антигенной формуле эти группы анти-
геногГраздёляюгся "между собой двоеточием. Каждая группа ан-
тигенов имеет порядковый номер, например, 1, 2, 3 и т. д.
Обнаруженные компоненты в соответствующем антигенном
комплексе обозначают малыми буквами латинского алфавита.
Одноименные буквы в антш^нных формулах эшерихий разных
ceporpynn не коррелируют с однотипностью антигенов, иными
словами — одноименными буквами обозначаются качественно
разные антигены |Голубева II. В., Улиско II. Н., 1973]. Единст-
венный вид рода Escherichia — E._coli делится на серологиче-
ские группы по сочетанию О- или ОК-антин чов, далее разде-
ляющиеся на серовары по сочетанию Т5КН- нлн ОН-антигенов.
Биологические характеристики. Эшерихии —
мелкие и средних размеров, подвижные и неподвижные, грамот
рицательиыр, не< пчтроносные, нередко имеющие капсулу палоч-
ки, хорошо растущие на обычных плотных и жидких питатель-
ных средах. На’ плотных средах эшерихии образуют выпуклые
колонии средней величины, в тажные, блестящие, прозрачные и
непрозрачные в проходящем свете, круглые с ровным краем
(гладкие формы) или более плоские, сухие, со слегка волни
стым краем (шероховатые формы). Возможно образование
мелких прозрачных колоний, напоминающих колонии шигелл и
сальмонелл, а также слизистых крупных колоний, похожих на
колонии клебсиелл. В жидких средах эшерихии растут диф-
фузно либо дают осадок или пленку на поверхности, кольцо на
стенке пробирки На селективно-дифференциальных средах типа
Эндо лактозоцоложите тпные штаммы обра зуют колонии, напо-
минающие колонии других энтеробактерий, ферментирующих
лактозу: темно-красного цвета с металлическим блеском или без
него. Культуры слабо, замедленно ферментирующие лактозу об-
разуют розовые или слабоокрашенные в цвет среды колонии ли-
бо бесцветные с интенсивно окрашенным центром. Эшерихии, не
ферментирующие лактозу, образуют бесцветные колонии на сре-
59
де типа Эндо с желтоватым оттенком на среде Плоскирева^
иногда сходные с колониями шигелл. При исследовании в косо-
проходящем свете по методу Landy колонии эшерихии име-
ют разное свечение и структуру.
По морфологическим, ферментативным и культуральным
свойствам патогенные и непатогенные разновидности эшерихий
не отличаются друг от друга. Поэтому поиск патогенных ва-
риантов в исследуемом материале чаще всего проводят на фоне
обильного роста банальных эшерихии, что весьма затрудняет
выделение и идентификацию возбудителей, принадлежащих к
роду Escherichia. При эшерихиозной инфекции, по-видимому^,
наибольшее патогенетическое значение имеют система защиты
бактерий, связанная с наличием у эшерихий К-антигенов и ко-’
лицинов; факторы колонизации, связанные с множеством фимб-
рий, детерминированные факторами CFA/I. CFA/П, К88, К99,
987Р; наличие у эшерихий собственных агрессивных веществ
разных токсинов, гемолизинов, контролируемых плазмидами
Ent, Н1у; факторы активной защиты этих бактерий, обусловлен-
ные R-плазмидами.
Существует мнение о том, что выше перечисленные детерми-
нанты, контролирующие соответствующие свойства бактерий и
способность эшерихий к внутриэпителиальному размножению,
коррелируют с вирулентностью эшерихий и с определенным па-
тогенезом заболевания, поэтому их причисляют к факторам па-
тогенности этих бактерий *
В последнее десятилетие в связи с распространением эпиде-
мий холеры особое внимание привлекли энтеротокснгенные
Е. coli (ЕТЕС), вызывающие диарейпые заболевания у взрос-
лых (диарея путешественников) и детей (ЕТЕС-диарея). при ко-
торых обезвоживание организма больше, чем при холере. Ука-
занные кишечные формы эшерихиоза контагиозны, особенно они
распространены в сухой период, путями передачи инфекции яв-.
ляются большей частью вода и пищевые продукты. У животных
ЕТЕС вызывают энтеротоксигенный колибациллез и септице-
мию, нанося значительный экономический ущерб народному хо-
зяйству в результате высокого падежа скота.
Энтеротоксигенность эшерихий связывают с двумя токсина-
ми, неодинаковыми по устойчивости к нагреванию — стабп чьими
токсин (ST), низкомолекулярный, не обладающий антигенными
свойствами, и лабильный токсин (LT), по антигенным и токси-
ческим свойствам близкий к холерогену. Существуют штаммы
Е. coli, продуцирующие ST или LT или одновременно ST/LT.
Генетический материал, который контролирует продукцию этих
энтеротоксинов, локализуется в бактериальной плазме До сих
пор не выявлено биохимических отличий ЕТЕС от неэнтероток-
сигениых Е. coli, поэтому распознавание этих штаммов сложно
и основано на выявлении продукции энтеротоксинов.
Эшерихии обладают поверхностными структурами, именуе-
мыми фимбриями (pili) или ресничками. Некоторые пили явля-
(0
ются факторами колонизации, о услпвливающимн адгезивность
этих бактерии — способность прилипать к другим клеткам "Так
пили, ответственные за колонизацию тонкого кишечника живот-
ных, связывают у эшерихий с поверхностными антигенами бел-
ковой природы К88, К99 и 987Р. За колонизацию кишечника
человека ответственны лкш двух типов: CFA/I и CFA/1I. По
своим физическим, хпмвчАким, функциональным и антигенным
свойствам перечисленные пили отличаются друг от друга. Кроме
того, широко распространены пили типа I («общие I пили» —
«common pili»), роль ксторых в колонизации кишечника неиз-
вестна. Пили могут быть отдифференцированы по характеру ад-
гезии; к эпителиальным клеткам или гемагглютинации с эритро-
цитами „разных Лидсе животных. Пили типа I обусловливают
мавнозозависнмую гемагглютинацию эритроцитов морской свин-
ки, а К88, К99. CFA/I и CFA/II мапнозорсзнстентную гемагглю-
тинацию. Антигены К 88 и 1<99 ведут себя серологически подоб-
но К-антигенам полисахаридной природы, обусловливая фено-
<ме]| О-ннаггл:отинабельности эшерихий, В отношении факторов
колонизации Кишечника животных известно, что в разных стра-
нах К88 часто обнаруживается у Г ТГС свине.й, 987Р — у ново-
рожденных поросят, а'К99 является ведущим фактором колони-
зации кишечника у телят и ягнят
При культивировании на агаровых средах многие штаммы
эшерихий утрачивают эти три разновидное ги (гилей, восстанав-
ливая их при длительном культивировании в бульоне. Иммуно-
флюоресиеь гное окрашивание бактерий (с использованием спе-
цифических .сывороток— К88, К94 987Р), выращенных на сре-
дах или непосредственно из колонизированного кишечника, яв-
ляется простым и доступным методом их обнаружения.
Факторы колонизации CFA/I и CFA/11 человеческих ЕТЕС
штаммов описан^ недавно, но уже известно, что они более тер-
чяостабильны и иммуногенны, чем пили трех типов, описанных
у штаммов, выделенных от животных. ( ыворогки CFA/I и
CFA/II, полученные при иммунизации крезпков, дают положи-
тельные результаты в пластинчатой реакции агглютинации.
Большинство штаммов с этими факторами продуцируют LT
и ST.
Несмотря па недостаточную изученность факторов патогенно-
сти у эшерихий, имеются сведения о конкретных сероварах этих
бактерий, у которых с наибольшим постоянством обнаружива-
ются только энтеротоксины либо энтеротоксины в сочетании с
факторами колонизации. ЕТЕС-штаммы обнаружены среди се-
роваров: 07:1118, 08 : К47 : Н-~, 08 : К25 :119, 015: НН,
025 : К98 : Н—, 073 : Н45, 0114:1121, 0115: Н51, 0128:1121
0138 :Н14, 0139: К82:Н), 0141:114, 0148 Н28, 0149: НЮ,
0159: Н4. Штаммы Е. coli, продуцирующие только ST, обнару-
жены средн эшерихий ссроваров: 09 : К84 :112, 027 : Н7,
027 : Н20, 0153 : НЮ. Штаммы ЕТЕС, обладающие СГА/I, най-
дены у эшерихий сероваров: О20:К+:Н—, 025 : К7 : Н42,
61.
063: Н12, 078: Н12, 078 : Hll, OJ53: Н12, a CFA/I в сочетании
только с ST описаны у эшерихий 0128 :Н12. Штаммы ЕТЕС,
имеющие CFA/II, обнаружены у эшерихий сероваров: 06 : К15 :
Н16, 08: К40: Н9. Известны штаммы, у которых одновременно
присутствуют LT, ST и К88 — 08 : К87 : Н19, 0141 : Н4, 0149 :
НЮ, 0157 :Н19. В то же время К99 встречался только у
штаммов с ST — 08 : К85 : Н—, 09 : К35 : Н—, 020 : К+ : Н—,
0101 : К28: Н—, 0115. Пили-антиген 987Р обнаружен также у
эшерихий, имеющих ST — 09 : КЮЗ: Н—, 020: К101: Н—.
Однако лишь дальнейшее накопление фактического материа-
ла позволит объективно оценить степень коррелятивной связи
эшерихий определенных сероваров с генетически закрепленными
у них пилями и энтеротоксинами.
Исследования ЕРЕС, выделенных на разных территориях во
многих странах, показывают, что не менее половины циркули-
рующих штаммов обладает множественной лекарственной устой-'
чивостью, связанной с наличием R-плазмид. Распространению
таких штаммов способствует широкое использование антибиоти-
ков для лечения различных заболеваний. Штаммы с R-плазми-
дами встречаются также у ЕТЕС и других эшерихий. Среди
ЕРЕС широко распространены штаммы, обладающие колицино-
генными и гемолитическими свойствами, генетически закреплен-
ные плазмидами Col и Н1у, наличие которых у штаммов может
свидетельствовать о их патогенности. •
Существует мнение, что у эпидемических штаммов ЕРЕС
обычно не обнаруживаются известные энтеротоксины. И в то же
время к числу ЕТЕС (энтеротоксигенных) относят эшерихии ря-
да сероваров из числа известных ЕРЕС, как, например, 020:
К : Н—, 0114 : Н21, 0128 : Н12, 0128 : Н21 и некоторые другие.
К началу прошлого десятилетия стало известно об энтеро-
инвазивных Е. coli (EIEC), способных к эпителиальной инвазии,
которая определяется по тесту Sereny, т. е. по способности вы-
зывать кератоконъюнктивит у морских свинок или в культуре
ткани с использованием клеток HeLa. Многие представители
EIEC имеют антигенные взаимосвязи с шигеллами.
Основываясь на наличии идентичных или близких антиген-
ных комплексов с шигеллами н положительного теста Sereny,
свойственного шигеллам, эшерихии этих серогрупп считают воз-
будителями дизентериеподобных заболеваний. Среди них наи-
более известными и широко распространенными являются Е. co-
li 0124 : К72, имеющие О-антиген, идентичный с S. dysenteriae 3.
Как теперь установлено, Е. coli 0124: К72 имеет антигенное
родство по К-антигену с К- pneumoniae К22 [Киселева Б. С.,
1982]. По данным опорных баз Всесоюзного центра эшерихий,
выделение Е. coli 0124 : К72 регистрируют в 33 и 15% случаев
соответственно при острой и хронической дизентерии [Голубе-
ва И. В. и др., 1973].
Среди известных представителей EIEC 0144: К описаны се-
ровары с разной способностью к внутриэпителиальной инва-
€2
зии — 0144: К: Н—. вызывающий кератою ньюнктивнт у мор-
ских свинок, и 0144 К 114, не обладающий этой способностью
[Киселева Б. С. и др, 1975].
Эшерихии разных сероваров могут обладать одинаковыми и
неодинаковыми биологическими свойствами. Когда эти свойства
у штаммов известны, целесообразно указывать их рядом с наз-
ванием выделенного микроба. Например Е. coli 025 : К7 : Н42
ЕТЕС, CFA/I; Е coli 012ч : К72 EIEC; Е. coli 020: К84 ЕРЕС,
Hly; Е coli 0139 : К82 : Hl ЕТЕС (ST); Е. coli 0149 : НЮ ЕТЕС
(LT/ST), К88 Поэтому нет необходимости вводить иные обозна-
чения для Е. coli, как, например, дизентериеподобные, холеропо-
добные, ЭПКП I, ЭНКП II катеюрнн и др. Наличие тех или
иных факторов патогенности, результаты исследований на неко-
торых экспериментальных моделях свидетельствуют лишь об
особых биологических свойствах выделенного штамма Е coli.
\ Эшерихии ферментируют углеводы с кислот«образованием:
постоянно — глюкозу (с газом или без него), маннит; обычно
ферментируют лактозу (иногда замедленно), не ферментируют
адонит и инозит (крайне редко наблюдаются положительные
реакции) другие углеводы и многоатомные спирты сбраживают
вариабельно; не образуют сероводород на средах с хлоридом
железа; обычно не утилизируют цитрат, малонат; не имеют фе-
ннлаланиндезаминэчы, уреазы, желатиназы; утилизируют аце-
тат, дают положительную реакцию с метиловым красным и от-
рицательную Фогеса — Проскауэра; постоянно имеют лнзинде-
карбоксилазу и непостоянно — орпптпндскарбоксилазу и аргн-
ниндегидролазу Не растут в средах с KCN (табл. 13).
По первым шести тестам, указанным в табл. 13, можно четко
определить принадлежность выделенной культуры к Е. coli. Не-
Таблица 13. Основные биохимические свойства Е. coll
Тест или субстрат Результат реакция Тест или субстрат Результат реакции
Цитрат Снмонса — Аргнниндегндролаза X
Мочевина — Адонит —. +
Малонат натрия — Арабиноза X
сероводород — Г пэкоза (газ) +• —
Феинлалаииндезамииаза — Дульцит X
Ацетат натрия +. (+) Инозит — +
Подвижность +. - Ксилоза X
Индол + . — Лактоза X
Лизиндекарбоксилаза X Манинт +
Реакция с мети.дэвым Мальтоза X
красным + Рамноза X
Реакция Фогеса — Про- Рафиноза X
скауэра —— Салицин X
Цитрат Кристенсена X Сахароза . X
Желатин —— Сорбит • X
Ориитиндекарбоксилазз X
63
Таблица 14. Биохимические свойства возбудителей кишечной формы вше-
Серогруппы Е. coll Тест иля
равняем доиит ГЛЮКОМ (гм) дулымт нцдоя инозит ксилоза Лактоаа
-Ol : KI 02: KI 04: КЗ 06: К13 016: К 016 :К1 О17:К16 О18аЬ:К76 О18ас: К77 019: К О20:К84 021: К20 025: КП 026: К60 О28ас: К73 032: К— 033: К— 038 : К 044: К74 О55:К59 075: К Ю78:К80 О86а: К61 Oillab :К58 O112ab:K68 О112ас:К66 О114:К90 0115: К— О119:К69 0124: К72 0125 :К70 0126: К71 0127: К63 О128аЬ:К67 О128ас:К67 0129: К— 0135: К— 0136: К78 0142: К86 0143: К— 0144: К— 0148: К— 0151: К— «408> +/ * 4 4 д. - — 4) ±i±±i।।t।।±।।±।t।।tfe।।t।।।।।।it।।।।।।।।+।।+ III 1 1 1 1 1 1 1 II II •u ’ 1 ч 4 4 - - 4 4 4 + i ’ ТГТТТ -Г "Г -r^-r-r-F^T-r-r-r ITITI П 1 1 1 1 >-Г 4 4-11114 1 J 1 I 1 1 + -(+)/+ -(4)74 —(4)/4 l+,++ - -/(+) -(+)/+ ч 4(4)/— —(4)/4 ч— -/4 -(+) (4)- -7+) 4(4)- 4(4)/- ч— (4)4 4(4)- (4)4 (Ч-)Ч- ++- 4- - (4)/4 (4) (+)/+- (4) '-Н 4 (4)/4 -Н-) (4)4 -/4(4) 4/— 4(4)Н - - ч ч- А. h и г /- 1 -7+ -£4 / I ч 4 4-/ 4ч 4 +1 +1 44 (4 (- Ч if д 4) 4) )4 Н h г )/- Ч h • 4)- 4 - - - г h )4 1- 1- I- И 1- 4 —/4- -4(44 -4(4-) (-4)4- -4+) + 4/- -t4) -44)4 - 4 Г 4(4) 4/(4) 4(44- (4)4 (4)4 <4+ (4)4 4 4 t 4 4 — (4>— 4 4 4(4) (4)-/4 4
- ч 4 - -+ - h 1— - (4) 1- ч- 4 4/- +1- + 4 ч- ч- 4 ч- 4 (4) + ч- ч- + - - ч- 4 4/-ч ч- ч- ii 11111111111111111 ill । ij 4- 4 ч ч - 4/(- (4)- - - (4 ч
которые ферментативные признаки вариабельны и у эшерихий
отдельных ceporpynn есть свои особенности (табл. 14).
В связи с тем что лактозоположительные эшерихии часто об-
разуют на средах колонии, ие отличающиеся по внешнему виду
от колоний энтеробактерий других родовых групп, расщепляю-
щих лактозу, предложены тесты для нх дифференциации
(табл. 15).
<4
(мимоза [Голубева И. В., Киселева В. С., 1982]
* субстрат
мальтоз* | маяянт рамном рафиноаа салипая сахаром сорбит подвиж- ность
+ + (+)+ - -(+) -(+) -7+ (+)/+- + —
+ + — —(4 >/4 +(4-)- +/- +/-
- - + +/(+) —/ F -(4) — 4- + /-
- - + 4- -(+) (44- - 4- 4- +
+ • (4) 4- 4-
। .- + 4- 4/— -/+ -/(4-) 4- —
i + 4-/(4-) 4/(4-)- -(44/4- - (44/4- + -/4-
+/- 4- 4- - + 4 4 +/-
+ +/- + - (+)- + +/- +/- +/-
т .. • + 4- -(4) +/- 4- +
+ - — +/- (4-)4- (+) -(+) 4- -(F) +/-
4- — 4-/(4) — (1) + —
+(+) - - 4- -(4)4 -(1)4 -(4-) 4 +(+) -/4-
+/— +(+)- 1(4-)— -(F) (4-)/- 4-/- 4-/-
+(+)— — +(+) - + — +(4 ) —
4-(+) - + - + 4- - -(4-) —— (4-) F. -/+
4- + + • (4 ) 4 4- +/-
4- 4- + 4-/- —- 4-/- + -/+
4- 4- 4- • • — + — 4- +/-
+(+)- +г- (F)4- - (-Н4- - -(1 )4 (4-)- 4- - +(+) 4*/—
4- + +/- + - - 4(4-) 4- 4- 4-/-
' + + + (4-) 4- + — +
+(+) 4- 4- 4- - -44) -(1) 4-
4— +/- +(+)- 4- ( 14 — + — +/-
(+)+ — + — - ( 14 (44- +(4) +/-
(4-1+ -- +(+) 4- 4(1) -(4 4 1- + ——
+ — 4- • (1 ) (44 + +/-
4- - — (4-)4 — + ( 1 >- 4- -/+
— . -- — • ( 14 + + - ч "F7—
+(4-) — (+)- + —> - 444-) —— +(+)/— ‘ + -
— 4- + (14 (44 + +
- - + +/- 4-/- +/- (4-)- + (4-)+ + /-
+ + • — 4- 4-
4* 4- 4- (4-) (44+ (4-) +
- - + (+) — (4 ) — + +
“ - + + 4- -(4)4- -/(+) +(+)- — 4-
- - + 4' 4- (4-) 4- -( н 4- ' 4-
+/- + (+)+ - + - (4-)- (14 4- +/—
4- 4- + • +/- —/+ • +
-(+) + 4- -/(+) -(1) +
4- + +(+)/- 4-/- -/(+) (4-)/1— - (+)+
+ + + + 4- + 4- 1+
4- 4- + —— (4-) Ь/—(4-) — 4-
4- + + — (4-)-»-/- • —- 1 4-/(4-)- 4-
Для дифференциации Е. coli, не ферментирующих лактозу
Или ферментирующих ее замедленно, можно использовать тес-
ты, представленные в табл. 16.
Антигенная структура и серологическая идентификация
Антигенная структура Е. coli весьма сложная. Описано мно-
го групп антигенов: О, R, К (L, В, А), Н, М, а, р, [+, CFA/I,
5—817 65
Таблица 15. Тесты для дифференциации Е. coli от других лактозоположн-
тельиых энтеробактерий
Мккрооргигазмы
Тест или
субстрит
Цитрат Симон-
са
Мочевина
Малоиат нат-
рия
Сероводород
Подвижность
Индол
Метиловый
красный
Фогеса—Прос-
кауэра
Лизиндека р-
боксилаза
Сфиитии декар-
боксилаза
Адоиит
Инозит
Дульцит
Примечание. Результаты реакций даиы при 37*С.
CFA/П и другие пили-антигены (фимбриальные), общий гетеро-
генный, рибосомные и некоторые другие. Структурно эти антиге-
ны расположены неравнозначно: О-антигенный комплекс — в
оболочке клетки бактерий; рибосомные — внутри цитоплазмы;
f+, фимбриальные, Н (кроме базальных зерен) — на поверхно-
сти клетки; К — в оболочке или за ее пределами в капсуле.
Для построения антигенно-диагностических схем и серологи-
ческой идентификации наиболее важное значение имеют О-, К-
и Н-антигены. Остальные антигенные комплексы представляют
интерес в основном в раскрытии механизмов патогенеза, уста-
новлении факторов патогенности микробов в генетических ис-
следованиях и при решении других вопросов.
Однако некоторые свойства указанных антигенов следует
отметить, так как они должны учитываться при диагностиче-
ской работе. Обнаруженные у Е. coli термолабильные а-'и ₽-ан-
тигены имеют близкое родство с антигенными комплексами
эритроцитов человека с группой крови А, В, 0 и ряда животных,
в сыворотке крови которых имеются антитела к этим антигенам.
Гетерологичный антиген Куинна (типа гаптена) термолаби-
лен, легко выходит в надосадочную жидкость взвеси убитых иа-
66
Таблица 16. Тесты дли дифференциации лактозоотрмцательных Е. coll от других лактозоотрица’
_ арэшац I + l+t+L| |x | |X | | | | .,>•
t н аюао|Хва + ljt++| |x | |x | | | |
«э||||оэ -OJ9|tn V|U|«Jdjl l+l 1 1 |X+I |tx1 Lx 1
fuqirnwu] 1 ++ + 1 1 1+ -++I 1 |XX( I , , + II
++Г1++1+1 1 |xx’ + | + +
« • IfUVBjOW a 1 +1 1 ++ ’-+1 14-xx | । । ‘ +
'Hiqtipa + • 1 ~+1 +++1 l+XX I I I + +
<paB|HA < 1 x+l+++^+l IJXX I I I
tU39 •Sdajtm tpujas +x11I+I+X++XXXX1
Р*|» »|«KH X IX I I X I+x++~x 1 1 1 1
«П«ш -oiaptouiqj *x ii Liiii+iiixi++i
9VU9VZ0 *)| XX11|1l+lX|xx+x1
•₽J»1 •Пацрлмра 111+I+++I++X+I11
(1 *<* -YOU) •|pOOUJ|»S L11L i L । +1 L+x L + + + + + |Х +
•H»»I4S 111111 L.+i iti t 1 1*
if» -a 11111 LL+i Lx?L ++ + +jl- t"tx 11 о
Тест мя субстрат ’Цитрат Симонса Мочевина •Малонат натрия Серово*>од ' Феилалаииндезамннаэа Подвккиость Иидол Матшовый красный Фогаса—Проскау зра Лимидскарбоксилаза Ориитиидекарбоксилаза Алйаиивдй Глюкоза (/аз) Адонит ’ -Ижжят Дульнит
Прамачаияа. Результаты реакций даны при 37*С.
б*
греванием бактерий, является общим для разных видов и родов
энтеробактерий. Его присутствие может приводить к ложным ре-
зультатам при использовании диагностических препаратов невы-
сокой специфичности.
фимбриальные антигены белковой природы частично тормо-
зят О-агглютинацию живых бактерий, поэтому их относят к
группе К-антигенов. Установлена частичная общность некоторых
фимбриальных антигенов эшерихий и шигелл (S. flexneri), в
связи с чем часто наблюдается агглютинабельность эшерихий
в шигеллезных сыворотках.
Присутствие у эшерихий термолабильного антигена f+ при-
водит к появлению зоны задержки пробирочной агглютинации
в первых разведениях сыворотки и медленному образованию
агглютината в реакции агглютинации на стекле. У слизистых
форм эшерихий обнаруживается термолабильный М-антиген,
имеющий близкое родство с М-антигеном сальмонелл. Его нали-
чие в культуре препятствует проявлению агглютинабельности
бактерий в OK-сыворотках. Он может присутствовать у бакте-
рий одновременно с А-антигеном или другими К-антнгенами.
Содержащие М-антигены штаммы эшерихий встречаются неред-
ко и часто дают реакции с некоторыми К-антителами — эшери-
хиознымн КЗО, К39 и клебсиеллезными — К8, КИ, К13, К21,
K35i Поэтому уже на ранней стадии идентификации эшерихий
необходимо обращать внимание на наличие слизистых колоний:
полученные из них культуры могут содержать М-антиген.
Антиген О эшерихий, так же как у других энтеробактерий, —
специфический лпноиолисахаридо-протеиновый комплекс. Осно-
вываясь па различии О-антигспа эшерихий Кауфман использо-
вал серологический метод и успешно разделил эту группу бак-
терий первоначально на 20, а затем на 58 и НО О-групп. В на-
стоящее время число групп О-антигенов эшерихий значительно
увеличилось, достигнув порядкового номера 164, но это еще не
предел, так как нередко встречаются штаммы, которые не иден-
тифицируются диагностическими сыворотками к известным раз-
новидностям О-антигена.
Для получения О-антигена культуру эшерихий кипятят (на
водяной бане) в течение 2’/2 ч. При приготовлении антигена для
реакции О-агглютинации культуру кипятят один час, а в отдель-
ных случаях (когда штамм имеет А-антнген) прогревают 2 ч
при 120 °C. Антигены О, прогретые при 100 °C или 120 °C, консер-
вируют 0,5% формалином и хранят при температуре 5 °C.
Входящий в липополисахаридо-протеиновый комплекс липид
А определяет токсические свойства, присущие О-антигенному
комплексу, ранее связываемые с понятием эндотоксина. Указан-
ная особенность О-аитигена имеет важное патогенетическое зна-
чение при эшерихиозной инфекции. Серологически специфиче-
ский полисахаридный компонент комплекса варьирует по соста-
ву моносахаров и структуре, чем объясняется большое многооб-
разие серологических разновидностей эшерихий по О-антигену.
68
разделены на хемотипы, к одному хемотину оничсп» .........
разных О групп с одинаковым составом полисахарида. Из 33 из-
вестных хемотипов кишечных бамерий 28 содержат липополи-
сахариды О-антигенов эшерихий
Некоторые хемотипы (I—VIII и X—-XIII) являются общими
для эшерихий и сальмонелл, другие (XVII ХХХ1П) характер-
ны только для эшерихий. Приведенные данные могут объяснить
перекрестные реакции между О антигенами эшерихий [0rs-
kov F. el al., 19671 Fine не закончено изучение состава липопо-
лисахаридов О-анпп снов эшерихий и не завершена их сероло-
гическая классификация. Крайне мало сведений и об их фактор-
ном сое । а не.
Факторный состав О антигенов у эшерихий пока обозначают
только в пределах своей серологической группы: обычно общий
фактор-—-символом «а», дополнительные—«Ь»к «с», «d» и т. д.
Перечень О-факторов обычно указывался у антигенов ЕРЕС,
как, например. ОЯба и O86ab; Oillab и Oil lac; O112ab и
О112ас; О125аЬ и О125ас; О127а и O127ab; 0128а, О128аЬ и
О128ас.
Эти детерминанты не изучены иммунохимически, хотя выяс-
нение состава полисахаридов их О-аптигенов могло бы вскрыть
сущность многочисленных О-аш щепных связей эшерихий как
между собой, так и с ирелставн[елями других родов энтеробак-
терий.
Следует указать, что в О-анннепс эшерихий могут присутст-
вовать термолаби.тытые фракции, к которым в настоящее время
склонны OIHCCHI некоторые К антигены, главным образом В
|0rskov I. el al., 1977|. рапсе причисленные Кауфманом к обо
лочечным или поверхностным соматическим антигенам эшерн-
хии. В этом плане интересны результаты иммупохимического и
серологического изучения некоторых штаммов, показавшие, что
имеются перекрестные серологические реакции между О- и
К-антнгенамн как внутри рода эшерихий, так и с представите-
лями других родов | Елюбаева Л. М., 1971; .1апп В. et al., 1971].
Выяснение антигенных взаимосвязей бактерий, помимо тео-
ретического интереса, имеет важное практическое значение для
лабораторной диагностики эшерпхнозов
Во Всесоюзном центре по эшерихиям при ЦНИ11ВС
им. И. И Мечникова сведения об антш сипом родстве эшерихий
с шигелламн систематизированы и проверены в опытах пере-
крестной адсорбции агглютининов (табл. 17).
В табл. 18 приведены данные об антигенных взаимосвязях
между эшернхиямн и сальмонеллами (цитировано по 1. 0rskov
et al , 1971).
В табл. 19 отражено антигенное родство эшерихий с клебси-
елламн
Внутр и родовое родство эшерихий по О-ангигеиу также об-
ширно, однако оно изучено еще недостаточно Во Всесоюзном
69
Таблица 17. Антигенные связи Escherichia и Shigella, подтвержденные и
вновь установленные [Елюбаева А. М., 1971]
ММ Shigella
Е. coll
dysenteriae flexnerl boydli
1 01 1 1, 4, 2, X, Y
И —— » 1
2 02 1, 4, 5, X, Y

3 03 1 4, 5
4 04 2, 3, 4, 5, X, Y
5 05 1, 2
- ——
6 07 6, 12
—— —1—
7 013 1, 2, 3, 4, 5, X, Y
8 016 1 о [1Л 1 го’ I
9 017 4
10 018 5
11 019 1, 2 1, 4, 5, X, Y
—
12 021 14
13 023 2, 8
—
14 025 1. 2, 4, Y
15 032 J4
16 035 1 ♦
17 038 8

18 044 1
19 050 X, Y, 1, 6 1

20 053 4
21 058 5

22 062 1, 2
23 069* 1 1, 2
24 073 7, 2, 4
25 076 6
26 079 5
27 083 14
28 085 3
29 087 1
30 096 2
31 098 13
32 0102 9
33 0105 10, 11

34 О112а, 112b 15

35 О112а, 112с 2
• *~*
36 0117** 2
70
Продолжение
Условные обозначения: п«-"ч*р»снуто «липй линией — двусторонняя анти-
генная связь; подчеркнуто двумя линиями идентичность антигенов; не подчеркнутая
цифра в колонках 3—5—односторонняя антигенная связь.
• Двусторонняя антигенная связь у Е. coll 069 (по К-антигену) с S. dysenterlae I.
•• Односторонняя антигенная связь Г coll 0117 (О-антнгена) с S. dysenteriae 2 (по
К-ян'нгену).
центре по эшернхиям в опытах перекрестной адсорбции агглю-
тининов исследованы штаммы эшерихий некоторых О-групп.
При этом установлены двусторонние связи по О-антигену у
эшерихии следующих групп: <>1—0135; 04—018; 07—05, 024,
025; 034—016; 062—016, 017, 044, 073, 077; 0120—0102,
0133; 0129-017; 0133-0102; 0135—01, 019; 0147—019, 055,
0133 [Елюбаева Л. М., 1971].
Таблица 18. Перекрестные реакции между О-ан-
г тепами F.. coli и Salmonella [Frantzen Л., 1950;
Kaiilfmann I'., 1У54; Rcfaii M., Rohde R., 1975]
E. coll 'ialmonrHe
Ol 042
02 055
06 040
015 050
021 ОЗЯ
023 051
014, 062, 068 )
070. 073, (>99 ] <16, 14
0106. 0122 1
055 050
075 Oil
085 017
086, 090 043
Olli 035
0132 017
0134 036
71
Таблица 19. Перекрестные реакции между О-ан-
тигенами Е. coll и Klebsiella pneumoniae [по I. 0rskow
et al., 1971]
Е. coll К- pneumoniae
O19ab 01, идентичный с 019b
09 03, идентичны
020 04, родство
08 05, идентичны
В работах Эрсковых имеются указания иа обширную полиаг-
глютинабельность прогретых культур эшерихий в О-сыворотках,
которая может быть связана не только с антигенным родством,
но и со случайным присутствием в сыворотке антител к изучае-
мым штаммам. Так, например, с сывороткой О1 реагируют О-ан-
тигеиы 2, 10, 14, 50, 53, 107, 115, 117, 148, 149, 150, 154; с сыво-
роткой 025 — О-антигены 4, 7, 13, 18, 19, 26, 36, 68, 102, 133, 138,
147, 158; с сывороткой 026 — О-антигены 4, 13, 25, 32, 100, 102.
В связи с этим в диагностической работе ие могут быть исполь-
зованы нативные сыворотки, а должны применяться иммунопре-
параты, очищенные от агглютининов к гетерологичным О-груп-
пам эшерихий. Технология приготовления последних довольно
сложна. Поэтому для точной идентификации О-антигена эшери-
хий необходимо большое количество перекрестно-адсорбирован-
ных факторных сывороток. Однако и в этом случае нельзя ут-
верждать, что выделенный штамм, отнесенный к какой-либо
О-груп<пе, действительно идентичен тест-штамму этой группы.
Достоверный ответ можно получить только по результату
взаимно перекрестной адсорбции сывороток, приготовленных к
испытуемому и тест-штамму.
При проведении серологических исследований для определе-
ния О-антигена необходимо иметь в виду своеобразие О-агглюти-
набельности, которая у штаммов, содержащих К-антиген, обыч-
но обнаруживается только после прогревания, когда разруша-
ются поверхностные антигены. Этот феномен получил название/
О-инагглютинабельности. I
При определении у эшерихий О-антигена К+ (плюс)-формы
(L и В) кипятят в течение часа. При сохранении О-инагглюти-
набельности после кипячения в течение часа можно предполо-
жить наличие в культуре А-антигена. В этом случае культуру
автоклавируют в течение 2 ч при.Д20°С. При работе с К-(ми-
нус)-формами используют живые бактерии, убитые кипячением
либо формалинизированные. Учитывают пробирочную О-агглю-
тинацию через 20 ч пребывания в водяной бане при 50 °C или
в термостате при 37 °C. Для адсорбции О-агглютининов культу-
ры, содержащие L- иЛи В-антигеиы, прогревают при 100°С,
культуры, содержащие А-антигеи, рассевают, выделяют бескап-
72
.сульиые. формы (прозрачные колонии) и с ними (живыми или
убитыми) ставят реакцию адсорбции. <
- У эшерихий известно 159 серологических группО-антнгена,
обозначенных номерами с. 1 по 164, из которых исключены, груп-
пы 31, 17 (идентичны с другими); 67, 72, 9£ (переведены в род
Citrobacter). Основой антнгенно-диагйостической схемы эшери-
хий является разделение их но О-аитигенам (табл. 20).
В. 1945 г. Кауфман и Вэлн внели терминЖ»-антиген (от не-
мецкого олова «Kapsel») как символ объединяющий разные по
своим свойствам поверхностные соматические или оболочечные
(микрокапсулы) и истинные капсульные антигены.
Классическое подразделение К-антигенсв на L, А, В основа-
но на различии их свойств при нагревании и воздействии неко-
торых химических веществ.
Антиген L разрушается при прогревании в течение часа при
100 °C, теряя агглютининогенные, агглютииабельные й агглютн-
нинсвязывающие свойства; про>ревание при 60 °C (в течение
часа) приводит к утрате первых двух свойств, но не к полному
разрушению связывающей способности; при. обработке 50% ал-
коголем в течение 20 ч при 37 °C антиген сохраняет агглютина-
бельность, частично связывающие свойства, ио утрачивает аг-
глютининогенность. Воздействие нормальной соляной кислотой
(20 ч при 37 °C) приводит к потере всех свойств L-антигена.
Этот термолабильный антиген в 80% случаев является причи-
ной О-инагглютииабельности эшерихий. Иногда штаммы с L-ан-
тигеном имеют микрокапсулы; он редко обнаруживается в со-
четании с антигенами 08 и 09. Присутствие этого антигена сла-
бо защищает бактерии от фагоцитоза и бактериолиза, вместе
с тем L-штаммы нередко обладают гемолитическими и дермо-
некротическими свойствами. L-штаммы эшерихий высокотоксич-
ны для мышей, а многие из них и для кроликов. По мнению
Кауфмана, эшернхнн с L-антигеном бол< е патогенны для чело-
века, чем штаммы с другими К-антигепамй,~ в частности с А-ан-
тигенами.
Антиген А представляет собой истинно капсульный антиген.
Он термостабилен: прогревание при 10С ТЪтечеине 2*/» ч лишь
несколько ослабляет агглютининогенные свойства; при двухча-
совом автоклавировании (121 °C) теряет антигенные и агглюти-
набельные свойства и связывающую способность. Обработка
формалином и 50% алкоголем не изменяет его свойств. Дейст-
вие нормального раствора соляной кислоты ослабляет антиген-
ные свойства А-антигена. Как правило, аитнген А встречается
у эшерихий групп 08 и 09. Наличие этого антигена примерно
в 20% случаев обусловливает О-ннагглютннабелыюсть эшери-
хий. Эти штаммы высокоустойчпвы к фагоцитозу, бактериолизу,
редко вызывают дермонекроз (в слабой степени), "как правило,
не проявляют гемолитических свойств и менее патогенны для
человека. Колонии эшерихий, содержание А-антигеиы, интен-
сивно мутные, крупнее и плотнее, чем А^(мннус)-формы,| и на-
V
Таблица 20. Антигенная схема Е. coli, включающая все О-, К- и Н-антиге-
ны тест-штаммов [0rskov F., 0rskov I., 1978]
О К Н Номер культуры
1 1 7 LJ5-4I
1 61 Л 183а
2 1 4 119-41
2 56 7 11175
2 1 6 Л 20а
2 2 1 SH1242
2 п.е. 8 Лр320с
3 2аЬ 2 U14-41
3 п.е. 31 К15
3 п.е. 44 781-55
4 3 5 LJ4-4I
4 6 5 В17457-41
4 12 Su65-42
4 52 — А103
5 4 4 01-41
6 2ас 1 В17458-41
6 13 1 S (14344-41
6 15 16 F8316-41
6 53 —— РА236
6 54 10 А12Ь
6 13 49 2147-59
7 1 —. В17509-41
7 7 4 Pus3432-41
8 8 4 G3404-41
8 25 9 В17575-41
8 27 — Е56Ь
8 40 9 A51d
8 41 И Л 433а
8 42 — Л295b
8 43 и А195а
8 44 — А 168а
8 45 9 А 169а
8 46 30 А236а
8 47 2 А282а
8 48 9 Л290а
8 49 21 А 180а
8 50 — РА80с
8 84 — Н308Ь
8 87 19 D227
8 102 — 6СВ10-1
8 п.е. 20 НЗЗОЬ
8 п.е. 21 Ulla-44
8,60 п.е. 51 С218-70
9 9 12 В1316-42
9а 26 — В1449-42
9а b 28 — К14а
9 29 — ВП61-42
9 30 12 Е69
9 31 — Su3973-4l
9 32 19 Н36
9 33 — Ар289
9 34 — Е75
9 35 — А104а
9 36 19 А 198а
О К н Номер культуры
9 37 Л84а
9 38 — Л 262а
9 39 9 Л121п
9 55 — - N24c
9 57 32 11509(1
9 п.е. 19 Л I8d
10 5 4 В18337-41
11 10 10 В1623-42
11 п.е. 33 К181
11 п.е. 52 С2187-69
12 5 — Bi626-42
13 11 11 Sn4321-41
14 7 — Su4411 41
15 14 4 F7902-41
15 п.е. 17 P12b
15 п.е. 25 N234'
15 п.е. 27 К 50
16 1 — Fl 1119-41
16 п.е. 48 P4
17 16 18 K12a
18аЬ (76) 14 F10018-41
18ас (77) 7 D-M3219-54
19аЬ п.е. 7 F8188-41
20 17 — P7a i
20 83 26 CDC134 51
20 84 26 CDC2292-55
20 101 — 1473
21 20 —- E19a
22 13 1 E14a
23 18 15 E39a
23 21 15 H38
23 22 15 H67
24 + — E41a
25 19 12 E47a
25 23 1 H54
26 (60) — Н3116
26 (60) .— Г41
26 (60) 46 5306-56
27 — —— F9884-4I
28 — — Kia
28 (73) — Kattwijk
29 — 10 Su4338-41
30 — — P2a
32 — 19 P6a
33 — — F40
34 — 10 H304
35 — 10 E77a
36 — 9 H502a
37 —— 10 11510c
38 — 26 FU621-41
38 п.е. 30 N157
39 — —- H7
40 — 4 H316
41 — 40 H710c
74
Продолжение табл. 20
О К н Нпмгр культуры 0 К H Номер культуры
42 .— 37 РПя 88 — 25 1153
43 — 2 167155 11 89 — 16 1168
44 74 18 11702- 90 —. - . 1177
45 Ч 10 1161 91 — 113076
45 п.е. 2.3 К 12 92 —— 31 113О8п
46 —— 16 1’1 <- 95 -1- 3 1 1131 In
48 — — 118 41 96 19 1131»
49 -1- 12 1112 I' 97 .— — 11320a
50 4 1ЛЯ П 98 — 8 115013
51 — 24 1J19 41 99 — 33 I15O4-
51 п.е. 24 К72 100 —. 2 11509a
52 .—- 10 1120 41 101 -—. 33 11510a
52 п.е. 45 1106-54 101 9O(L) — B41
53 — 3 Bi 7327-41 101 103 — 8CE27S-6
54 — - 2 Bi3972 41 102 — 8 H511
55 (59) .—- S113912 41 103 4- R H515b
55 (59) 6 Aberdeen 1064 104 12 11519
56 4 — Sti3f.84 41 105 __ 8 H520b
57 .— — F8198-41 106 — 33 H521a
58 -— 27 I 8952 41 107 98 27 H705
59 — 19 F909541 108 — 10 H70?h
60 — 33 F10167a-41 109 —. 19 H709c
61 —- 19 F10l67b 41 110 .—. 39 H711c
62 —. 30 F10521 41 111 (r>8) — StoEp w.
63 — — Fl0598 41 112ab (68) 18 1411 50
64 .— — К 6b 112ac (66) — Guatiabara
65 — -—• Kila 113 (75) 21 6182-50
66 — 25 Pin 114 (90) 32 26w
68 —. 4 P7d 115 18 27w
69 — 38 P9b 116 10 28w
70 п.е. 42 P9c 117 08 4 30w
71 12 PI On 118 —. 31w
73 — 31 PI2a 119 (69) 27 34w
73 92 34 0181 66 120 P 6 35w
74 -— 39 E3a 121 .— 10 39w
75 95 5 E3b 123 — 16 43w
75 100 б Fl 17 124 (72) 10 Ew227
76 -— 8 F5d 125ab (70) io Caninni
77 98 — EI0 125ac (70) 6 Eu ° 129-54
78 180) —. ЕЗЯ 126 (71) 2 E6IJ
79 — 40 E Ю 127a (63) — 4030.53
80 • г- 26 E71 127ab (65) 4 2IGO 53
81 97 — 115 128 (67) (2) Cigleris
82 — —- Illi 120 — II Seeliger 178-54
83 — 31 ill 7a 130 — 9 Ew4866-53
83 24 31 H15 131 — 26 S239
84 — 21 II Ю 132 b 28 N87
85 — 1 I ИЗ 131 29 N282
86 — 25 H35 131 35 4.370-53
86 (61) —- E990 135 — — Coli Pecs
86 62 2 Fl 961 13G •-8) — 1111-55
86 (61) 36 5017-53 137 (79) 41 RVC1787
86 (61) 34 BP 12665 138 (61) CDC62-57
86 п.е. 47 1755-58 139 82 1 CDC63-57
87 — 12 H40 139 — 56 SN3N/1
76
Продолжение табл.
о К н Номер культуры 1 °. К н Номер культуры
140 . . 43 CDC149-51 151 10 880-67
141 (85) 4 RVC2907 152 — 1184-68
441 85ab(L) 4 Е68 153 — 7 14097
142 (86) 6 С771 154 94 4 Е1541-68
.143 — 4608-58 155 — 9 Е1529-68
444 — — 1624-56 156 —- 47 Е1585-68
145 — — Е1385 157 88ac(L) 19 А2
146 — 21 CDC2950-54 1 >8 —- 23 Е1020-72
147 (89) 19 1)357 1*9 — 20 Е2476 72
147 (89), 19 G1253 160 — 34 ЕНО 69
88ac(L) 161 — 54 Е223-69
148 — 28 Е519-66 162 — 10 ЮВ1 /I
148а n.e. 53 Т480-68 163 — 19 SN3H/1
149 (91) 10 D616 164 .— — 145/46
150 (93) 6 1935
Условные обозначения: п. е. — non established — существует К-антиген, ио
он не изучен; (в скобках) — прежние тест штаммы, теперь устраненные. Эти номера
нельзя использовать для обозначения новых К антигеНов.
поминают слизистые колонии. При работе с А-формамн пред-
почтительно выделять Л-(минус)-формы (прозрачные колонии)
и использовать их (живыми или убитыми) для агглютинации,
адсорбции и других целей. 1
Антиген В по термолабильности занимает про межуточное по-
ложение между L и А. Характерным для В-аитигена является
стойкое сохранение антителсвязывающих свойств как при воз-
действии высоких температур, так и химических веществ. Еще
Кауфман обратил внимание на то, что В-антиген это не кап-
сульный, а оболочечный или поверхностный соматический анти-
ген. Он сохраняет свои свойства ври обработке 0,5% формали-
ном, 50% алкоголем и нормальным раствором соляной кислоты
(за исключением антигенной способности), не разрушается от
нагревания при G0 °C в течение часа, но утрачивает агглютина-
бельность при 100°C (час), а при 2*/2-часовом кипячении утра-
чивает как агглютинабельные, так и антигенные свойства, со-
храняя связывающую способность.
В отличие от L- и А-антигенов ко многим В-антигенам не
удалось получить специфических сывороток методом адсорбции
антител; это в первчю очередь относится к ЕРЕС-щтаммам.
Основным критерием для выявления наличия К-антигена
независимо от того, термолабилеп он или термостабилен, до сих
пор является О-инагглютинабельность живых бактерий (в глад-
кой форме) и их агглютинация К-антнтелами (в К- или ОК-сы-
воротках).
Антигены К каждого типа серологически неоднородны. Ра-
нее отдечьные антигены, ^ходившие в группу :L, А или’В, имели
свою нумерацию, j затем . для удобства достроенид ’ антигенно-
1 1 : ’ । I ''
76
диагностической схемы перешли на сплошную нумерацию услов
ного обозначения <К-антигена». В.каждом типе К-антигенив об-
наружен''1 множество серологических разновидностей: ; среди
L-антигенов насчитывалось 34 (К1—К21;-К51—К54; Кб2; К74;
К79; К88; К99); среди В-антигенов — 32 (К25; К56—К61; К61—
К73; К77—К78; К80—К86; К.89 — К91); среди А-антигенов — 28
(К26—К50; К55; КЮ2; КЮЗ).. Таким образом, группа К-антиге-
нов эшерихий объединила, по меньшей мере, около 100 сероло-
гических разных поверхностных антигенов, обусловливающих
О-инагглютинабечьность культур и особенности серологической
идентификации этих бактерий.
Для постановки реакции агглютинации со штаммами эшери-
хий, содержащими эти К антигены, можно пользоваться живыми
культурами (18—20-часовая агаровая культура, взвешенная в
изотоническом растворе хлорида нацшя). Штаммы с А-антигена-
ми, кроме того, могут быть использованы в виде 5—6-часовой
культуры, убитой добавлением 0,5% формалина. Обработка
формалином быстро разрушает антигены 1. и В, поэтому пред-
почтительно пользоваться живыми культурами, свежеприготов-
ленными, формалинизированными или обработанными иными
способами, не разрушающими антигенные свойства L и В. Учет
пробирочной агглютинации эшерихий L- и В-форм производят
через 2 «I инкубации при 37°C с последующим 20-часовым хра-
пением при 5°C или при комнатной температуре, а ,эшерихий
А форм через 20 ч выдерживания в водяной бане при 50 сС
или через 18—20 ч инкубации в термостате при 37 °C. При этом
на то учитывать низкие тигры К сывороток, особенно L-антител;
с последними работают, начиная с разведения 1 :20 для L И
с 1 : 40 — 1 : 50 для В- и А-сывороюк
За посчеднее десятилетие вновь возрос интерес к эшерихи-
ям, как возбудителям разнообразных инфекций. В результате
этого усилилось внимание к поверхностным структурам, как
иммуногенным субстанциям, играющим озобую роль в патогене-
тическом процессе. Выл поставлен вопрос о возможности ис-
пользования этих структур при эпидемиологических исследова-
ниях и о важное।и их для обеспечения нормального иммуноло-
гического статуса организма хозяина (лютей, животных, птиц).
Использование новых методов исследования расширило знания
о структуре, химии, генетике и серологии К-антигенов. Появи-
лись новые представления, требующие уточнения, а иногда и пе-
ресмотра некоторых положений о К антигенах эшерихий.
Наиболее информативный результат для проведения анти-
генного анализа после предиаригельного исследования штамма
в агглютииациониом тесте достигается преципитацией в агаре.
Иммуноэлсктрофоретчческое исследование в агаре всёх тест-
штаммов Е coli, содержащих К-аитиген, показало, что прогре-
тые при 100 °C экстракты давали полосы преципитации у анода,
обусловленные всеми А и I -антигенами у этих культур, за ис-
ключением штамма 0.137: К79 (L), Вместе с тем из 33 тест-
,77
штаммов, в антигенной формуле которых значился В-антиген,
полосы преципитации у анода дали лишь некоторые: К15, К56,
К57, К82, К83, К84 и К87. На этом основании, учитывая невоз-
можность получения чистых В-сывороток, I. 0rskov, F. 0rskov,
В. Jann, К. Jann (1977) предложили многие так называемые
В-антигены исключить из группы К-антнгенов и рассматривать
их, как термолабильный компонент О-антигена. Исключение со-
ставили перечисленные выше, которые аналогично L- и А-анти-
генам вели себя, как кислые полисахариды. Эти авторы считают
ошибочным продолжать разделение К-антигенов на L, В и А по
ранее описанным классическим критериям Кауфмана и предла-
гают ограничить номенклатуру К-антигенов (кислыми) полиса-
харидными и белковыми (фимбриальными) -— К88 и К99. Поли-
сахаридные К-антигены те же авторы подразделяют на две
группы: обнаруживаемые в сочетании с О-антигенами 08, 09,
020, 0101 и присутствующие, по-видимому, во всех других соче-
таниях с О-антигенами, не обозначая эти К-антигены пока ника-
кими специальными названиями. Указанная трактовка К-анти-
генов не является общепризнанной и только дальнейшие наблю-
дения подтвердят или опровергнут ее. С нашей точки зрения,
несмотря на теоретическую значимость этой концепции, в прак-
тическом отношении она весьма несовершенна, поскольку она
исключает из антигенной схемы К-антигены — важный диагно-
стический признак, что, несомненно, отрицательно скажется на
поиске возбудителей эшерихиозов. '
Заслуживает внимания тот факт, что К-антигены эшерихий,
равно как и другие антигенные комплексы, имеют сложный фак-
торный состав, объясняющий наличие большого числа пере-
крестных реакций между К-антигенами. Методами преципита-
ции в геле или иммуноэлектрофореза показаны связи между
следующими К-антигенами эшерихий: К18—К22 — KI00;
К13 — К20 — К23; К53—К93; К54 — К96; К16 — К97; К37 —
К97; К12—К82; К2аЬ — К2ас — К62; К7 — К56 (подчеркнуты
наиболее близкородственные) [0rskov I. et al„ 1977]. В связи
с такой взаимосвязью предлагают антигены К62, К56 и К82
считать антигенами К2, К7 и К12 соответственно.
Исследован рецепторный состав антигена К84, встречающе-
гося в комбинации с 020 (отечественный тест-штамм 145 с фор-
мулой 020 : К84 :1134). Л1етодом перекрестной двусторонней
адсорбции агглютининов установлен факторный состав этого ан-
тигена — К84 abcdefgh; из восьми компонентов только один «Ь»
специфичен для указанного тест-штамма, остальные в разных
комбинациях обнаружены в К-антигенах эшерихий других cepo-
rpynn, что обусловливает выраженную полиагглютинабельность
эшерихий в сыворотке К84 и 020: К84, но которая отсутствует
в факторной экспериментальной сыворотке К84 [Голубева И. В.,
Ратинер Ю. А., 1967].
Кроме внутривидовых К-антигенных взаимосвязей, у эшери-
хий известны К-антигены, родственные с К-антигенами других
78
родов энтеробактерий, например, К72 эшерихий с К22 клеб-
сиелл [Киселева Б. С., 198'2], а также с антигенами бактерий
других семейств.
Капсульный антиген менингококка группы С перекрестно
реагирует с эшернхиозным антигеном К92 | Robbins J. et al.,
1972], а антиген эшерихий К1—с капсульным антигеном ме-
нингококка группы В [Kasper D. et al.. 19731; антиген эшерихий
КЮО оказался близко родственным капсульному антигену Hae-
mophilus influenzae тип «Ь» [Schneerson R. et al.,1972]. Близкое
антигенное родсгво обнаружено у эшерихиозных К-антигенов с
капсульными антигенами пневмококков: КЗО с пневмококковы-
ми полисахаридами Sull и SnV; К42 с SnXXV; К85 с SII и SV
[Heidelherger М. et al., 1968]; отмечены перекрестные реакции
между капсулами пневмококка типа 3 и антигеном К7 эшери-
хии. Вполне можно согласиться с существующим мнением о том,
что в патогенности эшерихий заметную роль играет химическая
природа клеточной поверхности бактерий. Отрицательный заряд,
обусловленный кислыми капсульными полисахаридами или по-
лисахаридами клеточной стенки, может иметь значение для
псшчрации тканей бактериями.
Антиген 11 или жгутиковый антиген имеет белковую природу.
Известно 53 серологические разновидности этого антигена, обо-
значенные порядковыми номерами с III по 1156, три из них
исключены (тест штаммы с антигенами 1113 и Н22 переведены
в род Citrobacler, а антиген 1150 у тестштамма, принадлежаще-
го к группе 0151, оказался идентичным с 1110). В одноименных
ОК- и О-группах эшерихий встречаются штаммы с разными
11-аитпгенами, что позволяет дифференцировать их на сероварьй
Определение сероваров является важным как для диагностиче||
ских, так и для эпидемиол<>1 нческих целей, поэтому идептифи]
кация возбудителей эшернхпозов нуждается в расшифровке пол]
ной антшепной формулы ш> О , К- и 11-комплексам.
Серологическое титрование эшерихий по II-антигену затруд-
нено тем, что свежевыделенные штаммы обычно слабоподвиж-
ны и содержат недостаточное количество II антигена для опре-
деления его серологическим методом. При хранении культур
подвижность эшерихий ослабевает. Поэтому для определения
Н-антигена эшерихии неоднократно пассируют через полужид-
кий (1.7—2%) ягар в U-образных пробирках или пробирках
Крейджи вначале (первый пассаж) при комнатной температуре,
затем при 37 °C. Разработан способ идентификации Н-антигена
у эшерихий в агглютинационном тесте на стекле [Рати-
нер 10 А . 1977], который удобен для практических целей при
использовании культур, выращенных на глицериновом агаре,
усиливающем подвижность бактерий |Рятниер 10. А., 1980).
Агглютинабельные, агглюгиниисвязывающне и агглютинино-
генные свойства 11-антигенов выражены у хорошо подготовлен-
ных подвижных штаммов эшерихий в живой и обработанной
0,5% формалином культурах.
79
Сыворотки, полученные к Н-антИгенам эшерихий, характе-
ризуются высоким титром антител — 1 : 25 600 и более.
Идентификацию Н-антигена агглютинациониым методом
проводят в пробирках или на стекле, для чего используют 5—
.7-Часовую бульонную формалинизированную культуру, смеши-
вг я ее в равных объемах с сывороткой (по 0,3—0,5 мл) з про-
бирках и перемешивая встряхиванием.
Специфическое действие гомологичной Н-сывороткн на жгу-
тики приводит к иммобилизации бактерий. Этот принцип поло-
жен в основу определения Н-антигена методом иммобилизации
в полужидком агаре. С этой целью в нашей стране выпускают
специальные сыворотки.
Жгутиковые антигены эшерихий характеризуются серологи-
ческой обособленностью, у них не известны антигенные связи
•с Н-антигенами других родов энтеробактерий.
По парциальному составу одноименные Н-антигены не всег-
да идентичны друг другу. Известны варианты Н-антигенов:
H2ab, Н2ас, H4abcd, H4abcf, H4adeg; НбаЬ, Нас; H7ab, H7ac;
HlOabgi, HlOacefg, HlOabcegh, HlOabcd; H34ab, H34ac; H12a,
H12ab. Обладая общими парциальными факторами, двухсторон-
не связаны следующие пары антигенов: Н1 — Н12; Н4 — Н17;
Н8 — Н40; НН —Н40; НН— Н21; НЗО — Н32; Н37 —Н41;
Н18 —Н44; Н5 — Н, «635» [Ратинер Ю. А., 1973].
В табл. 20 приведена антигенно-диагностическая скеча
ЕРЕС, составленная по материалам Международного центра
эшерихий.
Серологическая идентификация эшерихий основана на уста-
новлении наличия О-, К-, Н-антигенов и определения их принад-
лежности к той или иной разновидности по международному
обозначению. Серологическое типирование ЕРЕС начинается с
этапа их поиска среди колоний первичного посева исследуемого
материала, а всех других эшерихий — после выделения чистой
культуры и установления вида эшерихий. При этом ЕРЕС вна-
чале типируют по К (OK-сыворотками), затем по О- и Н-анти-
генам, что несколько проще, чем типирование эшерихий, вызы-
вающих парентеральные эшерихиозы. Серологическую иденти-
фикацию последних следует проводить вначале по О, затем по
К-антигенам, но в настоящее время их не типируют из-за отсут-
ствий соответствующих коммерческих К- и ОК-сывороток.
При серологической идентификации возбудителей паренте-
ряльн^к эшерихиозор взвесь суточной агаровой культуры бак-
терий^ определенных как Е. coll, прогревают (1 ч при 100 °C) и
испытывают в агглютннационном тесте для определения О-антп-
генов (пробирочном или на стекле в зависимости от имеющихся
в распоряжении диагностических препаратов); типирование
Н-антигенов осуществляют так же, как у ЕРЕС-штаммов.
Существуют и другие методы серологической идентификации
ЕРЕС-, основанные на индикации их в смешанной культуре по
определению OK-группы. К этим ускоренным и упрощенным
80
(индикаторным) методам относят нммунофлюоресцентный?
[Улиско И. Н„ 1973] и метод жидких сред [Голубева 11. В...
1973].
И. В. Голубева, Б. С. Киселева, Ю. Л. Ратинер (1982) пред-
ложили следующий ход серологического титрования ЕРЕС:
День исследования
1-й
2-й
3-й
4-й
6—817
Содержание работы
Исследуемый мзтериал, включая штамм бактерий,,
подлежащий серологическому титрованию, засевают
ня дифференциальную среду (Эндо, ЭМС) таким обра-
зом, чтобы получить рост изолированных колоний. Ин-
кубация 18—20 ч при 37 °C.
Испытание в агглютиианиоином тесте на стекле часто
колонии со среды первичного потсва с поливалентной’
ОК сывороткой широкого спектра действия — ОКА.
Посев в две пробирки (со слабощелочным агаром иг
комбинированной средой для первичной идентификации)
оставшейся части колонии, давшей положительную реак-
цию агглютинации (не мене,' чем ня 3 4 креста).
Повторное испытание выросших культур (с отрица-
тельной реакцией па сероводород и мочевину) в агглю-
тннацнонном тес го иа стек де с сывороткой ОКА. Испыта-
ние kj льтур, положительно реагировавших с поливалент-
ной ОК-сывороткоп или предпочтительно с ОК-ИМмуно-
глобулннами более узкого спектра действия — ОКВ„
ОКС, ОКД, OKF Посев в пробирки минимального диф-
ференцирующею ряда культур, давших положительную-
реакцию с одним ш четырех поливалентных препаратов.
Для определения подвижности и последующего тониро-
вания Н антигена производят посев культуры глубоким»
уколом внутрь трубочки пробирки Крейлжн с полужид-
ким агаром.
Инкубация 18 -20 ч при 37 °C.
При подтверждении принадлежности бактерий к эше-
рнхиям проводят испытание в аплютиняцноиноМ тесте-
на стекле с моновалш1тиыми ОК-гыворотками пли имму-
ноглобулинами. входящими в поливалентную сыворотку,
давшую положительную реакцию (живая культура), и
определяют в згглютчпациоином тесте на стекле О-анти-
ген с адсорбированными групповыми и факторными
О сыворотки (культура, прогретая 30 мин при 100 °C);,
если таковые имеются При наличии положительного ре-
зультата реакции агглютинации с живыми и прогретыми
культурами обозначают ОК группу изучаемого штамма
в < оответстгчп с псьользованиымн диагностическими пре-
паратами. При отсутствии ОК-нммуноглобулинов и ял-
Сорбированных О-еыплротоЦ Лодз-лерждаЮТ Принадлеж-
ность культур к соответствующей ОК ,-рупш в проби-
рочном агглюпшяциогном тесте с возрастающими раз-
ведениями ОК сыворотки до се О-тидра, указанного на
этикетке, в двух рядах пробирок (жчвая и прогретая
I ч при 100"б"). Учет результатов осуществляют через-
18 20 ч инкубации при 37 °C.
Пересев кулгтуры с установленной или ориентировоч-
но определенной ПК-группой ня глицериновый агар, ско-
шенный в пробирке для чипирования бактерий по Н-ан=-
8F
День исследования Содержание работы
пиону в агглютпнацнонном тесте на стекле (при пали-
'ши соотпстстпуклцих диагностических препаратов).
Инкубация 18—20 ч при 37 °C.
Б-й Обозначение OK-группы эшерихий при наличии поло-
жительного результата в соответствующей сыворотке:
агглютинация до титра или половины титра К-аитител
(с живыми бактериями) и О-антител (с прогретыми бак-
териями). Серологическое тнпирование по Н-антигену
культуры (с глицеринового агара) в агглютннациоином
тесте на стекле вначале в поливалентных, затем в моно-
валентных Н-сыворотках (входящих в соответствующую
поливалентную, с которой реагировала культура). По со-/
вокупностн определенных разновидностей О-, К- и Н-ан-1
тигенов устанавливают серовар штамма эшерихий.
При определении Н-антигена методом иммобилизации
из пробирки с положительным результатом в полива-
лентной Н-сыворотке (рост бактерий только по ходу
укола) производят посев культуры в пробирки, содер-
жащие полужидкий агар н моновалентные Н-сывороткн,
соответствующие поливалентной, давшей положительный
результат иммобилизации.
Инкубация 18—20 ч при 37 °C.
Б-й Учет иммобилизации культуры и при положительном
результате обозначение соответствующего Н-антигена. По
совокупности установленных разновидностей О-, К-,
Н-антигенов определение серовара штамма эшерихий.
При помощи коммерческих препаратов, выпускаемых в на
шей стране, возможна идентификация ЕРЕС-штаммов 23 серо-
логических разновидностей OK-групп, включающих различное
число сероваров, антигенная схема которых представлена в
табл. 21.
В разных географических зонах на многих территориях СССР
зарегистрирована циркуляция ЕРЕС-штаммов разных ОК-групп-
[Голубева И. В., Киселева Б. С., 1977].
Более полная серологическая идентификация, осуществлен-
ная в 1974 г. в четырех опорных базах Всесоюзного центра по
эшерихиям, показала, что каждая серологическая группа ЕРЕС
штаммов объединяет множество сероваров, различающихся по
Н-антигенам. Частота обнаружения ЕРЕС отдельных сероваров
была неодинаковой на разных территориях. Указанная сероло-
гическая маркировка возбудителей кишечного эшерихиоза имеет
важное значение для эпидемиологических целей.
Однако нередко возникает необходимость дальнейшего раз-
деления эшерихий одноимрнных сероваров или ceporpynn на био
вары по биохимическим свойствам (табл. 22—26).
Кроме того, в отдельных случаях отклонение по одному из
биохимических признаков может служить в качестве дополни-
тельной эпидемиологический «метких штамма.
Определение эпидемиологических маркеров. Внимание к за-
болеваемости эшерихозами требует более конкретного осуще-
82
Таблица 21. Антигенио-диагностическая схема известных разновидностей!
антеролатогенных ешерихнй [Голубева И. В., Киселева Б. С., 1982]
ММ п/п OK-rpynm II лшигспы. ипрсдсляющие ссровпры
1 О18а :К77 1,4,7,8.10,11,12.16,26,30,32
2 020: К84 9,10,19.25,26,34
3 025 КН 6,12,30
4 026 : K6I) 2,6,7,8,9,10,II,12,14,16,18,19,27,30,32,33,46
5 033: К 2,6 7,in,П,21,25
6 044 : К74 4,12,18.32,34
7 055: К59 1,2,4,6,7,8,10,11,12,19,21,25,27,32,33,34,39
8 075 : К 9
9 О86а : К61 2,6,7,8,9,10,11,12,18.21,26,27,34,47
10 О112чс: К66 Н—
11 ОН lab: К58 2,4,6,7,11,12,16,20,21,25,27,30,32.34,40, «635»
12 0114 . К90 4,10.21,32
13 0119: К69 1.2,4,5,6.8,9,11.18,25,27,32,39,40
14 0124 : К72 2,16,19,30,32,38,12
15 0125: К70 2,4,6,7,10,11,12.15.19.21,25,30.32,40
16 0126: К71 2,5.7,9.10,11.12.19,20.21,25,27.29,30,33,34,45
17 0127: К63 1.4,5,6.9.11,19,21.26.27,33,40, «635»
18 0128: К67* 2.6.7,8.9,10,11,12,16,19,21,27,35
19 0142: К86 6,18,38
20 0143: К 12
21 0144 : К 4, Н—
22 0151 : К— 10,11
23 <408» 10,12
Примечание. Неподияжныг штаммы (Н ) могут быть в каждой ссрогруппе
я являются симостоятельным ссровяром.
• Объединены обе разновидности — O!28ab г К67 и О128ас : К67
ствления противоэпидемических мероприятий. Вместе с тем вы-
деление возбудителя точько с ограниченной серо топической мар-
кировкой является недостаточным для эпидемиологического изу-
чения заболевания эшерихнозами при выявлении источника ин-
фекции, путей передачи и тем бочее не можит удовлетворять
более глубокие эпидемиологические исследования
В качестве эпидемиологических маркеров мог«т быть исполь-
зованы колипипогенность (определение продуцируемых эшери-
хиями колицинов) и колициночувствительность (определение ко-
лициноваров).
Таблица 22. Биов! ры ЕРЕС 0142 : К86 [Гедзе Г. И., 1984]
Сероаар Бковар Глюкоза (ГВ9) Птльинт Сорбит Сахароза
О142:К86:Н6 1 (4-) 4-
0142: К86: Hf 2 + (4-) — 4-
О142:К86:Н18 3 4- + 4 4-
0142 К86 1138 4 4- (4-) 4- —
6’
83-
'Таблица 23. Биоварь Е. coli 076: К86 [Голубева И. В., Андронова Н. И.,
1982]
Серовар Бновар Глюкоза (газ) Дульцит Рамноза Салицин
О75:К95: Н5 1 + + + 4-
•075: К95: Н5 2 + + + •—-
075: К95: Н5 3 + ( + ) + +
Э75:К95:Н5 4 + (+) + (4-)
О75-.К95:115 5 + — (4)
О75-.К95: Н19 + (+) + ——
О75:К95: Н19 + + + (+)
075: К—: Н7 + + 4- 4-
О75-.К95: НЮ
О75:К95:Н16 + + 4- —
Таблица 24. Биовары ЕРЕС 0161: К— [Киселева Б. С. и др., 1976]
Серовар Бновар Глюкоза (газ) Дульцит Сорбит Арабиноза Литиндекар- боксилаза
0151: К—: 1110 1 + + + (1-2) 4- 4-
0151 : К— : НЮ 2 '— + I- (1-2) 4-
0151 : К— :Н10 3 — 4-
0151 : К—: НЮ 4 — + 1- (1-2) 4- 4J
0151 : К— :Н11 5 — — ( + 1 4- (4)
Условные обозначения: цифры в скобках указывают на срок ферментация
в днях.
Таблица 25. Биовары ЕРЕС 0144 : К [Киселева Б. С. и др., 1975]
Серовар Бновар Глюкоза (ГЯЗ) Лактоза Дульцит Сорбит Салицин Лизинде- । карбокси- лаза
0144 : К - Н— 1 (4-)
0144: К: Н4 2 4- 4- — 4-, (4-) (4-) +
0144: К: Н18 0144 : К : Н25 3 4- — (4-) (4-) -. (4 )
Таблица 26. Биовары ЕРЕС 0124 : К72 [Голубева И. В., Киселева Б. С.,
1982]
Серовар Бновар Глюкоза (газ) Лактоза ДулГцВт Рамноза Салицин Q
0124 : К72 : Н - О124:К72:Н30 1 +. — (4-) — (4-) —
0124 :К72 : НЗО 2 4-. - (4-) (4-) — —
0124 : К72 : Н2 О124:К72:Н12 3 4- + (4-) ' 4-‘ +
84
В нашей стране проведены исследования на большом числе
ЬРЕС-штаммов, показавшие, что эшерихии i руппы ОШ : К58
реже (10,5±4,3%), чем штаммы группы 055 : К59, 026: К60,
020, К84, 018: К77, обладали колициногенностью (в. пределах
30±5,3%). КолипинЫ одинаковых типов встречаются у эшери-
хий разных ceporpynn и сероваров. Вместе с тем эшерихии одно-
именной серогрхнпы нлн серовара образуют крлицины разных
типов. Среди EPl С 0111 : К->8 обнаружены колицины типов Е,
1, В, G, D, V, Е I В, Е I, G I I; среди 055 : К.59 -колицины Е,
О; среди 026: К6() — колицины Е, Г., G, D, Е I B, E + I, G+I;
среди 018 : К77 — колицины Е, V. При этом показано, что коли-
цины некоторых типов наиболее часто регистрируются у ЕРЕС-
штаммов отдельных cepoipyim. Так, у серогрунпы 0111 : К58
установлены колицины I и Ё; у 055: К59— G; у О26:К60—Е,
В, I; у 020: К81— Е |И. В. Голубева и др., 1964].
Средн ЕРЕС, выделенных при эпидемических вспышках, ча-
ше (63,1.-*-8,2 %) обнаруживались штаммы, обладавшие колнци-
noieniiocTbio, чем штаммы, не продуцирующие колицип (36,8±
8.2%) VPI.C, выделенные из одною очага, продуцировали
один тип колпцпна или одно и то же сочетание двух типов ко-
линипов [Голубева И. В, 1968].
Тип колиципов необходимо ндешифипировать по специфич-
ности действия и по специфичности резистентных к ним выде-
ленных мутантов [Лнходед В. Г., 196,}].
У штаммов г РЕС часто обнаруживается чувствительность к
ко.тнцинам. При этом отмечено, что штаммы различных серо-
ipvnn неодинаково устойчивы к ко.тпннпам разных типов. Одна-
7 а б л и п .1 27. Схема фагогнпнрования ЕРЕС 0111: К58 [па Р. Nicolle et al.,
I960, 1968J
Фаговлры
Monlparnas
so
Sivre«
Sevres var
1 vnn
I our* riillg
Vienne
Bretonnean
Dorf
Lille
Israel
Palenne
Inrlohe ia
Japan
(Nagoya)
Условные пбпа и а пеня ч; + сплошной лизис- * неполный лизис; PPR — ре-
акция с 8 фечилпропиоиовой кислотой. •
85
ко этот признак у эшерихий не стойкий, а систематические ис-
следования по этому вопросу недостаточны, в связи с чем на се-
годня затруднена оценка существования характерных колнцино-
варов для соответствующих разновидностей ЕРЕС. Для данной
группы микроорганизмов определение колициногениости по ме-
тодике, аналогичной с определением этих эписомиых маркеров
у шигелл, пока не может стать общедоступным методом [Кул-
лай Д. Г., Лиходед В. Г., 1966].
Феномен фаголизиса бактерий может быть использован так-
же для эпидемиологической метки (эпидмаркера) эшерихий.
Известно, что взаимодействие вирулентного фага и чувствитель-
ной клетки складывается из нескольких этапов, заканчиваю-
щихся лизисом бактериальной клетки. Прикрепление фага к
клеточной стенке является результатом воздействия фагорецеп-
торных структур, имеющихся на поверхности бактериальной
клетки и в хвосте фага. Это взаимодействие строго специфично,
в связи с чем фаголизнс бактерий является надежным тестом
для маркировки штаммов. По чувствительности к набору фагов,
специфичных для соответствующей серологической разновидно-
сти эшерихий, устанавливается их фаговар, который может быть
использован в качестве эпидемиологического маркера штамма.
Существуют наборы типирующих фагов, при помощи кото-
рых проводят фаготппирование эшерихий. Коллекции фагов.
Р. Nicolle с соавт., М. Eorsi с соавт. и Н. Milch, S. Deak пред-
назначены для тнпирования ЕРЕС-штаммов трех серогрупп —
0111: К58, 055: К59, 026: К60. В табл. 27 и 28 приведены схе-
мы фаготипирования двух первых из указанных серогрупп.
Кроме того, проводят фаготппирование некоторых серологи-
ческих групп эшерихий, выделяемых при инфекциях мочевых пу-
тей (табл. 29).
86
Таблица 29. Сравнение серогрупп и фаговаров
уропатогенпых Е. coli |по W Brown, J. Parisi, 1966]
Серогруппя Фвговяр
N/T* All, BCD. Bl'.DEEGH, BDE. BE, DE, I), BODE. ABODE
R-IIIThMMH 01106 О| 07 ОН 025 075 ABI DE, Вт,DE, Г, BDE ABT D B' D. ABODE. BODE DE BI ABODE, BDE, DE T I), BODE. DE
•NT - нс1ипнп\емиг
РОД SHIGELLA
Возбудитель бактериальном дизентерии впервые был описан
в 1888 г. Л. Clianfcinessc и F. Widal. Л. В. Григорьев (1891) в
России выделил от дизентерийных больных культуры и устано-
вил, что они идентичны описанным указанными авторами. Ана-
логичные бактерии подробно изучил К. Shiga в Японии, где они
вызвали обширную эпидемию дизентерии (1898). В Германии
в 1900 г. такие же бактерии обнаружил W. Kruse, которые были
названы Shiga-Kruse-Baklci inin. Ныне это Shigella dysente-
riae 1.
В тот же год S. Flexner изолировал дизентерийные бактерии
с другими свойствами, коюрьн были названы впоследствии
его именем (Shigella liexneri). В 1907 г. W. Kruse, а в 1915 г.
К. Sonne выделили и описали бактерии другого вида, также вы-
зывающие дизентерию, названные Kruse-Sonne Bakterium (Shi-
gella sonnei)
В 1917 г. К. Schniilz и независимо от него М. И. Штуцер
выделили новою возбудителя дизентерии из числа маннитотри-
цательвых, известного в настоящее время как Shigella dysente-
riae 2. В дальнейшем эта нод| руина постепенно пополнялась
новыми представителями. 1 ак, в 1934 г. D. Large и О. Sankaran,
а 9 лет спустя V Sachs описали бактерии так называемой груп-
пы Large — Sachs, теперь — S. dysenteriae 3—7. Позднее
W. Ewing с соавт. (1953, 1958) дополнили маннитотрицатель-
ную группу шигелл сероварямн 8, 9, 10.
В работах J. Boyd (1931—1940) описаны выделенные в Ин-
дии первые 6 разновидностей новых возбудителей дизентерии,
объединенных вместе с обнаруженными в более позднее время,
в подгруппу С — Shigella boydii. В период Великой Отечествен-
ной войны в Ленинграде независимо от зарубежных исследова-
телей были выделены и изучены возбудители дизентерии так
называемых «новых типов» [Новгородская Э. М., Семено-
67
ва О. А., 1943—1948]. Значительно позже была выяснена их
идентичность с культурами S. dysenteriae 3—7 и S. boydli 1, 2,
4, 5, 7, 9, 12 [Новгородская Э. М., 1959; Ewing W., 1959].
Хотя бактериальная дизентерия является антропонозной ин-
фекцией, ее возбудители способны вызывать заболевание у
обезьян, а носительство шигелл выявлено у некоторых животных
[Прямухина Н. С., Колобова Л. Ф., 1983].
Классификация и номенклатура. Положение бактерий рода
Shigella в семействе Ent₽robacteriaceae согласно «Определите-
лю бактерий Берги» (1974) и конкретное определение семей-
ства даны в I главе настоящего руководства. Однако обогаще-
ние систематики бактерий новыми методами исследования (ну-
мерическая таксономия, геносистематика и др.) дает возмож-
ность ревизии классификационного положения шигелл.
Так, одним из методов геноснстематики (определение гомо-
логии нуклеотидного состава ДНК) рядом исследователей под-
тверждено близкое родство шигелл разных видов, а также ши-
гелл и эшерихий. К аналогичным результатам привели и экс-
перименты по гибридизации ДНК с ДНК этих бактерий.
И. Н. Блохина и Г. Ф. Леванова (1976) считают, что по сово-
купности геномного родства и общности биологических свойств
шигеллы и эшерихии могут не только находиться в одной три-
бе, но и составлять один род.
Подобные материалы были получены R. Johnson с соавт.
(1975) и с помощью метода числовой таксономии. Обработка
полученных данных о биохимических, морфологических и дру-
гих свойствах энтеробактерий на ЭВМ позволила составить
дендрограмму, на которой по уровню сходства продемонстриро-
вана близость эшерихий с шигеллами, особенно с S. sonnei.
М. Veron и L. Le Minor (1975) изучали способность различ-
ных энтеробактерий утилизировать какие-либо из многочислен-
ных испытанных органических субстратов; сравнивали состав-
ленные ауксанограммы, обработанные методом числовой таксо-
номии, и выявили, что группа «Shigella» не объединена с груп-
пой «Escherichia». Она является самостоятельной и состоит из
трех классов: 1) S. dysenteriae; 2) S. flexneri и 3) S. boydii-
S. sonnei. Группа «Shigella» размещена на дендрограмме меж-
ду группами «eutrophic Klebsielleae» и «Proteus».
При сочетании двух методов — гибридизации ДНК с ДНК и
числовой таксономии — и удовлетворительной для энтеробакте-
рий 1 Корреляции результатов, полученных обоими методами,
R, Colwell с соавт. (1974) также продемонстрировали особое
положение шигелл, отдаленное от эшерихий. При этом выявле-
ны «Главные» группы — Edwardsiella tarda, Е. coli, С. freundii,
Klebsielleae и «малые», соответствующие Serratia, Hafnia, Shi-
gella, Занимающие особое положение.
Продолжает дискутироваться и вопрос о создании промежу-
точной'группы между шигеллами и эшерихиями. Так, W. Stenzel
(1978) предложил объединить в одну группу Shigella sonnei и
88
неподвижные безгазовые варианты эшерихий известные в ли-
тературе, как Е. coli 792, 147 и Shigella guanabara (Е. coli
О112а,с), наименовав их Shigella metadysenterlae серовары 1—4.
Постоянно образующие газ и неподвижные или подвижные
Е. coli 0124, 0136, 0143, 0144 и 0152 автор предложил поме-
стить в провизорный таксон Escherichia dysenteriae.
Это предложение нерационально с позиций таксономии и не
соответствует правилам номенклатуры, тем более, что упомяну-
тый выше серовар 147 причислен к эшерихиям, как представи-
тель новой серогруппы Е. coli'0164 [Rowe В. et al., 1977J.
Таким образом, приведенные данные свидетельствуют об из-
вестной незавершенности таксономии бактерий рода Shigella и
его положения в семействе.
Международная схема классификации шигелл дополнялась
последний раз в 1958 г. и, как уже было сказано, род Shigella
включает 4 вида (подгруппы) : A—S. dysenteriae; В—S. flex-
neri; С — S. boydii и D — S. sonnei. Разделение на виды осно-
вано на определении биохимических характеристик н антигенно-
го строения.
В этой классификации на основе определения антигенной
структуры предусмотрены инфраподвидовые категории шигелл.
Так, вид S. dysenteriae объединяет 10 сероваров, S. flexneri —
13 сероваров и подсероваров, S. boydii — 15 сероваров, S. son-
nei — серологически однороден; всею было определено 39 но-
менклатурных единиц.
Подкомитет по Enterobacteriaceae Международного комитета
систематической бактериологии, кроме того, оставил для даль-
нейшего изучения и определения их таксономической категории
группу бактерий, рассматривая ее в качестве шигелл провизор-
ных (временных) сероваров. Обычно принадлежность таких
культур к роду Shigella либо отвергают но ряду признаков, и
их причисляют к эшерихням, либо оставляют sub judice для
дальнейшего всестороннего изучения. Помимо этого, для реше-
ния вопроса необходимо убедиться, что такие штаммы выделя-
ют от больных в разных регионах, с тем чтобы исключить воз-
можность существования лишь случайных вариантов или мутан-
тов. До завершения этой работы шнгеллы провизорных серова-
ров обозначаются номером оригинального штамма,' в котором
отражен и год его выделения. Одни из них (серовары 3873-50,
2000-53, 3341-55) могли бы по своим биохимическим характери-
стикам быть присоединены к виду S. dysenteriae, другие
(3615-53, 2710-54, 1621-54) — к S. boydii.
Провизорные серовары шигелл были выделены от больных
дизентерией или носителей и но общим признакам соответство-
вали шигеллам, но обладали собственной антигенной структурой
и не агглютинировались шигеллезиымн сыворотками.. Подобные
бактерии могут циркулировать и в нашей стране. Так, -штамм
№ 3674, выделенный в СССР, был идентифицирован как предста-
витель провизорного серовара 2710-54 [Хомендо Н. А.,1974].
89
До 1979 г. в нашей стране действовала отечественная схема
классификации (1962), несколько отличавшаяся от международ-
ной. Она содержала ряд спорных положений, вследствие чего
неоднократно подвергалась критике и нуждалась в пересмотре
[Хоменко Н. А., 1978]. В настоящее время Комитет по таксоно-
мии и номенклатуре патогенных бактерий, простейших и грибов
СССР предложил перейти на международную схему классифи-
кации шигелл. Принятая схема представлена в табл. 30.
Таблица 30. Классификация бактерий рода Shigella
Подгруппа Вид Серовар Подсеровар Сокращенная антигенная формула
А В S. dysenteriae S. flexneri 1-10 1 la 1:4...
С D S. boydii S. sonnei 2 3 4 5 - I 6 ' X-variant Y-variant J lb 2a 2b 3a 3b 3c 4a 4b ♦ 1:6... 11:3,4... 11:7,8... 111:6,7,8... 111:3,4,6... 111:6... 1V:3,4... IV:6... V:7.8... VI: — —:7,8... ’ —:3,4...
• S. flexneri 5 встречается в виде двух подсероваров: 5а (V : 4) и БЬ (V : 7).
Серовары и гюдсеровары обозначают арабскими цифрами,
но к последним добавляют строчные латинские буквы (а, Ь или
с); антигены указывают: Сероварспецнфические (типовые) рим-
скими цифрами (I—VI), а групповые — арабскими (3,4; 6; 7,8).
Кроме того, следует сопоставить некоторые номенклатурные
единицы отечественной схемы 1962 г., ныне отмененной, с меж-
дународными: вид Григорьева — Шига — это S. dysenteriae се-
ровар 1; Штуцера — Шмитца — S. dysenteriae серовар 2; Лард-
жа — Сакса — S. dysenteriae серовары 3—7; провизорные —
S. dysenteriae серовары 8—10; подвид Ньюкестль — это S. flex-
neri серовар 6. Остальные обозначения в обеих схемах соответ-
ствуют друг другу.
Однако некоторые положения международной схемы класси-
фикации шнгелл не могут быть приняты безоговорочно. Так,
всестороннее изучение S. flexneri 6 (S. neweastle) позволило
установить отличия этих шигелл от других представителей дан
кого вида по биохимической активности, чувствительности к
бактериофагам и колицинам, химической структуре ЛПС и в ге-
нетическом аспекте. По ряду признаков S. flexneri 6 ближе к
w AV е .
S. boydii, в том 9исле по антигенной структуре (наличие К-анти-
гена, отсутствие группоспецифических антигенов). Последнее
подтверждено практическими наблюдениями и исследованиями
ЛПС О-антигена. Установлено, что ЛПС серовара 6 в противо-
положность ЛПС других сероваров S. flexneri содержит N-аце-
тилгалактозамин вместо N-ацетилглюкозамина. При генетиче-
ском анализе показано, что сероварспецнфический антиген VI
контролируется хромосомным геном, локализованным вблизи
his-маркера. В противоположность этому антигены I—V S. flex-
neri являются результатом модификации основной липополиса-
харидной структуры (антиген 3, 4), которая контролируется со-
ответствующими конвертирующими профагами, локализованны-
ми в районе 1ас-оперона хромосомы [Тимаков В. Д. и др.,
1980].
К настоящему времени накопилось достаточно данных о зна-
чительном отличии S. flexneri Г» (S. newcastle) по всем парамет-
рам ог остальных сероваров S. flexneri, что позволило внести
предложение о присоединении их к виду S. boydii, как серо-
вар 18 [Петровская В. Г., Хоменко Н. Л., 1979].
S. flexneri 5 известен в международной схеме как один серо-
вар с формулой V: 7,8, в то время как имеются данные, под-
тверждающие существование двух подсероваров 5a(V:4) и
5Ь(7). Существенно, что от больных дизентерией выделяют ши-
геллы обоих подсероваров. Различие выявлено и генетическим
методом. Так, гибриды 5а легко теряли сероварспецнфический
антиген V, переходя в Y-подобный вариант, тогда как у гибри-
дов 5Ь сохранялись оба антигена (V : 7) [Петровская В. Г., Хо-
менко Н. А., 1979]. Иммунохимические исследования [Selt-
mann G., 1977] позволили выявить различия в путях биосинтеза
ЛПС у S. flexneri 5а и 5Ь. Таким образом, различными метода-
ми была доказана целесообразность разделения S. flexneri 5
на два подсеровара 5а и 5Ь.
Внесено также предложение о ревизии подразделения S. flex-
neri 3, с тем чтобы ограничиться двумя подсероварами, отли-
чающимися по стабильному группоспс пифическому антигенному
комплексу 7, 8. В их числе монолизогенный тюдсеровар За —
III : (3, 4), 6 и днлнзогенный ЗЬ — III : (3, 4), 6, 7, 8.
С конца 70-х годов в СССР циркулирует новый серологиче-
ский вариант S. flexneri 4 с антигенной формулой IV: 7, 8.
Получены новые данные и о шигеллах провизорных серова-
ров. Было показано, что один из них, а именно 2000-53, по не-
которым биохимическим свойствам (рост на ацетатном агаре,
щелочение нитрата Кристенсена и лакмуса Мольке), а также
по резистентности к родоспецифическому дизентерийному поли-
валентному фагу должен рассматриваться как эшерихии [Хомен-
ко Н. А., 1978]. Изученные международные штаммы серовара
2ии0-53 являются безгазовыми, лактозоотрицатепьными, непо-
движными представителями Е. coli с антигенной формулой Оба,
О6Ь : К? : Н — [Хоменко Н. А., 1981]
91
Шигеты провизорных сероваров 3873-50 и 3311-55, которые
соответствуют S dysenteriae по их культуральным и фермента-
тивным свойствам, должны быть включены в этот вид как серо-
вары 11 и 12 соответственно. На том же основании серовары
2710-54 и 3615-53 могут быть присоединены в качестве серова-
ров 16 и 17 к виду S. boydii. Провизорный серовар 1621-54 сле-
дует оставить sub judice для дальнейшего накопления штаммов
и их изучения [Петровская В. Г., Хоменко Н. A., 1979J. Все эти
предложения опубликованы в «Международном журнале по си-
стематике бактерии» для обсуждения. Новую классификацию
смотри в Приложении 2.
Приведенные данные свидетельствуют о значительном инте-
ресе к различным аспектам классификации и номенклатуры ши-
гелл и известном прогрессе в этой проблеме, хотя существую-
щие противоречия отдельных положений еще остаются неразре-
шенными.
Биологические характеристики. Шигеллы имеют форму па-
лочек с закругленными концами длиной 2—3 мкм и шириной
0,4—0,7 мкм, лишены капсул и жгутиков.
Некоторые представители шигелл снабжены поверхностными
филаментозными образованиями — фимбриями пли ресничками
(pili). Наличие ресничек доказано у S. flexneri la, 2а, 2b, За,
4b, 5, X и Y. Из числа описанных у различных бактерий наибо-
лее изучены реснички общего типа (common pili) и половь!е
реснички (sex pili). Реснички S. flexneri — полые отростки дли-
ной 0,3—2 мкм и шириной 0,01 мкм, которые располагаются
по всей поверхности микробной клетки.
Функциональное значение common pili окончательно не уста-
новлено. Предполагают, что, увеличивая поверхность, они соз-
дают лучшие условия для потребления питательных субстратов
и кислорода клеткой. Доказана способность ресничек этого типа
обусловливать адгезивность бактерий, т. е. прилипание к дру-
гим клеткам, в том числе к эпителию слизистой оболочки тол-
стого кишечника, что в основном связывают с действием непо-
лярных боковых цепей белка ресничек — пилина. Благодаря ад-
гезивным свойствам пилированные штаммы могут вызывать
агглютинацию эритроцитов различных животных. Известно так-
же, что реснички общего типа S. flexneri обладают антигенными
свойствами. Антигены, выделенные из common pili, характери-
зуются однотипностью и определенной специфичностью. Сыво-
ротки к реснитчатым штаммам S. flexneri перекрестно реагиру-
ют с pil+ штаммами эширихий и клебсиелл, но не с piH штам-
мами сальмонелл, протеев и энтеробактеров. Антитела к пили-
рованным штаммам шигелл могут обнаруживаться в сыворотках
крови больных дизентерией.
В противоположность common pili, контролируемых хромо-
сомными генами, синтез sex pili регулируется внехромосомными
элементами—плазмидами. Половые реснички участвуют в ie-
нетических процессах, в которых, как полагают, они служат
92
_____________.1,111 п микроб-
.л/|. Однако е высушенных
конъюгационными канала!,
риала. Они неоднородны п
ческой структуре антигенов,
специфические РНК- и ДН1
основу-критериев их класс^
лее известным двум тинам s
вуют F- и I фаги, адсорбируй
Пока не объясмчно, почеь
ставнтелей S. flexneri, а не у
гих энтеробактерий, нанриме!
ны тахже только у некоторых
Устойчивость шигелл к воз,
ческих или биологических фак'
вых лучах они погибают в тег,
ном гвете — в течение 30 мин.
ет при воздействии дезинфицИ)
соке они выживают всего несю
могут сохраняться не дольше G
действием бактериофага, уветпч
ного антаювизма [Wildfulir G.,
фекалиях (на полосках фильтровальной бумаги) или сморо-
женных в жидком азоте (—150—180 °C) жизнеспособность ши-
гелл сохраняется в течение нескольких недель и даже месяцев
[Wolf IL el al., 1977]. Сохранение шигелл в воде и пищевых,
продуктах в значительной степени зависит как от их происхож-
дения, так н от температурных условий и загрязнения контами-
нирующими микроорганизмами, колеблясь от нескольких дне!г
до месяца и более [Sedlak J., Rische IL, 1968],
Известно, что одной из особенностей биологических свойств)
S. dysenteriae 1 (Shiga) является их способность продуцировать
экзотоксин. Доказано, что высокоочнщенный препарат токсина
Шига обладает тремя видами активности: эитеро-, нейро- и ци-
тотоксической. Работами ряда авторов установлено, что токси-
ны, подобные токсину ПТига, способны проаудировать также-
s. flexneri и S. sonnei. однако в 1000 и более раз менынеч коли-
честве, чем S. dysenteriae 1 [Ketisch G., Jacewicz M , 1977]
В работах М. Н. Янишевской (1973, 1981, 198*2) было пока-
зано наличие у S. dysenteriae сероваров 3—7 экзотоксинов, ко-
торые по токсичности, физико-химическим свойствам и химиче-
скому' составу существенно отличались от О-антигеиов, извле-
ченных из тех же культур. Пммунохимическое изучение экзо-
токсинов показало, что в эти субстанции входят термолабильные-
и термостабнльные компоненты, при этом высокой токсичностью*
отличалась электрофоретнчески наиболее подвижная термола-
бильная фракция.
Широкое применение в клинической практике и смежных об-
ластях сульфамидных препаратов и антибиотиков способствова-
ло формированию и распространению штаммов шигелл, устой-
чивых к этим лекарствам. Наибольшая устойчивость йаблюдает-
93>
<ся к антибиотикам тетрациклинового ряда, стрептомицину (в
ряде зарубежных стран и к ампициллину) и отмечается некото-
рое уменьшение частоты устойчивости шигелл к левомицетину
л связи с резким ограничением использования этого антибиоти-
ка при лечении дизентерии [Солодовников Ю. П. и др., 1979;
.Гивенталь Н. И. и др., 1979].
Шигеллы хорошо растут в аэробных условиях на обычных
•питательных средах. Оптимальная температура роста соответст-
вует 37 °C, a S. sonnei могут размножаться при температуре от
10 до 45 °C. Оптимальный pH составляет 7,2. При росте в бульо-
не гладкие (S) формы дают равномерное помутнение, шерохо-
>ватые (R) формы вызывают образование осадка, благодаря
•чему надосадочная часть бульона остается более или менее
прозрачной. Иногда можно заметить на поверхности бульона
тонкую пленку. На пластинчатых дифференциально-диагности-
ческих средах шигеллы образуют небольшие (1—Р/г мм), круг-
лые, слегка выпуклые, с ровными краями, бесцветные колонии с
/блестящей поверхностью, полупрозрачные, мягкой консистенции,
.легко снимающиеся петлей с поверхности агара. На пластин-
чатых средах при диссоциации культуры могут одновремен-
но находиться колонии гладкой, шероховатой и переходной
формы.
S. sonnei на слабоселективных средах или питательном ага-
ре часто образуют два типа колоний: небольшие, гладкие коло-
нии правильной формы — так называемая I фаза и крупные,
плоские колонии с неровными краями, напоминающие виноград-
ный лист, — II фаза. Встречаются и промежуточные формы.
S. dysenteriae и S. flexneri формируют более мелкие и нежные
колонии.
При микроскопии колоний шигелл в косопроходящем свете
по М. Landy, если штамм находится в гладкой форме, можно
отчетливо видеть гомогенную структуру поверхности колоний и
•их яркое голубовато-розовое окрашивание. Цвет колоний пере-
ходных форм приобретает зеленоватые или серые тона, а по-
верхность их выглядит значительно исчерченной.
Биохимические свойства бактерий рода Shigella, представ-
ленные в табл. 31, свидетельствуют о малой биохимической ак-
тивности этих бактерий. Ряд указанных в таблице реакций ха-
рактерен для представителей всего рода. Большинство из них,
будучи либо отрицательными, либо положительными, являются
• безусловными. Так, все шигеллы*неподвижны, не образуют серо-
водорода из неорганических соединений серы, не гидролизуют
мочевину, не утилизируют малонат натрия, цитрат в среде Си
монса как единственный источник углерода и D-тартрат, не про-
дуцируют ацетоин в реакции Фо1еса — Проскауэра, не облада-
ют фенилаланнндезамнназон, лизиндекарбоксилазой и желати-
назой. не вызываю-»1 щелочения среды Кристенсена, не растут в
присутствии KCN, не ферментируют адонит и инозит, но дают
• положительную реакцию с метиловым красным..,
!94
Т„ блица 31. Биохимические свойства бактерий рода Shlgdla
т,: * Тест или субсгрит Реакция Тест или субстргг Реакция
Реакция Фогеса — Прос-
Адонит —
Аодбироза X кауэра —
^Глнцернн^ X
Тх-гогасгаз) —.-| Сероводород —
Д-льдит X Мочевина (гидролиз) —
Инозит — Желатин (22’С) —
Ксилоза X феннлаланпилезачииаза —
Л ктоза -.(+) Ли «ннлскарбоксилаза —
М 1лыцза X Лр| нннндсгилролаза X
ТЯаиннт^ + .— X Орннтиндекарбокснлаза
'‘РИЯноза Цитрат Симонса —
Рафиноза X Hll*pai Кристенсена ^ЛцстагЗ5 —
.qjlHUHII —
Тахдра-заЗ -—- Мялопат —
“Сорбит X Мукят —
Трегалоза X D-Тяртоат —•
11е тлобноза Р Галакгозптаза
Реакция с метиловым крас- KCN ——
ным -1 Иодпижность —
В то же время в отношении других признаков мотут наблю-
даться отклонения, что рассматривают, как явление мутации)
[Ewing W., 1973] или носительства так называемых «таксоно-
мических» плазмид [Rische Н., Tschape Н., 1974]. К этой группе-
признаков следует отнести отсутствие у абсолютного большин-
ства шигелл способности использовать ацетат как единственный)
источник углерода (кроме редких штаммов S. flexneri 4а) и му-
кат (за исключением отдельных ш гаммой S. sonnei). Кроме
того, незначительное число культур S. snntiei непостоянно и в-
поздние сроки может сбраживать салицин и целлобиозу.
Остальные признаки, указанные н табл. 31, следует рассмат-
ривать как характерные не для всего рода, а лишь для отдель-
ных видов, биоваров, иногда сероваров. Однако отклонения воз-
можны и в этих случаях. Так описаны лактозоположительные-
варианты S. flexneri или сбраживающие лактозу в первые суткит
S. sonnei, обычно ферментирующие этот углевод замедленно.
Отсутствие ферментации маннита свойственно представителям
S. dysenteriae и S. fffixneci 6 биовара Newcastle. В то же время
встречаются маннитотрицательные варианты среди S. sonnei,.
S. flexneri 2а, 4а и S. boydii 6, 9, К), 14, 15. У некоторых штам-
мов S. flexneri в результате культивирования в лабораторных
условиях появляется способность сбраживать сахарозу. Шпгел-
лы не образуют газа при ферментации глюкозы, кроме биоваров:
Manchester и Newcastle S. flexneri 6. Описаны единичные аэро-
генные штаммы среди S. boydii 13 и 14. Глицерин постоянно не
ферментируют S. flexneri и S. boydii 12. Большинство шигелл не
обладают эрнитиндекярбоксилазой, кроме S. sonnei и S. Ьоу-
95-
dii 13. В отношении сбраживания ряда углеводов (арабиноза,
дульцит, ксилоза, мальтоза, рамиоза, рафиноза, трегалоза)
реакции вариабельны.
Шигеллы всех видов обычно лизируются родоспецифическим
.дизентерийным бактериофагом. Шигеллам отдельных видов
присущи свои биохимические особенности (табл. 32).
'Таблица 32. Биохимические свойства шигелл различных видов
Тест или субстрат Реакция
8. dysente- riae S. flexneri 8. boydii 8. sonnei
серовары 1-5 -серовар е
Глюкоза (газ) — — — ,-р —
Дакщч — — —— — (+)
— + + +
— — — (+)
ДуЛЬЦП1> —• + — X X
Сорбит X X (+).+ X —
Арабиноза X X X + £
Рафиноза —— X — — X
Рамноза X X — — + .(+)
Мальтоза X X (+).+ X + .(-h)
Ксилоза X •— X X X
Т регчлоза +.(+) +.(+) (+).+ +.(+) + 1
Црддобщэза —— X '
(Тлпцер1пр X — +.(+) X ‘X
ЛППтеГ" — + — • + —
Аргнпиндегидролаза X —— X X
•Орнптиндекарбоксилаза — — — —
Мукат — — —
₽ Галактозидаза ~’+ — — -.4- +
Характерным для S. dysenteriae является их слабая фермен-
тативная активность: у них отрицательны реакции в тестах с
маннитом, лактозой, сахарозой, рафинозой, целлобиозой, орни
тином, мукатом, ксилозой (кроме сероваров 8, 9, 10), дульци-
том (кроме серовара 5) и на индол (кроме сероваров 2, 7, 8),
а серовары 2, 5, 8, 10 лишены 0-галактозидазы. Шигеллы этого
вида вариабельны по рамнозе, мальтозе, сорбиту, арабинозе и
аргинину.
Более биохимически активны S. flexneri сероваров 1—5 и ва-
рианты X и Y, которые постоянно ферментируют маннит, трега-
лозу, а вариабельно — мальтозу, сорбит, арабинозу, рафинозу,
рамнозу и некоторые штаммы — замедленно сахарозу. Они не
утилизируют лактозу, дульцит, ксилозу, глицерин, целлобиозу,
орнитин, аргинин и мукат. Образование индола присуще в ос-
новном ггодсероварам 4а, За, а также серовару 5. Своеобразна
способность S. flexneri 6 сбраживать или не сбраживать маннит
к образовывать газ в глюкозе. В отличие от других сероваров
S. flexneri они ферментируют глицерин (обычно в 1-е сутки),
В6
не образуют индоль, не сбраживают рафинозу и рамнозу, а так-
же способны ферментировать дульцит и ксилозу. Кроме того,
для них характерны постоянное сбраживание мальтозы, а так-
же вариабельные реакции в тестах с сорбитом, арабинозой, ар-
гинином и отрицательные реакции — с лактозой и сахарозой.
, S. boydii также относятся к маинитноложительным видам.
По большинству биохимических реакций они вариабельны
(дульцит, рамноза, ксилоза, мальтоза, сорбит, арабиноза, гли-
церин, аргинин, индол, р-галактозндаза). К числу отрицатель-
ных относят реакции в средах с лактозой, сахарозой, рафинозой
и орнитином (кроме серовара 13).
Наиболее активны по ферментативным свойствам S. sonnei.
Они способны, хотя и замедленно, ферментировать лактозу и са-
харозу, постоянно ферментируют маннит, рамнозу, мальтозу,
арабинозу, трегалозу, обладают орнитиндекарбокенлазой и
Р-галактозплазоп. вариабельны по утилизации муката и сбра-
живанию ксилозы, рафинозы, глицерина, целлобиозы; постоянно
отрицательны в отношении дульцита, индола, за небольшим
исключением аргинина.
Всесоюзным центром по шигеллезам и его опорными базами
[II. С. Прямухина и др., 1981] изучены биохимические характе-
ристики 527 штаммов S. sonnei, выделенных в последние годы
на различных территориях СССР, нх подвижность и отношение
к родоспецнфпческому дизентерийному фагу (табл. 33). Как
видно из данных табл. 33, циркулирующие в нашей стране
штаммы S. sonnei обладали в основном типичными для этих
шигелл свойствами. Установлены некоторые отклонения по био-
химическим реакциям в углеводных средах (глицерин, рафино-
за, ксилоза и др). Подтверждена достоверность рекомендован-
ных ранее 4 дифференцирующих признаков, характеризующих
род Slnjiclla (отрицательные реакции по цитрату Кристенсена
или ацетату, салицину, подвижности п положительные с полива-
лентным дизентерийным фатом) (Хоменко II. Л., Прямухи-
на II С. и др,, 1977]
Знание биохимических характеристик шигелл различных ви-
дов в совокупности по широкому спектру тестов (см. табл. 32)
мо.кет быть полезным при осущестнтении их идентификации,
особенно штаммов шигелл, нечетко определяемых серологически
или отклоняющихся по какому либо признаку. Некоторые из
этих биохимических свойств имеют наибольшее практическое
значение и могут быть рекомендованы дчя дифференциации ви-
дов шшелл (табл. 34). При их использовании необходимо учи-
тывать пояснения, приведенные в обсуждении данных табл. 32.
Для отдельных серлваров некоторых видов шнгелл присуща
особенность некоторых биохимических свойств, что представля-
ет значительную ценность для идентификации и подтверждения
принадлежности штамма к тому илн иному серовару (табл. 35—
37). Дифференциации прежде в'его помогает тест, на индол, об-
разование которого свойственно S. dysenteriae сероварам 2, 7,
7—817
97
Таблица 33. Биохимические свойства S. sonnei, выделенных на отдельных
территориях СССР в 1974—1979 гг.
Тест или субстрат Ч- (+) Признак
абс. % абс. %
Лактоза 5 0,9 498 94,9 (+)
Глюкоза:
кислота 527 100 4-
газ 0 0 —
Маннит 527 100 +
Сахароза 9 1.7 473 90,0 (+)
Рамноза 381 72,2 143 27,1 + ,(+)
Ксилоза 266 50,5 2 0,4 X
Малыоза 425 80,7 112 19,3 1.(|->
Дульцит 0 0
Арабиноза (70)* 63 90,0 5 7.1 4-
Сорбит (521) 0 0 —
Рафиноза (521) 14 2,7 402 77,0 X
Адонпт 0 0 —
Инозит (50) 0 0 —
Салицин 0 0 5 0,9 —
Глицерин 9 1.8 170 32,4 X
Индол 0 0 —
Сероводород 0 0 ——
Мочевина (525) 0 0 —
Метиловый красный (525) 525 100 4-
Реакция Фогеса — Прос-
кауэра (525) 0 0 —
Цитрат Симонса 0 0 —
Цитрат Кристенсена 0 0 ——
Анетат 0 0 . —
Желатин (521) 0 0 —
Л изиндекарбоксилаза 0 0 ——
Аргининдегидролаза (311) 0 0 6 1,9 —
Орнптиндекарбоксплаза
(116) 116 100 4-
Фенилаланпндезамнназа 0 0
Малонат (367) 0 0 —
Подвижность 0 0
Поливалентный фаг (437) 437 100 4-
Условные обозначения: — отрицательная реакция в течение всего срок»
наблюдения у 90% штаммов или более; + положительная реакция через 18—24 ч (черед
24 или 48 ч для орнитиндекарбоксилазы) у 90% штаммов или более; (+) замедленно
(позже 24 ч) положительная реакция у 90% штаммов нли более; +, ( + ) чаще положи-
тельная, реже замедленно положительная реакция у 90% штаммов нли более; X различ-
ные биохимические реакции: +. ( + ), —.
* Если в каком-либо тесте изучено менее 527 штаммов, число исследованных штам-
мов указано в скобках.
8, а также S. flexneri в основном подсероварам 4а, За, серова-
ру 5 и S. boydii сероварам 5, 7, 9, 11, 13, 15. В качестве диффе-
ренцирующих могут быть использованы также биохимические
реакции шигелл в отношении ряда углеводов.
Некоторые биохимические свойства шигелл провизорных се-
роваров, на основе которых возможна их дифференциация, приг
98
Таблица 34. Дифференциация лидов шигелл
Тест или субстрат S. rfv гп- (еияе S. ПехпеН S boydii S. sonnei
сгропары 1-6 серовар 6
Лактоза — (4-)
Глюкоза (газ) — — -.+ ——
Маннит 4- 4 • — + 4*
Глицерин X — 4 4+) X X
Сорбит X X (+) .4- X —
Индбл —.1- - + — -.4- —
Орпитпндекарбоксилаза — — 4-
Таблица 35. Биохимические свойства, дифференцирующие серовары S. dysenteriae
Тест или субстрат
Серовар индол дульцит рамноза ксилоза сорбит арабиноза
1 2 3 4 5 6 7 3 9 10 1+1111++11 +.4+) 1 + 1 1 1 |Х 1 1 1 1 +~+111 1 1 1 1 X +.(+) -.(+) +.(+) + 4+) —•+ +4+) —.+ + 4+) --+ 4- -.+ + + + +
Таблица 36. Биохимические свойства, дифферен- цирующие серовары S. ftexneri 1—5
Тест или субстрат
Серовар ИНДОЛ сорбит рамноза
1 2 3 4 5 var. X var. Y 1 ^Ч-W 1 1 1 1 1 + +.(+) X + • — X X -4+) - (+)
ведены в табл. 38. Эти характеристики более всего соответству-
ют свойствам S. dysenteriae и S. boydii, хотя способность штам-
ма 1621-54 ферментировать рафинозу (что не характерно для
8. boydii) может рассматриваться как свойство особого биохи-
7* 99
Таблица 37. Биохимические свойства, дифференцирующие серовары
S. boydii
Серовар Тест или субстрат
индол дульцит ксилоза сорбит
1 — —. (+).+ (+).+
2 . — . - — —,(+>
3 — X X +.(+)
4 -— -.(+) — X
5 + (--) +.(+)
6 (+) +.(+)
7 + — +.(+)
8 .— +.(+) -Ч( 1 )
9 + — — +.(1)
10 +.(+) X X
11 -F -.(+) Ф.( F) X
12 — -.(F) — -.(1)
13 4- — -r.(-F)
14 — (+).+ + ,( 1 )
15 + — — -F.(F)
Таблица 38. Некоторые биохимические свойства шигелл провизорных се-
роваров
Тест или субстрат Провизорные серовары
S. dysenteriae S. boydii
3873-50 3311-55 3615-53 2710 54 1621-54
Индол — — + + +.-
Маннит — — 4- + +
Мальтоза X —- -.(+) X ч-
Дульцит — — —• — —•
Арабиноза -t- + -F + -.(+)
Сорбит (+) (+) — +.(+) X
Ксилоза (+) (+) -4- + —
Рамноза — -.+ ——. — -,(+)
Рафиноза -—. — — (+)
Глицерин + + -.(+) + +
мического варианта. Все прочие биохимические характеристики,
а также культуральные свойства шигелл провизорных серова-
ров полностью соответствуют характеристикам рода Shigella.
В лабораторной практике нередки ошибки при идентифика-
ции шигелл, их удельный вес, по наблюдениям различных авто-
ров, колеблется в зависимости от категории лаборатории от 3,6
до 30% [Емельянов П. И., 1973; Прямухина II. С., 1978; Бей-
нар Л. С. и Мелькумянц Н. Б., 1978, и др.]. Наиболее часто за
шигеллы принимают эшерихии, гафнии и провиденпии (Р. in-
constans) в связи с общностью их некоторых биохимических
признаков и культуральных свойств. Поэтому целесообразно
100
выделять основные признаки, по совокупности которых можно
четко дифференцировать шпгеллы от указанных энтеробактерий
(табл. 39). Отдельные прпшаки или их сочетание заслуживают
особого рассмотрения с точки зрения их дифференциально-диаг-
ностической ценности: специфичность положительных результа-
тов пробы с поливалентным шигеллезным фагом, а также сово-
купность отрицательных реакций по всем признакам характер-
ны для шигелл.
Таблица 39. Основные дифференциальные признаки шигелл и сходных с
ними энтеробактерий
Тест или субстрат Shigrlla Escheri- chia Hahila Р. {ПСОПЭ- tans (Pto- videnciaji
37 °C 22’С
Лактоза -.( + ) X -.( н -,( + ) —
Глюкоза (газ) + >— X <х *+
Салицин — X X —
Лпзпндекарбоксплаза — + - ’ + —
Цитрат Симонса — — •(4).- •+ ’ +
Цитрат Кристенсена — 'X 4+ * +
Ацетат — ф.(+) -.(+) -,(+) -.(+)
Фенилаланин дезаминаза — — — —— ’ +
Реакция Фогеса — Прос- кауэра — г 4" >—
Мукат — • + —
Подвижность — +•— X +
Проба с поливалентным uni- геллезны.м бактериофагом 4- — — —
Дифференциация шигелл и типичных эшерихий не затруд-
нительна, ио бе п азовые, неподвижные, лактозоотрицательные
или медленно сбраживающие этот углевод варианты эшерихий
осложняют работу бактериологов, особенно учитывая тесное ан-
тигенное родство между представителями этих родов. Наиболее
ценными для дифференциации шигелл и эшерихий в этих слу-
чаях служат биохимические реакции в тестах с ацетатом, мука-
том, цитратом Кристенсена и лизином, а также определение по-
движности (в том числе в ус ювия.х культивирования при ком-
натной температуре). В связи с тем. что некоторые эшерихии,
в основном из числа так называемых Alkalescens Dispar, могут
иметь отрицательные реакции в тестах с ацетатом, мукатом и
цитратом Кристенсена, только вся совокупность дифференци-
рующих признаков позволит сделать правильное заключение.
Надежными критериями для отличия шигелл от гафний слу-
жат вариабельные реакции последних при различных темпера-
турных условиях культивирования в тестах на подвижность и
газообразование из глюкозы, на утилизацию жирата в среде
Симонса и образование аце1илметилкарбпнола, а также их
101
способность декарбоксилировать лизин и постоянно вызывать
щелочение в цитратной среде Кристенсена.
В числе важных отличительных признаков Р. inconstans и
бактерий рода Shigella следует в первую очередь выделить
способность первых дезаминировать фенилаланин, утилизиро-
вать цитрат в среде Симонса и щелочить цитратную среду Кри-
•стенсена. Характерным для Р. inconstans является также появ-
ление желтовато коричневого оттенка среды при росте на обыч-
1ном питательном агаре.
Антигенная структура и серологическая идентификация.
Шигеллы обладают О- и К-антигена:ли. О-антигены энтеробак-
терий, как уже было сказано ранее, устойчивы к нагреванию и
воздействию ряда химических веществ. Однако установлено,
что О-антигенн некоторых шигелл обладают меньшей резис-
тентностью.
Серологическая специфичность шигелл, как и других энтеро-
бактерий, зависит от химического строения О-специфических
полисахаридных боковых цепей ЛПС. О-антигены шигелл изу-
чены еще недостаточно.
К-антигены шигелл рассматривают как оболочечные струк-
туры. Описаны более или менее выраженные К-антигены ти-
па В у представителей S. dysenteriae, S. boydii и S. flexneri 6.
Для К-антигенов типа В характерны утрата агглютинабельно-
сти в результате нагревания при 100 °C в течение 1 ч и аггЛю-
тининогенности в течение 2 ч, тогда как адсорбционная способ-
ность сохраняется и при автоклавировании (120 °C 2 ч). Эти
свойства антигенов необходимо учитывать как при серологиче-
ской идентификации, так и при изготовлении диагностических
сывороток.
Среди шигелл одного серовара могут встречаться штаммы,
обладающие или не обладающие К-антигеиом.
При ИЭФ К-антигены движутся в сторону анода [Бе-
лая Ю. А. и др., 1965, 1967, 1977]. Б, А. Дмитриев и К. Н. Ко-
четков (1979), изучая О-специфические полисахариды шигелл,
выявили у S. dysenteriae 1, 2 и 10 нейтральные полисахариды,
а у сероваров 3—9— кислые, отличающиеся термолабильностью.
Возможно, что они, являясь фактически кислыми О-антигенами,
соответствуют характеристикам К-антигенов типа В. В. Д. Ти-
маков и др. (1980) также высказали гипотезу о тесной химиче-
ской и генетической связях О- и К-антигенов шигелл, по тгверж-
дение которой требует многосторонних исследований.
Поскольку виды бактерий, объединенные в род Shigella, зна-
чительно отличаются между собой, в том числе и по антиген-
ной структуре, уместно представить краткие сведения о каждом
из них.
Вид S. dysenteriae (подгруппа А) представлена 10 сер» ара-
ми, в своем большинстве серологически обособленными. Предпо-
лагается наличие у них К-антигенов, обозначенных КА1 — КАЮ
[Edwards Р., Ewing W., 1972].
<’0?
# Б. А. Дмитриевым с соавт. (1973—1979) выполнена серия
работ, посвященная исследованиям химического строения О спе-
цифических полисахаридов S. dysenteriae Вопрос этот до на-
стоящего времени изучен мало. Установлена химическая струк-
тура полисахаридов (почти всех сероваров), окагавшихся слож-
ными гексозамнногликанами, сформированными из чередующих-
ся олигосахарндных единиц, характерных для каждого Серова-
ра. Для этих полисахаридов типично разнообразие структур—
линейные, ра «ветв тенные и т. и.
Внутрпви ижые антшениые связи установлены между S. dy-
senteriae 2 и 10 [Хоменко Н. А., 1967; Ewing W., Johnson J.,
1961; Slopek S., 1968], а межвидовые— у S. dysenteriae 2 и
S. boydii 1, S. dysenteriae 8 и S. boydii 15.
Вид S. flexneri (подгруппа В) имеет 13 сероваров и подсеро-
варов (см. табл 30), пеоекрестно реагирующих между собой за
счет многочисленных групповых антигенов (1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8,
9...), из которых 3,4; 6; 7,8 имеют диагностическое значение.
S-спепифнческие боковые цепи О-антигена S. flexneri различи
ных сероваров, кроме серовара 6, содержат одни и те же саха-
ра: глюкозу, N-ацетил D-глюкозамин и L-рамнозу в последова-
тельности, характерной для каждого серовара. Серологическая
специфичность главных антигенов S. flexneri 1ределяется не
каким-либо терминальным сахаром, а лишь характером связи
между молекулами памнозы и глюкозамина и акцептором одно-
го и того же сахара — а глюкозы. Химическая сущность антиге-
нов обоих видов — сероварспецифнческих—типовых — (I, II,
HI, IV, V) и групповых (3,4; 6; 7,8) —едина, что в настоящее
время полностью доказано [Seltmann G., 1977].
В этом плане показательны сведения об устойчивости ука-
занных антигенов к физико-химическим воздействиям (табл. 40).
Различная резистентность этих антигенов к нагреванию, обра-
ботке N IIC1 и 50% этиловым спиртом может быть объяснена
особенностями их химического строения. Наименее устойчивым
оказался сериварспецнфический (типовой) антиген III, что за-;
висит от наличия в его структуре лабильных О-ацетильных
групп. Более стабильными себя показали другие сероварспеци-
фические антигены, особенно антиген IV, проявивший резистент-
ность классическою О-ангигена (сохранение агглютинабельно-
сти, агглютнннногенннх свойств и агглютниннсвязывающей спо-
собности). Из групповых антигенов наименьшую стабильность
проявил 'нтигенный комплекс 3, 4 [Хоменко Н, А., Киселе-
ва Б. С., 1967, 1968. Киселева Б. С., Хоменко Н А., 1969]. Авто-
рами отмечено также отсутствие избирательного действия на
антигенные свойства сероварспецифнческих и групповых аггги-<
генов S. flexneri ряда химических веществ (мертиочата,, форма-
лина, хлороформа, 96° спирта, ацетона). При *том наибольшую
активность сохранили те и другие антигены культур, обработан-;
ные мертнолатом.
10Э
Та блица 40. Стабильность основных антигенных свойств сероварспецифи
Отсутствие О-ина1 глютинабельности у живых культур
S. flexneri 1—5, химические и физико-химические данные, ка-
сающиеся всех этих антигенов, < видетельствовали о принадлеж-
ности их к О-антигену, его стабильной и лабильной фракциям.
Сведения о химио- и терморезистентности отдельных, серологи-
чески определяемых антигенов S. flexneri 1—5 были получены
впервые и они имеют практическое значение как при серологи»
ческой идентификации бактерий, так и при изготовлении диаг-
ностических адсорбированных сывороток и агглютинирующих
иммуноглобулинов. м,
У бактерий S. flexneri G описаны О- и К-антигены. Эти ши-
геллы обладают иногда О-инагглютинабельносгью.
Полисахарид О-антигена серовара 6 отличается от полисаха-
ридов других сероваров S. flexneri наличием N-ацетилгалактоза-
мина, определяющего серологическую специфичность антигена
VI вместо N-ацетилглюкозамина, столь характерного для серо-
варов 1—5 [Simmons D., 1969; Katzenellenbogen Е. et al., 1976,
и др.].
Б. А. Дмитриев с соавт. (1978) уточнили структуру полиса-
харида S. flexneri 6 и показали, что ЛПС серовара 6 принадле-
жит к «не классическому» типу соматических антигенов и обла-
дает кислыми О-специфическими полисахаридными цепями. При
определенных условиях (например, нагревание, влияние элек-
трического поля) этот кислый О-антиген обнаруживал свойства,
присущие К-антигену. Представленные данные еще раз привлек-
ли внимание к изучению К-антигенов у шигелл.
Вид S. boydii (подгруппа С) представлена 15 сероварами, не
имеющими между собой заметного антигенного родства, за ис-
ключением тесно связанных сероваров 10 и 11. Предполагается
наличие у них К-антигеиов, обозначаемых КС1 — КС 15 Сущест-
вуют К+ (плюс)- и К- (минус)-варианты [Edwards Р.,
Ewing W., 1972].
104
веских н групповых антигенов S. flexneri
Культура, обраб отанная
нчгрегчннем
100’С 2 я
100 *С V/г я
120’С 2
N IICI
БОХ
(+)
ж
(4-)
(4-)
(+)
(4)
(-1)
(+)
(+)
(4)
Ж
(4-)
4-
I
(+)
(+)
(+1
(1)
ж
4-
(4)
1I)
(4-)
(4 )
(4-)
(4-)
(4-)
( Н
(4-)
(4-1
(4-)
4-
+’
3
2
3
2
3
1 I 2 I 3
2
з
ж
ж
(+)
ж
1
(+)
ж
-I- n>x|>niii-ii>i; (|) не кольцо оглпблен.1; ( ) и» полностью рлэрушспл; — рптрунк-нл;
О — О1СуТС1ВусГ'
О антигены S. boydii изучены значительно меньше, чем
О-антигены других шигелл. В основном определен состав поли-
сахаридов всех сероваров этою вида. Кроме базальных сахаров,
в них входят добавочные—манноза и рамноза | Seltmann G.,
1968], гапактозамин, квнновозампн и 3,6-дилеоксигексоза
[Дмитриев Б. А и др , 1973]. Структура О-специфической по-
лисахаридной цени ДПС установлена только для серовара &
[Дмитриев Б. А. и др., 1975] Причины антигенной обособленно-
сти большинства сероваров этого вида и, наоборот, чрезвычай-
но тесного антигенного родства между сероварамн 10 и 11 еще
не выяснены. Об установленных межвидовых антигенных связях
S. boydii было сказано ранее.
Вид S. sonnei (подгруппа D) серологически однороден.
Однако сво< образце этих шигелл заключается в постоянной дис-
социации на два варианта морфологически разных колоний —
круглых (I фаза) и плоских (II фаза); существует и полная
R-фопма. Фактор, вызывающий почти перманентный процесс от-
щепления мутантов II фазы от I, еще не установлен. ДПС I фа-
зы — полноценное ядро с О-специфическими боковыми цепями.
S. sonnei 11 фазы являются Ra-мутантами, в ДПС которых су-
ществует полноценное ядро, но шсутствуют боковые полисаха-
ридные цепи. R-форма это еще более дефектный мутант S. son-
nei, чем фаза II, так как его ДПС имеет неполноценное ядро.
Эзи положения подтверждены и при электронно-микроскопиче-
ском изучении резных фаз S. sonnei и их ДПС [Ваиеева Н. П.
и др., 1976, 1977]. Известие, что в ДПС I и II фаз входят га-
лактоза, глюкоза и глюкозамни, тогда как ДПС R-формы га-
лактозы не содержит
S. sonnei не имеют антигенного родства с шигеллами других
видов, за исключением S. sonnei II фазы и R фирмы, перекрест-
но реагирующих с R-формой S boydii 6,
О- и К-ангпгевы шигелл провизорных сероваров еще не изу-
106
чены. Известно антигенное родство между сероваром 3615-53 н
S. dysenteriae 3, а также серовара 1621-54 и S. boydii 12.
Более подробно вопросы антигенного строения шигелл изло-
жены В. Д. Тимаковым с соавт. (1980), Н. А. Хоменко (1981).
' -При бактериологической диагностике шигелл S—>-R диссо-
циация и появление R-мутантов, утративших серологическую
специфичность, затрудняют серотнпирование. Утрата серологи-
ческой специфичности зависит от близости структур R-ядра у
шигелл и других энтеробактерий. Особенно опасны при диагнос-
тике SR-варианты, когда колонии сохраняют гладкую форму, но
утрачивают серологическую специфичность (так называемые се-
рологическая или скрытая R-форма).
В данном руководстве мы не останавливаемся на белковых
si некоторых других антигенах шигелл, поскольку они еще сла-
>бо изучены и их не используют для серологической идентифи-
кации.
Антигенные связи шигелл внутри рода были уже рассмотре-
ны ранее. Знание этих связей необходимо при изготовлении диа-
гностических сывороток. Для серологической же идентифика-
ции они не имеют большого значения, так как коммерческие
диагностические моно- и поливалентные сыворотки полностью
госвобождены от антител, перекрестно реагирующих с гетеро-
логичными штаммами шигелл, т. е. обладают строгой специфич-
ностью внутри рода.
В отличие от этого антигенное родство между шигеллами и
другими энтеробактериями имеет большое значение для диагно-
стики. Особенно тесные связи описаны между шигеллами и эше-
(рихиями, вплоть до идентичности некоторых О-антигенов.
В табл. 41 представлены описанные различными авторами
антигенные связи шигелл с другими энтеробактериями, обоб-
щенные в обзоре Н. А. Хоменко (1977) и дополненные более
(Поздними сведениями [Rowe В. et al., 1977; Cheasty Т., Rowe В.,
1983]. Кроме указанных в табл. 41, наблюдались также связи
гшпгелл с сальмонеллами, в основном за счет антигена 012, и
щерсиниями.
Помимо этого, установлено антигенное родство между S. dy-
•senteriae 1 и лептоспирами [loli A. et al., 1977], S. sonnei I фа-
зы c Plesiomonas shigelloides [Baer K., 1954]. Описаны и анти-
генные связи V. cholerae с различными энтеробактериями, в том
-числе и с шигеллами [Winkle S. et al., 1972].
Диагностические сыворотки адсорбируют не только шигел-
лами других наименований, но эшерихиями так называемой
труппы Alkalescens-Dispar, некоторыми сальмонеллами, a-штам-
мами* и рядом других энтеробактерий. Однако освобождение
шигеллезных сывороток от агглютининов ко всем существую-
щим общим антигенам теоретически и практически невозможно.
* Энтеробактерии, обладающие поверхностным a-антигеном (Hafnla,
сщтамм № 773 и др.).
1106
Таблица 41. Антигенные связи шигелл с другими энтеробактериями
Shigella O-rpynna E. coli Другие энтеробактерии
S. dysenteriae 1 1, 5, 19. f>9, 120
2 5. 19, 23, |ll2.i, c|, 117, 114, 149 Hafnia, P.. morganii
3 112a, c, |l24|, 161 P. inconstans, Citrobacter
4 58. 159 Ilafnia, Citrobacter
5 |5«| Citrobacter
6 i3o Ilafnia
7 121 Citrobacter
я 21, 38
9 —-
10 144
S. flexneri
1 а 1. 19, 62, 69. 73 |2, 3, 13, 44, 133. 135, 147) |P. morganii]
lb 1, 16, 19, 62, 69, 73
op 13 [4. 62, 69] [P. morganii]
2b 13, 73, |147|
3 4. 13, 16
4а 1, 13 |4, 17, 19, 73] Ilafnia
4b 13, |135|
5 2, 16, 19, |T2’i|
6, 16. 19, 50, 133. |35, 147
X 1. 2, 4, 13, 14, 50
Y 1, 2, 4, 13, 19, 25
S. boydii 1 2, 50, 136, 144, ||49|
2 87, 96
3 85 r
4 3, |53|, 149
5 18. |79| P. inconstans
6 7, 76 P. inconstans, Citrobacter
7 —
8 114, 11431 Hafnia
9 102 Hafnia
10 |05 Hafnia
II ||O5|
12 7
13 28, 98 Hafnia
14 21. | ’2|. 83 Hafnia
15 |Г|2а, b| Hafnia, Citrobacter

S sonnei —
107
Продолжение табл. 4t
Shigella
О-группа Е. coll
Другие эятеробяктермю
Провизорные
.серовары
.3873-50
3341-55
.3615-53
12710-54
11621-54
29 ____
3, 11521
124
41
Р|
Условные обозначения: |________________| О-антнгены идентичны; — отсутствие аи-
гтнгенного родства с Е. coli 01 — 0164; ( ] подсеровар S. flexneri не указан.
Поэтому для избежания диагностических ошибок необходим
единственно правильный методический прием: четко определять
мо культуральным и биохимическим признакам принадлежность
выделенного штамма к шигеллам, только после этого можно за-
вершить его серологическую идентификацию.
Для серологической ориентации, особенно при групповых за-
болеваниях, анализ можно начинать с агглютинации отдельных
□колоний из чашек первичного посева или лучше материала со
скошенной части комбинированной среды (Клиглера и т. пг),
применяя лишь поливалентные сыворотки. Полученный резуль-
тат рассматривают только как ориентировочный. Затем обяза-
тельно ставят тесты, подтверждающие принадлежность штамма
к роду Shigella, после чего завершают его серологическую иден-
тификацию.
Обычно исследование антигенной структуры шигелл начина-
ют с основной поливалентной сыворотки, содержащей антитела
ж S. flexneri 1—6 и S. sonnei. Эта сыворотка охватывает виды
яиигелл, составляющие более 95% от выделяемых в нашей стра-
не штаммов. Далее при положительном результате следует ис-
пользовать сыворотки к S. flexneri и S. sonnei, но с учетом час-
тоты выделения определенных шигелл в данной местности и пер-
вичных сведений о свойствах выделенной культуры. Например,
штамм, образующий индол, нет смысла испытывать с сыворот-
ками к S. sonnei и S. flexneri 6.
Определение серовара S. flexneri начинают с применения се-
роварспецнфических (типовых) сывороток (I, II, III, IV, V, VI),
а затем групповых (3,4; 6; 7,8), выявляющих подсеровар. Поря-
док использования сывороток зависит также от эпидемической
«обстановки. При работе с культурами S. flexneri необходимо
помнить, что иногда свежевыделенные штаммы слабо агглюти-
нируются, особенно в сыворотке 3,4. Следует провести 1—2 пас-
сажа 4-часовой бульонной культуры с высевом на питательный
агар. В большинстве случаев агглютинабельность повышается
(и штамм удается типировать. В этот же период необходимо про-
108
верить чистоту нетипирующейся культуры, высевая ее на чаш-
ку с дифференциальной средой, так как именно работа со сме-
шанной культурой приводит часто к неправильным выводам.
При подтверждении принадлежности бактерий к роду Shi-
gella, но отсутствии агглютинации в основной поливалентной
сыворотке рекомендуется испытать штамм (если он не сбражи-
вает маннит) с поливалентными сыворотками к S. dysenteriae.
В процессе дальнейшего исследования надо иметь в виду, что i
в СССР чаще встречаются S. dysenteriae серовары 2 и З^Кроме
того, необходимо учитывать пндолообразование, характерное
для S. dysenteriae 2, 7 и 8.
В аналогичном случае сбраживающие маннит штаммы испы-
тывают с поливалентными сыворотками к S. boydii: сначала
с содержащей антитела к более часто встречающимся у нас се-
роварам (I, 2, 4, 5, 7, 9, 12), а затем при отрицательной реак-
ции— с другими. При исследовании также рекомендуется обра-
щать внимание на индолообра >вание. S. boydii 5, 7, 9, 10, 13 и
15 способны образовывать индол, тогда как у остальных серо-
варов это свойство отсутствует.
Штаммы, обладающие культуральными и биохимическими
свойствами, типичными для шигелл, но не агглютинирующиеся
шигеллезными сыворотками, следует испытывать с сыворотками
к шигеллам провизорных сероваров.
При слабой агглютинации бактерии (имеющих свойства, ха-
рактерные для представителен S. dysenteriae и S. boydii), обла-
дающих К-антнгенами, следует испытывать агглютинабельность
кипяченых взвесей. В этом случае обязателен контроль стабиль-
ности взвеси в растворах натрия хлорида (0,85 нли 4%). Такой
контроль необходим для выявления спонтанной агглютинации
и при всех сомнительных реакциях или полиагглютинабельности
живых бактерий. Это позволяет исключить наличие серологиче-
ской R-формы, о которой говорилось ранее.
Причиной возникновения неспеиифнческнх реакций могут
быть и другие факторы. Например, так называемые нормальные
антитела, присутствующие в сыворотке крови животных еще до
их иммунизации и способные реагировать с самыми разнообраз-
ными бактериями, чаще с эшерпхиями, что еще раз подчеркива-
ет роль изучения культуральных и биохимических свойств испы-
туемых бактерий до установления их антигенной формулы.
Определение эпидемнолотческих маркеров. Сведения о вы-
деленном штамме шигелл, указывающие на его принадлежность
к какому-либо виду (серовару, подсеровару) этих бактерий,
вполне отвечают требованиям бактериологической диагностики
дизентерии, но, как правило, недостаточны для целен эпидемио-
логического ана.1И<а. Это обусловлено главным образом особен-
ностями в распространении различных этиологических форм ди-
зентерии. Известно, что среди возбудителей дизентерии отдель-
ные виды или серовары (по {серовары) составляют доминирую-
щую часть (S. sonnei, S. flexneri 2а, S. boydii 2 и др.), а один из
109
наиболее распространенных видов — S. sonnei к тому же одно-
роден по антигенному составу, что исключает его серологическое
типирование.
Все отмеченное вызвало необходимость разработки дополни-
тельных методов дифференциации шигелл, предназначенных
для установления эпидемиологической метки (маркера) штам-
ма. Таких методов существует несколько.
Эпидемиологический маркер может быть определен по био-
химическим свойствам штаммов шигелл (биовары), по продук-
ции колицинов (колинипогеновары), по чувствительности к эта-
лонным колицинам (колициновары) или бактериофагам (фаго-
вары), а также по спектру устойчивости к антибиотикам (анти-
биотикограмме) и факторам лекарственной устойчивости (типу
плазмид). Не все из этих методов можно считать до конца раз-
работанными или получившими международное признание, так
как они в неодинаковой мере надежны. Большинство исследо-
вателей считают наиболее эффективным для целен эпидемиоло-
гии использование одновременно нескольких методов.
Метод определения б поваров основан на вариа-
бельной способности различных штаммов шигелл ферментиро-
вать некоторые углеводы или образовывать индол, прост по ис-
полнению и доступен для практических лабораторий всех уров-
ней.
Впервые метод был разработав К. Bojlen в 1934 г. для диф-
ференциации S. sonnei. По различиям в характере биохимичес-
ких реакций штаммов этих бактерий при росте в среде с рамно-
зой, ксилозой и мальтозой автор описал 6 биоваров, обозначив
их а, Ь, с, d, е, f. Принцип, положенный в основу оригинальной
схемы К. Bojlen, получил поддержку ряда авторов различных
стран, которые дополнили эту схему [Zische К., Risclie Н.,
1973], обосновав возможность определения и других биоваров —
g, k, 1, m, п (табл. 42).
Хотя предлагались и другие схемы биохимического чипиро-
вания [Zische К., Rische А., 1973], схема по К. Bojlen наиболее
признана в мире и ее широко применяют в зарубежных стра-
нах, а иногда и советские исследователи. Однако она не лишена
недостатков, так как по ней нельзя четко отличить биовары е и
g (см. табл. 42), что послужило причиной ее ревизии и разра-
ботки новой схемы биохимического типирования S. sonnei [Со-
лодовников Ю. П. и др., 1971], ставшей в нашей стране офици-
ально действующей (табл. 43). До этой схемы в стране широко
применяли схему типирования по Новгородской (1945) с двумя
углеводами (рамнозой и ксилозой), которая позволяла опреде-
лять только 4 бновара (I, II, III, IV), что было недостаточно’
для эпидемиологических целей. Схема Солодовникова с соавт.
построена на основе схемы Bojlen, включающей три углевода,
дает возможность установить большее число биоваров. Кроме
того, в ней более рационально, чем в схеме по Bojlen, решен во-
прос об учете сроков ферментации мальтозы, способствуя диф-
110
Таблица 42. Схема определения биовароя S. sonnei по К. Bojlen, допол-
ненная различными авторами |по Zische К., Rische Н, 1973]
Биовар
Биохимические реакции
углеводол
Автор, год
рамноза I ксилоза мальтоза
а
Ь
с
(I
е
1
£
к
4-
4
4-
4 (3)
4"
4(>2)
I (1- 2)
I 02)
I 02)
I (I- 2)
I 02)
(02)
К. Bojlen. 1934
4 (1- •)
1
in
п
4-02)
4-
-404)
Е. Hamtnarslroin. 1919
S. Szturm RubitiMen, D. Piechaud,
1957
A. Kncharewicz, 1959
О. К). Емельянола, 1967
Условные обозначения: + птюжительная реакция я течение 1—2 дней;
— отрицательна* ргякцп» в течение 30 лч°й; > замедленная положительная реакция
(до 21 дня); цифры показывают сроки появления положительных реакций.
ференциации некоторых биоваров. Принятые в ней обозначения
отражают преемственность в обозначениях обеих предшествую-
щих схем, что дает возможность при необходимости сопостав-
лять данные о распространении биоваров, определяемых по схе-
ме Солодовникова с соавт., с ретроспективным материалом.
Общеизвестна ставшая классической схема биохимического
типирования S. flexneri 6 по характеру ферментации глюкозы,
маннита и дульцита (табл. 44). Поскольку результаты фермен-
тации дульцита учитывают в поздние сроки, практически важно
отношение к двум углеводам (глюкозе и манниту), позволяю-
щим определять 3 основных биовара — Boyd 88, Manchester и
Newcastle. В целом эта схема, несмотря па ее простоту и чет-
кость, не удовлетворяет эпидемиологические запросы, так как
Та блиц я -13. Схема определения биоваров S. sonnei [по Ю. II. Солодовни-
кову и др., 19711
Биовар Ферментация углеводов
рамноза ксилоза мальтоза
• ' 44W
1я 4-0) —— 4-0-2)
1Ь --(И — 4-02)
пи --(>>) — 4-0-2)
Не ИМ --OD --(1) 4-0)
11Ге --0) . -Т-О) 4-02)
IV! 4-0) •4-(2 и попке) 4 (1 и позже)
У г лови wp обпчм а ч ен иг Ь Ферментация (в скобкях у кианы сроки фермен-
тации в днях); — отсутствие ферментации.
111
- -» •
. _ _. ..vaikii о [no tdwards P.,
Бновар Ферментация углеводов
глюкоза маннит дульцит
Boyd 88 к к
к к (К)
Manchester кг кг (КГ)
кг кг —
Newcastle кг — (КГ)
к — .—.
к — (К)
Условные обозначения: К — ферментация с образованием кислоты: КГ —
ферментация с образованном кислоты н газа; — отсутствие ферментации; скобки указы*
вают на замедленную ферментацию.
в нашей стране и во многих других циркулирует в основном
дульцитположительный биовар Boyd 88.
Для типирования других представителей S. flexneri (1—5,
var. X, Y) в нашей стране предложена схема Хоменко, Киселе-
вой (1967), предполагающая установление 15 биоваров по ре-
зультатам ферментации 4 углеводов — мальтозы, арабинозы,
сорбита и рамнозы (табл. 45).
Польскими авторами [Slypulkowska-Misiurewicz II., Nowory-
ta J., 1973] разработана схема, позволяющая определять 13 био-
варов S. Ilexneri (1—5, var. X, У) по их способности к индолооб-
Таблица 45. Схема определения биоваров S. flexneri 1—5, var. X, V. [по
Н. А. Хоменко, Б. С. Киселевой, 1967]
Бновар Ферментация углеводов
мальтоза арабиноза сорбит рамноза
1 +.(+) +,(+) +,(+) + .(-!-)
2 +.(+) +.(+) +.(+)
3 +.(+) — +.(+) +.(+) '
4 +.(+) —
5 +.(+) — +.(-?) —-
6 +.(+) +.(+)
7 +.(+) +.(+) — +
8 — +.(+) +.(+) +.(+)
9 — —> +.(+) Ч-.(-г)
10 +.(+) +.(+)
11 — — +.(+) —
12 — +.(+) — —
13 —- — (+)
14 — — — (+)
15 — — —
Условные обозначения: + ферментация в I-е сутки; (+) замедленная фер-
ментация; +. (+) ферментация чаще в 1-е сутки, реже позднее; — отсутствие фермен-
тации.
112
Таблица 46. Схем л определения Ьно_. р< S- flexneri 1—5, W- X, Y [по
И. Stypiilkowska-Mlsiiirewirz, J Noworyta, 1973]
Бяохимичгскяе ргякции
Биоввр ИНДОЛ арябнпозя рямиоза рафиноза
1 2 3 4 6 7 8 9 10 II 12 13 11+111+++++++ Г'" 1 1 1 +т+ 1 1 + + ++’+ I++I++I1+11+1 ++11+11+111++
У с л о в н ы e о б о i и я ч e и и я: 4- положительная реакция в 1-е сутки, — отрица-
тельная реакция в 1-е сутки.
разованню и ферментации арабинозы, рамнозы и рафинозы.
Большим достоинством ее является возможность определения
биовара в I-е сутки (табл. 46).
Этими же авторами разработана схема биохимического ти-
пирования и S. boydii, по коюрой можно определить 8 биоваров
по ферментации сорбита, глицерина, ксилозы к дульцита
(табл. 47). При практическом использовании обеих схем на
штаммах, выделенных в Польше, авторы могли определять до
11 биоваров в пределах одного подсеровара S. Flexneri 2а или
до 4—8 биоваров в пределах одною какого-либо серовара
S. boxdii.
Не являясь интернациональными, указанные схемы польских
авторов пригодны для работы в нашей стране нрн дифферен-
та б л ин а 47. Схема определения биоваров S. boudii [по Stypulkowska-
Mifciurewici Н., Noworyla J., 1973]
Бновар Ферменттцня углеводов
сорбит глицерин ксилоза дульцит
1 + + + +
2 + + — +
3 + ——
4 — + —
5 + + — —-
6 —> 4- — 4*
7 -1- —— ——
8 — + + 4“
Условные обозначении: + фермент: щ.я в 1-е сутки-. — отсутствие фер-
ментации at -е сутки.
8—817
ИЗ
циации S. flexneri (1—5, var. X, Y) и S. boydii, если это необхо*
димо для эпидемиологического га^лиза.
Техника определения биоваров не представляет трудностей.
Важно, чтобы типированию подвергались штаммы, идентифика-
ция которых была полностью предварительно завершена. В про-
цессе этой идентификации обычно становятся известны некото-
рые характеристики, необходимые для биохимического типиро-
вания, например в отношении образования индола. Для посева
в жидкие среды с соответствующими углеводами, предусмотрен-
ными схемами, используют 18—24-часовые (лучшие выращен-
ные в бульоне) культуры. Среды с посевами инкубируют при
37 °C. Учет результатов проводят ежедневно. При получении
нечетких или сомнительных результатов рекомендуется испыты-
вать 10 колоний типируемого штамма пли больше. Для этого
•его рассевают на среде Эндо или 1,5—1.7% агаре с тем, чтобы
получить рост изолированных колоний. Колонии по отдельности
'пересевают в пробирки с питательным бульоном, из которого
после 18—24-часовой инкубации при 37 СС делают пересевы в
среды с соответствующими углеводами.
Таким образом, почти для шигелл всех видов разработаны
методы биохимического типирования. Исключение составляют
S. dysenteriae в связи с меньшей необходимостью их дополни-
тельной дифференциации из-за весьма ограниченного распрост-
ранения во всем мире и нашей стране. Несмотря на необходи-
мость дальнейших исследований, в целом метод определения
биоваров очень полезен. Об этом свидетельствует обширная ли-
тература, посвященная его эпидемиологической ценности, в осо-
бенности при дизентерии Зоине.
Метод определения колициногенной актив-
ности основан на свойстве шигелл продуцировать колицины
с неодинаковым спектром действия на чувствительные к ним
бактерии. С его помощью могут быть дифференцированы многие
штаммы шигелл, обладающие способностью к образованию ко-
липинов, т. е. колпиппогеинпстью. Считают, что частота колиии-
ногенных штаммов наиболее высокая средн S. sonnei, а наибо-
лее низкая среди S. flexneri 1—5 [Тимаков В. Д. и др., 1980],
однако в последнее время появляются сообщения, свидетельст-
вующие о тенденции к сближению в уровне колицнногенностп
шигелл разных видов.
В 1958 г. J. Abbott и R. Shannon предложили метод внутри-
видовой дифференциации S. sonnei на основе феномена коли-
циногенпи. Для выявления колициногенной активности изучае-
мых культур эти авторы создали набор из 15 индикаторных
штаммов. Для практического применения в условиях нашей
страны оригинальный метод был несколько модифицирован.
В частности, было рекомендовано брать меньшее число индика-
торных штаммов, с помощью которых можно определить коли-
циногенную активность изучаемых культур S. sonnei [Смирно-
ва-Мутушева М. А., 1968; Татаринова С. Д., Трагер Р. С., 1968].
114
Таблг iа 48. Схема определения колициногенной активности S. sonnei п»
J. Abbot, R. Shannon (в модификации М. А. Смирновой-Мутушевой, 1968)
У € Л о П П М Г пбОЭИПЧе П11И* I торможение ростп; - 41ТСуТС1ИИГ торможения;
X — пзрпяГ>г.тм1ыг |м’1ультяуы <>6ом1л*(>*п||я пилмклторных тпглммов сооттчсюуют сле-
дующим ияпмгпппяпням ортнпз.тыи!* пплммол* 31 S. ? 32 «otjH' i 56; 33 —
S. cfiniKl 17: 17 S. sonpel 55/9,4: Ю 5 sonнс I R6; 821Я * dySPnirrinr ? MI9; 41 —
S sonnei 2/M, 42 S. sonnei 2/15. *|1 5» sniiitrl 175; 44- I- <oj| k -!2 POU . — S. son-
nei ?M 35 S. sonnei 38; 36 S sonnei 5G/5G. 3R — S. snnnri |.»f: 40 --5. «nnnH 2/7.
В эюп модификации метол, принятый как официально дейст-
вующий. предусматривает постоянное применение Н> индикатор-
ных штаммов, включающих 8 штаммов S. sonnei, один — S. dv-
senh iiae 2 и один Е. coli. С их помощью Mot yi бып. установле-
ны 17 колицнпо1еноваров (|абл. 48). Другие 5 индикаторных
штаммов (S. sonnei) применяют для уточнения характеристик,
если результаты определения колициногеновара но основной
схеме вызывают сомнения или необходимо их подтвердить.
Само исследование проводят способом перекрестных посевов.
Для этого суточную бульонную культуру исследуемого штамма
сеют на агаровую пластинчатую среду в виде двух параллель-
ных полос, располагающихся по лбе стороны предполагаемой
липин диаметра чашки. Ра< стояние между полосами посева
должно составлять 3—I см В качестве питательной среды в
чашках применяют коммерческий питательный агар «Д» или
приготовленный в лаборатории 1,5% питательный агар на гид-
ролизате Хоттишера с кош-тиым содержанием амминного азота
в среде 1.3 -1.5% и pH 7.1 С целью предотвращения роста
воздушной флоры к агару добавляют раствор генцианвиолста
8*
115
f(2—4 капли 0,1% водного раствора на 100 мл среды); отмече-
<но, что он также стимулирует колицинопродукнию.
Чашки с указанными посевами инкубируют при 37 °C в тече-
ние 48 ч — срока, необходимого для накопления в среде колици-
«ов в концентрации, достаточной для проявления их действия
«а индикаторные штаммы. После инкубации культуру, вырос-
шую в виде двух полос, убивают парами хлороформа. Для это-
го в крышку чашки Петри наливают 0,5 мл хлороформа и за-
крывают ее другой половиной чашки с выросшей культурой, вы-
держивая экспозицию в течение 40—60 мин. Обезвреженную
культуру удаляют, снимая ее узким краем стерильного предмет-
ного стекла и стараясь сохранить целостность агаровой поверх-
ности. После этого на агар наносят 4-часовые бульонные куль-
туры индикаторных штаммов в виде поперечных полосок (под
прямым углом) по отношению к двум (продольным) полосам
посева исследуемого штамма. При этом их располагают таким
образом, чтобы полоски посева на одной половине чашки оказы-
вались против интервалов между полосками посева на другой
половине. Целесообразно постоянно соблюдать однотипный по-
рядок расположения посевов индикаторных штаммов, что позво-
ляет при определенном навыке не проводить специальные помет-
ки на чашках.
Чашки с посевами индикаторных штаммов инкубируют при
37 °C на протяжении 18—20 ч, после чего проводят учет резуль-
татов.
Прежде всего необходимо уяснить, является ли исследуемый
•штамм колицнногенным. Если он не образует колицины, все ин-
дикаторные штаммы вырастают в виде сплошных полос. Пока-
зателем же колициногенности является торможение роста ин-
дикаторного штамма 44 (Е. coli ROW), чувствительного ко всем
известным колицинам, кроме типа 7 (к нему чувствителен
штамм 33). В зависимости от особенностей продуцируемого ко-
лицина возможна также задержка роста еще какого-либо (ка-
ких-либо) из индикаторных штаммов.
При изучении характера литического спектра исходят из
того, что зону торможения роста индикаторных бактерий разме-
ром более 4 мм оценивают как положительный результат. Сопо-
ставляя полученные данные (табл. 48), устанавливают колици-
ногеновар. Однако нередко литический спектр может не соот-
ветствовать ни одному из условных колициногеноваров. Такие
штаммы обозначают как нетипируемые.
Применение метода колициногенотипирования требует перио-
дического контроля стабильности свойств индикаторных штам-
мов с помощью набора стандартных колициногенных штаммов
(табл. 49).
Определение спектра колицинотнной активности шигелл
для эпидемиологического анализа заболеваемости дизентерией
многие авторы оценивают очень высоко. Более широкому внед-
рению в практику этого метода в нашей стране препятствует в
(16
Таблица 49. Эталонные колицянопиные штаммы для контроля индикатор-
ных колициночуветвите 1.ьиых штаммов (J. Abbot, R. Shannon, 1958)
Наименова- ние штамме регистраци- онный но- мер* Колнцино- геновар Наимяплвя- нне штамма Регистраци- онный но- мер* Колнцино- ге нов ар
S. sonnei 100045 la S. sonnei 100052 7
S. sonnei 100041. 1l> S sonnet 100053 8
S. sonnei 100047 2 S. sonnei 100054 9
• S. sonnei |'Ю034 3 S sonnei 100055 10
S. sonnei 100048 За S. sonnei 100056 11
S. sonnei 100049 4 S. sonnei 100057 12
-S. sonnei НЮ05И 5 S sonnei J0C058 13
S. sonnei 100351 б
* Регистрационные номера укатаны в соответствии с перечнем Международного ре-
ференс-центра но шигелл а м в Лондоне.
основном отсутствие централитованною обеспечения практиче-
ских лаборатории наборами эталонных штаммов.
Метод определения к о л и ц и и о в а р о в основан на
способности шигелл адсорбировать на рецепторах поверхности
клетки колицины, при этом различные колицины или группа ко-
лнцинов адсорбируются на строго специфичных рецепторах.
Этот метод является более универсальным по сравнению с ме-
тодом кол11Ц1Шо|еноти11нровапия, так как ратные виды шигелл
(в целом занимающих одно нз первых мест по чувствительности
к колининам средн всех родов энтеробактерий) мало отличают-
ся по удельному весу колпинночувстнительных штаммов. Не-
смотря на это преимущество, возможности метода ограничены
из-за относительной нестабильности колициноваров.
Определение колициноваров [Смнрнова-Мутушева М А.,
1968] предусматривает использование II эталонных штаммов
нз коллекции Р. I redericq, наиболее стабильно продуцирующих
ряд колицннов (табл. 50). Перед началом исследования готовят
чашки с 1,5% мясо-пептонным агаром (20—25 мл на чашку) с
Таблица 50. Эталонные колппнногенные штаммы
для определения колициноваров нннелл (Р Fredericq)
Ниименование штамма Продуцируемый колицин
Е. coli СЛ-18 в
Е coll СЛ-23 D
Е coll СЛ-38 ЕН
Е. coli (.Л-42 Г
Е mli СЛ 53 1
Е. coli К-235 К
Е. coli С Л-62 J н
Е. coli СЛ-7 V
S. boydii Р-1 S,
S sonne Р9 Sj+I
В dispar P-14 Ss
117
добавлением генцианвиолета (2—4 капли 0,1 % водного раствора
на 100 мл среды). Опытставятв двух чашках, дно которых разде-
ляют на 11 квадратов (в каждой чашке) — по числу эталонных
штаммов, обозначая их условно 1, 2, 3 и т. д., соответственно по-
рядковым номерам этих штаммов. В каждый из квадратов за-
севают уколом петли суточную бульонную культуру соответст-
вующего эталонного штамма. Чашки с посевами инкубируют
при 37 °C в течение 22—24 ч, затем обеззараживают хлорофор-
мом, как было описано выше (удаление обработанной бактери-
альной массы не требуется). По окончании этой процедуры по
2 капли 6-часовой бульонной культуры исследуемого штамма
вносят в две пробирки с 2,5 мл расплавленного полужидкого
(0,7%) и охлажденного до 46—48 °C агара и перемешивают.
Смесь наслаивают в обе чашки, в которых в результате пред-
шествовавшего культивирования эталонных колипиногепных
штаммов колицины диффундировали в агар.
Через 16—20 ч инкубании при 37 °C вокруг макроколоний
эталонных штаммов образуются зоны задержки роста испытуе-
мого штамма, если он колициночувствителен. Штамм считают
чувствительным, если величина зоны задержки его роста, изме-
ряемая от края макроколонии эталонного колициногенного
штамма до наружного края зоны, составляет более 2 мм.
При оценке результатов учитывают степень чувствительности
к колицинам по 4-плюсовой системе: зона до 2 мм +, от 2 до
5 мм 4- 4-, от 5 до 10 мм 4-4-4- и более 10 мм 4- 4- 4- 4-. Для
получения четких результатов большое значение имеет правиль-
но приготовленная агаровая среда. Превышение рекомендуемой
плотности, например, приводит к замедленной диффузии коли-
иинов. Важно также обеспечить равномерное распределение в
чашках инокулята.
Изучение спектра задержки роста проводят в обеих чашках;
при совпадении результатов типирование считают закончен-
ным, при расхождении — исследование повторяют. Дублирован-
ное исполнение процедур колицинотиппрования необходимо для
исключения технических погрешностей, могущих искажать
спектр чувствительности к колицинам исследуемого штамма.
При обозначении установленного колициновара указывают
перечень колицинов (колицина), к которым исследуемый штамм
оказался чувствителен (см. табл. 50).
Определение фаговаров шигелл в нашей стране пока
не нашло какого-либо практического решения ни в отношении
методики его проведения, ни в разработке технологии производ-
ства типирующих бактериофагов. Вместе с тем краткое освеще-
ние в данном руководстве материалов, отраженных в мировой
науке и практике, полезно.
В основе метода фаготинирования лежит способность к спе-
цифической адсорбции определенных бактериофагов на рецеп-
торах бактериальной клетки с последующим лизисом последней.
Большое разнообразие литического спектра, выявляемого у
118
штаммов шигелл, обусловлено как неоднородностью химическо-
го состава и ультраструктуры фагов, так и неоднородностью са-
мих фагорецепторов.
Известно, чю дифференциация штаммов по чувствительно-
сти к фагам возможна для S. sonnei, S. flexneri п S. boydii. Ро-
доначальником метода определения фашваров у шигелл явля-
ется Е. Hanimai strom (1949), предложивший его для S. sonnei.
Разработанная нм схема включает 12 эталонных фагов, обозна-
ченных римскими цифрами (I— XII). Фаги I—XI являются диф-
ференцирующими (типируютцимп) S. sonnei во 11 фазе, а XII —
контрольный — служит для выявления у штамма колоний II фа-
зы. Определяемые фаговары обозначают арабскими цифрами,
число которых но данным Е I lammai strom составляло 68 (со
2-го но 69), а позже [L Fallings »l al , 1967—1969] возросло
до 98.
Схему фаготипировання S. sonnei no Е. Hanimai shorn, до
полненную L. Fallings с соавт , применяют во многих зарубеж-
ных странах [Zische К., Rische А.. 1973] большинство иссле-
дователей признают удовлс1ворительным постоянство фаговаров
S. sonnei, что позволяет делать обоснованные выводы в конкрет-
ных эпидемических ситуациях как в пределах одной страны,
так в ряда стран. Одновременно с этим указывают, что метод
следует совершенствовать в отношении пополнения и стандарти-
зации международного набора фагов, унификации техники оп-
ределения фаговаров н достижения полного единообразия ре-
зультатов, получаемых в разных лабораториях (Хоменко Н. А.,
1975|.
В СССР положительные результаты были получены с набо-
рами Фагов I laimnarslrdm. полученными от I. Fallings из Шве-
ции {Мамонтова Т. II., 1973, 1974] и от S. Slopek из Польши
{Хоменко Н. А., 1974]. Указанными авторами были выявлены
стабильность установленных фаговаров и приемлемость метода
для целей оперативного эпидемиоло! пческого анализа заболе-
ваемости. Кроме того, были сделаны выводы, что определение
биоваров средн штаммов, принадлежащих к одному фаговару,
позволяет уточнять эпидемиологические маркеры выделенных
культур.
В отличие от схемы S. sonnei фаготппирование S. flexneri
в международном плане находится на мопсе завершенной ста-
дии. В 1967 г. была создана Международная рабочая группа,
изучившая 31 фага разных национальных коллекций, включав-
ших 12 фагов польскою набора (S. Slopek, М. Mnlczyk), 12 фа-
гов румынскою набора (G. Islrati), 5 фагов из Венгрии
(Н. Milch) и 5 фагов из ГДР (И. Rische) В результате было
отобрано 13 относительно стабильных фагов: EI. Г2, F4, F5, F6,
F9, FIO. а, 1)8. 1)2я, l)2h, D2c, названных стандартными. С их
помощью можно определить 51 фаговара |Slopek S., 1973], при
этом значительное число фаговаров может быть выявлено в пре-
делах одного нодсеровара.
119
Отмечено, что для S. flexneri 6 характерен чрезвычайно уз-
кий спектр чувствительности к указанным стандартным фагам.
Они лизируются в основном фагом F10 и лишь немногие штам-
мы — F5.
Для фаготипированпя S. boydii в Румынии (Bercovici С.
et al., 1972] разработана схема, включающая 20 бактериофагов
(а, Ь, с, d и т. д ). При изучении штаммов S. boydii, выделенных
в Румынии, установлена возможность дифференциации этих
бактерий на 37 фаговаров. В связи с тем что в числе тнпирован-
ных штаммов S. boydii были только серовары 1, 2, 4, 7 и 10, ав-
торы высказали предположение, что при исследовании других
сероваров по предложенной схеме число выявляемых фаговаров
может быть увеличено. Очевидно, указанная схема еще не до-
работана.
Бесспорно, что метод внутривидовой дифференциации ши-
гелл по спектру чувствительности к типируюшпм фагам имеет
большое значение для эпидемиологии, особенно при выделении
серологически однородных возбудителей, предоставляя возмож-
ность определять значительно большее число маркеров штам-
мов. Однако, по мнению многих исследователей, пока этот ме-
тод еще недостаточно хорошо разработан. Необходимо совер-
шенствовать подбор фагов с целью сокращения числа нетнпи-
рующихся штаммов, унифицировать схемы, упрощать технику
исполнения, а также осуществлять централизованное размноже-
ние эталонных наборов фагов и тест-штаммов.
Определение а н т и б и оти к о г р а м м ы. При описа-
нии множественной лекарственной устойчивости, обусловленной
в основном R-плазмидами, отмечалось, что спектр полирезис-
тентности (антнбиотикограмма) нередко носит сугубо индиви-
дуальный характер, в связи с чем антибиотикограммы штаммов
стали предлагать в качестве эпидемиологических меток. С ука-
занной целью этот метод испытывали за рубежом и в нашей
стране, при этом достаточно успешным он оказывался при рас-
шифровке острых вспышек дизентерии, в особенности, если дру-
гие методы определения эпидемиологических маркеров не дава-
ли желаемого результата. Его пригодность при других ситуа-
циях, по мнению Н. Tschape и Н. Rische (1973), весьма условна,
так как в связи с конъюгативностью R-плазмид, частотой нх
сегрегации, а также возможностью приобретения других плаз-
мид, антнбиотикограмма штаммов может подвергаться измене-
ниям. ,
Установление антибиотикограммы проводят с помощью из-
вестных методов определения чувствительности к антибиотикам,
в числе которых наиболее приемлем в практических условиях
метод диффузии в агар с применением набора коммерческих
стандартных дисков.
Определенное значение приобретает также возможность диф-
ференциации шигелл, несущих R-плазмнды по группам несовме-
стимости. Определение групп несовместимости проводят с по-
120
мощью специального теста, принцип которого изложен в реко-
мендациях ВОЗ (Серия технических докладов № 621, 1980),
однако из-за сложности и трудоемкости выполнения применение
этого метода в практике сомнительно.
РОД SALMONELLA
Родовое название Salmonella было дано этим бактериям
J. Lignicres в 1900 г. в честь американского исследователя
D. Salmon, описавшего в 1885 г, микроорганизм (В. suipestifer),
известный теперь как Salmonella cholerae-suis и считавшийся
первоначально возбудителем чумы свиней. В последующем бы-
ло установлено, что этот микроорганизм в действительности
был лишь нередким спутником вируса — истинною возбуди-
теля чумы свиней.
Это родовое название было принято Международным согла-
шением на основе приоритета в соответствии с интернациональ-
ными правилами ботанической номенклатуры в 1933 г.
Первым, кто обосновал бактериальную этиологию сальмо-
неллезов, был Л. Gartner, выделивший в 1888 г. во время
вспышки энтеритов во Фрапкенхаузене из мяса вынужденно
убитой коровы и селезенки умершею человека идентичные бак-
терии, названные им «Bacillus enterilidis» и именуемые ныне
Salmonella entcritidis. Применявшееся в отношении этого микро-
ба дополнительное название «.Icua» было дано ему A. Gartner
в честь института, в котором он был выделен. Известен ряд дру-
гих его синонимов: Bacterium enterilidis (Chester Г , 1897]; Ba-
cillus Gaerfner [Morgan Л., 1905]; Typns Gartner Jena [Kauff-
mann F., 1930].
В 1898 г. наш соотечественник В. Исаченко, а в 1900 г.
J. Danysz во Франпни выделили роде гневный S. enterilidis мик-
роорганизм возбудитель эпизоотий крыс- S. entetitidis var.
danysz пли S. enterilidis v. ratiii, использовавшийся впоследст-
вии в качестве биологического средства истребления этих жи-
вотных.
В 1880 г. ( Eberth открыл возбудителей брюшного тифа при
микроскопическом исследовании срезов селезенки и других внут-
ренних органон людей, умерших от брюшною тифа, и назвал
их «Typhvshacillen». В 1881 i. ученик Р. Коха G. Gattky впер-
вые сообщил о выделенпи S Ivplii в чистой культуре нз селезен-
ки умершего от брюшною тифа но время эпидемии этой инфек-
ции в Виттенбергере в 1882 i. К числу наиболее распространен-
ных синонимов этих микроорганизмов можно отнести: Bacte-
rium typliosum [Zopf W., 18811: Bacillus lyphi abdominalis
[Flugge C„ 1886|; Ebertbella typlii [Bergey D. et al., 1925].
Первое сообщение о S. typhiinurium было сделано в 1892 г.
F. I other, выделившим этот микроорганизм у павших белых мы-
шей во время эпизоотии в питомнике 1 рейсвальдского универси-
121
тета- в 1889 и 1900 гг и назвавшим его «Bacillus typhimurium»..
В 1896 г. С Katnsche описал эпидемию отравлении, связанных
с употреблением мяса вынужденно забитой коровы в г. Бреслау..
Выделенный им во время этой эпидемии микроорганизм был
назван «Breslau Bacillus», и он оказался идентичным микроор-
ганизму, выделенному Леффлером. В последующем этот микро-
организм был выделен многими исследователями, что обуслови-
ло особенно большое число его синонимов Bacillus psittacosis-
[Nocard Т., 1893]; Bacillus Aertrycke [De Nobele J., 1848]; Typus
Breslau [Kauffmann F., 1930] и др.
В 1896 г. С. Achard и R. Bensaude, а в 1888 г. Н. Schottmiil-
ler выделили возбудите дя паратифа В, получившего первона-
чально названия «Bacille paratyphique» и «Paratyphus bacillus».
Из числа известных его синонимов можно упомянуть: Bacillus-
febris gastricae [Kurth H., 1901]; Bacillus paratyphosus В. [Boy-
cott A., 1906]; Salmonella paratyphi В [Castellani A.,
Chalmers A.-, 1919]; S. schottmuelleri [Bergey D. et al.,.
1930].
В 1898 г. N. Gwyn открыл, a H. Kayser описал, как само-
стоятельный тип, возбудителя паратифа А — Salmonella paraty-
phi А., предшествующими названиями которого были: Paracolon
bacillus [Gwyn N., 1898]; Bacterium paratyphi Typus A [Brion A.,
Kayser A., 1902]; Salmonella paratyphi A [Castellani A, Chal-
mers A., 1919]; Salmonella paratyphi [Bergey D. et al., 1930];
Typus A [Kauffmann F., 1930].
Возбудитель паратифа С — S. paratyphi С впервые был вы-
делен в Турции во время войны 1914—1918 гг. Р. Neukirch и
назван первоначально Bact. erzindjan. В 1920 г. эти микроорга-
низмы были выделены Г. А. Ивашенцовнм и названы бактерия-
ми паратифа Ni. F. Weigmann, изучив антигенную структуру
большого числа штаммов этих микроорганизмов, показал, что-
штаммы, принадлежащие к группе С, можно подразделить на
С| и С2. Позднее было установлено, что штаммы С2 Вейгмана и
Nt Г. А. Ивашенцова идентичны и ныне именуются S. paraty-
phi С.
С каждым годом число выявленных представителей рода Sal-
monella увеличивалось. Так, если в период с 1881 по 1914 г. их
насчитывалось лишь 12, то в следующие 13 лет прибавилось
еще 12. Первая схема Кауфмана — Уайта в 1934 г. насчитывала
уже 44 представителя. Особенно быстро нарастало число их
после 2-й мировой войны и в настоящее время оно приближается
к 2000.
Официальной спецификации для выбора названия сальмо-
нелл не существует Каждый, кто открывал новый зид (тип, се-
ровар), давал ему название по собственному усмотрению, в ре-
зультате чего названия сальмонелл имеют самое разнообразное
происхождение.
Первые выделявшиеся серовары сальмонелл получали, как
правило, название болезни, которую они вызывали у человека!
122
(S. typhi, S. paratyphi A, S. paratyphi B. S. paratyphi C, S. ente-
ritidis) или у животных (S. abortus-bovis, S. abortus-ovis,
S. abortus-cqui, S. cholerae-suis, S. typhimurium, S typhi-suis).
Многие из сероваров получали название страны (S. brasil,
S. Canada, S con^o, S. texas), города (S. aberdeen, S. hamburg,
S. moscow, S. dar-es-salaain) пли квартала юрода (S. amager,
S. friedrichsfelde), в которых ори были выделены, или )лицы, на
которой располагался институт, где был идентифицирован
штамм (S. kuessel, S. sterrenbos).
Некоторым из сероваров присвоены название улицы, на ко-
торой жил пациент (S. irenea, S. linton), госпиталя, в котором
был выделен штамм (S. blegdam, S. bloct.ley, S. zirchow), или
фамилия липа, выделившего или идентифицировавшего серовар
(S. arechaxaeeta S. morehead. S. saphra).
Отдельные серовары получили зоологическое название жи-
вотного, у которого они были обнаружены (S. cairina, S. fulica)
или материала, из которого они были выделены (S. aqua, S. car-
no, S. os). В ряде случаев вновь выделявшимся штаммам при*
спаивались названия рек (S. huniber, S mendosa. S. suedcrelbe),
гор и долин (S. carmel, S. emek. S. shtibra. S. spartel).
Названия отдельных сероваров пристав тяют собой комбина*
цию слогов и букв различных слов. Так. например, S. anfo происхо-
дит от animalfood (корма животных); S. сеусо — от «Ceylonese
coconut» (цейлонский кокосовый орех); S. chinovum — от «Chi-
nese» и «ovum» (яйца из Китая), a S. ank представляет собой
первые буквы слов «address not known» (адрес неизвестен).
Известны два серовара — S. sullivan и S. gilbert, выделенные из
южноафриканских замороженных япн, которым были даны наз-
вания в честь композитора (A Sullivan) и его либрехиста
(W. S. Gilbert). Наконец, несколько сероваров получит назва-
ния добродетелей, как например S charity (милосердие),
S. verity (истина) и S. patience (терпение).
К сказанному уместно добавить, что число' представителен
рода садьмонелла продолжает постоянно пополняться и ежегод-
но в среднем прибавляется около 50 новых сероваро»
Классификация и номенклатура. С тех пор как сальмонеллы
были объединены в самостсятельный род, их классификация и
номенклатура неоднократно подвергались пересмотру и измене-
ниям, при этом наибольшую лнскус'чю вызывал вопрос о том,
рассматривать ли входящих в род Salmonella пред' тавителей,
как вилы или типы.
В 1450 г. F. Kauffmann предложил отдельные серотипы рода
Salmonella рассматривать, как бактериальные виды. Однако та-
хой принцип классификации L. Le Minor (1958), J. Taj lor
(1959) и др. не разделяли.
Позднее F. Kauffmann Н961, 1963) дал определение рода
Salmonella, ка.х «группы родственных серо-ферментативных фа-
готиков», прй этом обычная номенклатура серотипов не измени-
лась.
123
Известны и другие классификационные системы. Так,
F. Kauffmann и Р. Edwards [1952] предложили подразделить
род Salmonella на 3 вида: S. cholerae-suls (вид он же тип),
S. typhosa и S. enterica, при этом все серотипы, не принадлежа-
щие к первым двум, включались в третий вид.
Близкое к этому подразделение рода Salmonella на 3 вида
было предложено Е. Borman с соавт. (1944): S. choleraesuis,
S. typhosa и S. kauffmanii, с учетом того, что серотипы, не при-
надлежащие к первым двум, включались в третий вид.
W. Ewing (1963), принимая принципиально такое- деление
рода на 3 вида, внес изменения в их названия: S. choleraesuis,
S. typhosa и S. enteritidis.
F. Kauffmann (1966) подразделил род Salmonella на 4 под-
рода (I, II, III, IV) на основании ферментативных характери-
стик входящих в них бактерий, в первую очередь по наличию-
или отсутствию у них способности расти в присутствии KCN.
При этом в качестве III подрода в род Salmonella была включе-
на группа бактерий Arizona, рассматривавшаяся ранее как са-
мостоятельный род.
L. Le Minor, R. Rohde и J Tayler (1970) предложили класси-
фикацию, основанную на биохимических различиях членов рода
Salmonella, согласно которой подроды (по Кауфману) рассмат-
ривались как виды, которым были даны следующие названия:
-_S Kauhm-innii_(I подрод по Кауфману)—в честь датского
ученого F. Kauffmann по предложению Е. Borman с соавт.
(1944);
— S. salamae_(II подрод по Кауфману) происходит от названия
'' первого описанного серотипа этого подрода — S. dar-es-sa-
laam
— по предложению L. Le Minor с соавт. (1970);
— S. arizonae (III подрод по Кауфману) — предложено
F. Kauffmann в 1941 г.;
— S. houtenae,(IV подрод пс Кауфману) —от названия первого
" серотип-а этого подрода — S. houten — по предложению L. Le
Minor с соавт. (1970).
Согласно этой классификации авторы предложили следую-
щую номенклатуру для серотип^"
— S. kauffmannii (I подрод). В соответствии с кодом —
«S. kauffmannii» серотип S. typhi — при этом рабочая номен-
клатура сохраняет привычные названия — S. tvphi. Названия
у серотипов сохраняются и не сопровождаются формулой.
— S. salamae (II подрод). Серотипы обозначаются формулой,
а бывшие названия отменяются или временно даются в скоб-
ках. Например: 1, 4, 12, 27, z, е, n, х (*S. nordenham). Звез-
дочка указывает, что этот серотип принадлежит к подроду
II согласно номенклатуре Кауфмана.
— S. arizonae (III подрод). Серотип обозначается только фор-
мулой или временно сохраняется название Arizona и приво-
дится его антигенная формула согласно схеме Р. Edwards
124
с соавт. (1959). Например: S. arizonae 38; г; zM (Аг. 16 :;
24:21).
— S. houtenae (IV подрод). Серотип обозначается только фор*-
мулой, а временно существующее название дается и скобках.
Например: S. houtenae 16:Z32: — (**S chameleon). Две-
звездочки указывают на то, что этот серотип принадлежит
к IV подроду согласно hoi генклатуре Кауфмана.
При этом авторы указывали, что в соответствии с договорен-
ностью, принятой на IX Международном конгрессе по микро-
биологии, проходившем в 1966 г. в Москве, вновь выделяемые
серотипы сальмонелл, принадлежащие к подродам 11, III и IV „
не получают названий, а указывают их антигенные формулы.
Серотипы, относящиеся к подроду I, по-прежнему, будут полу-
чать названия, однако рекомендуется придерживаться географи-
ческого принципа, т. е. давать им название страны, города, шта-
та, района и т. д., в которых они были впервые обнаружены.
Представляется, что эта классификация и номенклатура
сальмонелл независимо от того, будут ли внутри рода выделены
виды, серотипы (серовары), является наиболее приемлемой и-
практически удобной.
Можно также отметить, что выпускаемые периодически ВОЗ:
(Референс-центром ВОЗ по сальмонеллам — Институт Пастера,.
Париж) дополненные схемы Кауфмана — Уайта основываются:
именно на этих принципах номенклатуры сальмонелл. Послед-
няя дополненная схема, выпушенная в 1978 г., включает пере-
чень 1889 сероваров сальмонелл, известных па 31 декабря
1977 г. Вместе с тем до сего времени вопрос о классификации и-
номенклатуре сальмонелл остается дискуссионным.
Так, Р. 1?. Edwards и W. Н. Ewing [1972] подразделили род
сальмонелла на 3 вида — S. cholctar vuis, S. typbi и $. enteriti-
dis и предложили для обозначения серотипов (Ser.) и биосеро-
’типов (bioser), входящие в эти виды, следующую сложную си-
стему названий: S. enteritidis ser. Enteritidis; S. enteritidis bio-
ser, Paratyphi C; S. enteritidis ser. Typhimurium и т. д. При этом
два первые вида на серотипы не подразделялись. Эта классифи-
кация была принята подкомитетом по энтеробактериям амери-
канского общества микробиологов н в научной литературе мож-
но встретить такие названия. Согласно «Определителю бакте-
рий Верги» (1974), вопрос о классификации и номенклатуре
сальмонелл по существу также остается окончательно нерешен-
ным и сохраняется прежняя пх классификация, при этом от-
дельные представители рода сальмонелла рассматриваются как
виды или типы. Можно ответить, что двум издавна извест-
ным серотипам присвоены новые названия: S. paratyphi С име-
нуется тепчрь S. hirschfeldii, a S. paratyphi В — S. schottmuel-
leri
В заключение целесообразно коротко остановиться на бакте-
риях, относящихся к подроду III (Arizona), посьо п,ку еще сов-
сем недавно они представляли самостоятельный род семейства
кишечных
125-
Штамм, принадлежащий к группе бактерий, получивших
впоследствии название Arizona, впервые был выделен от боль-
ных рептилий и описан в 1939 г. М. Coldwell и D. Ryerson и
назван первоначально S. dar-es-salaam V. arizona нз-за сходства
с S. dar-es-salaam. Двумя годами позже F. Kauffmann (1941)
изучил штамм, который, хотя и ферментировал лактозу и раз-
жижал желатину, был включен в род сальмонелла, потому что
имел тесное родство с Н-антигенамн некоторых серотипов саль-
монелл и назвал его S. arizona
Со временем все бактерии, подобные этим, были обл ед и ней ы
в одну группу, названную Arizonae.
Р. Edwards с соавт. (1947, 1956, 1959) в результате глубоко-
го изучения антигенной структуры бактерий Arizona была соз-
дана антигенная схема для их серологической идентификации
[Edwards Р., Ewing W., 1962].
В 1963 г., как уже упоминалось, вся эта гр\ ппа вошла в род
Salmonella в качестве подрода III. Включение бактерий Arizona
в род Salmonella по мнению Р. Edwards и М. Gallon (1967), а
также L. Le Minor с соавт. (1970) было оправдано как с науч-
ной, так и с практической точек зрения. Антигенное родство
этих бактерий с сальмонеллами позволяет унифицировать обоз-
начения их антигенных факторов и использовать в большинстве
стучаев одни и те же сыворотки и символы для серологическо-
го типирования [Kauffmann F., Rohde R., 1962; Kauffmann Г'.,
1965; Rohde R., 1967]. Резонность включения бактерий Arizona
в общую схему Кауфмана — Уайта заключается еще и в том,
что это будет способствовать не только их лучшему выявлению,
но и изучению экологии этих бактерий. Несмотря на то что бо-
.лее 30 лет известно, что S. arizonae (бактерии Arizona) широко
распространены среди холоднокровных животных, в частности
рептилий [Hinshaw W. et al., 1944; Edwards P. et al., 1961; Di-
mow Z., Rohde R., 1965; Fife M., Altmann G., 1965, и др.], их
эпидемиологическая роль изучена очень мало, хотя в литературе
и имеются отдельные описания случаев заболевания люден и да-
же вспышек, обусловленных этими бактериями [Murphy W.,
Morris J., 1950; Plowe S. et al., 1968; Sechter L. et al., 1970,
и др.].
Сальмонеллы принадлежат к числу микроорганизмов, широ-
ко распространенных во всех странах мира, при этом одни из
сероваров являются убиквитарными (распространенными повсе-
местно), как например S. typhimurium, тогда как другие скорее
можно рассматривать как локальные, свойственные определен-
ным регионам. Так, S. berta обнаруживается чаще всего в стра-
нах Северной Америки, S. sendai — в странах Дальнего Восто-
ка, S. Uganda и S. wangata — на Африканском континенте,
S. madelia и S. altona — в странах Южной Америки и т. д.
Сальмонеллы являются микроорганизмами, характеризую-
щимися выраженной полипатогенностыо. Подавляющее боль-
шинство известных ныне сероваров патогенны как для человека,
126
так и для различных животных и птиц. Исключение составляют^
лишь S. typhi, S. paratyphi А. и S. paratyphi С, являющиеся воз-1
будителями заболеваний только у людей. Что касается S. рага Д
typhi В, то этот серовар, как известно, также является возбуди-
телем инфекции преимущественно у человека, но может вызы-
вать заболевания и даже эпизютии у молодняка крупного рога-
того скота и цыплят.
Можно также отметить, что некоторые из сальмонелл — так
называемые <хозянн-адаптированные» серовары отличаются
способностью вызывать заболевания преимущественно у опреде-
ленных видов животных: S. dublin — у крупного рогатого скота,
S. cholerae-suis— у свиней, S. abortus-ovis— у овен, S. abortus-
equi — у лошадей: S. gallinaruin — у кур, Однако известно, что
эти же серовары сальмонелл нередко оказываются возбудителя-
ми клинически выраженных форм инфекции не только у других,
видов животных, но и у человека.
Биологические характеристики. Сальмонеллы — мелкие па - /
лочки с закругленными концами от I до 3 ммк длиной и 0,5— I
0,8 ммк шириной, как правило^ подвижные благодаря перитри- I
хиалыю расположенным жгутикам. Некоторые сероварыДЗГда!- I
rinartim^JS. рпПоппп) всегда неподвижны, могут встречаться не-|
подвижные мутанты и среди дру> их*сёрбйаров.
Сальмонеллам присуща относительно выраженная способ-
ность сохраняться во внешней среде, при этом в отдельных объ-
ектах внешней среды (при соответствующей температуре, pH и
влажности) они могут не только длительное время переживать,
но и размножаться. Так, в воде открытых водоемов и питьевой
воде они переживают от 11 до 120 дней, в морской воде — от
15 до 27 дней, в почве — от 1 до 9 мес, в комнатной пыли — от
80 дней до 18 мес, в колбасных изделиях — от 60 до 130 дней,
в замороженном мясе — от 6 до 13 мес, в яйцах — до 13 мес,
в яичном порошке — от 3 до 9 мес, на замороженных овощах и
фруктах — от 2 пел до 2’/j мес и т. д.
Границы температурного режима для роста сальмонелл на-
ходятся между 4 7СС и 4 45°С, при этом оптимальной темпера-
турой является 4 35 °C---137 °C (наиболее короткое время ге-
нерации). Возможность размножения этих бактерий вне указан-
ных границ не исключается, однако интенсивность его значи-
тельно уменьшается. При температуре ниже 4-5сС рост их пол-
ностью прекращается.
Существенное влияние на рост сальмонелл может оказывать
pH среды. Они могут расти при значениях pH не ниже 4,1 и не
выше 9,0, оптимальной концентрацией водородных ионов явля-
ется 6,5—7.5. Рост сальмонелл ограничивается или подавляется
в присутствии высоких концентраций солей или сахаров.
Будучи микроорганизмами, не образующими спор, сальмо-
неллы умеренно устойчивы к воздействию высоких температур.
При 4-57 °C (в жидкой среде) большинство из них погибают
в течение 1, 2, 3 мин. Кипячение убивает сальмонеллы мгновен-
127
но. H.Ng (1968) считает, что клетки физиологически молодых
культур менее терморезистентны, чем находящиеся в стационар-
ной фазе. В то же время даже при очень низких температурах
(—20 °C) сальмонеллы могут длительное время оставаться жиз-
неспособными. Большинство сальмонелл хорошо растет на обыч-
ных питательных средах и не требует специальных рос товых
факторов, образуя небольшие, диаметром 2—4 мм, колонии, од-
нако некоторые серовары (S. abertus-equi, S. typhi-suis, S. abor-
tus-ovis) образуют более мелкие колонии диаметром около
1 мм.
На питательном агаре — колонии прозрачные, нежные, го-
лубоватые; на среде Эндо—„слегка розоватые, прозрачные; на
। среде Плоскнрева — бесцветные, но выглядят более плотными и
I мутноватыми. На ЭМС-агаре сальмонеллы растут в виде проз-
рачных~колонпн, иногда с фиолетовым оттенком. Па чисмут-
сульфнт агаре почти все сальмонеллы образуют черные колонии
| с характерным металлическим блеском, при этом наблюдается
> прокрашивание участка среды под колонией в черный цвет. Ис-
ключение составляют S. paratyphi А и некоторые другие серова-
ры, которые на этой среде образуют светлые, нежные зеленова-
тые колонии. Следует также отметить, что чашки с посевами на
висмут-сульфит агаре необходимо просматривать через 24 и
48 ч, чем достигается более четкая дифференциация колоний.
Большинство сальмонелл аэрогенны, исключение составляют
S. typhi, которые никогда не продуцируют газа. Наряду с’этим
I встречаются анаэрогенные разновидности ТГ других сероваров.
' Так, безгазовые варианты были описаны G. Wagner (1913),
Л. С. Красюк с соавт. (1970) и др.—у S. paratyphi В; В. А. Арбу-
зовой (1960), Е. Г. Ливкиной с соавт. (1965)—у S. parah р-
hi А; Г. М. Френкель (1935) и др — у S. enterilidis; В. А. Арбу-
зовой (1958) —у S. dublin; Л." Г. Гефтор (1947) —у S. newport;
В. А. Арбузовой (1955), В. А. Килессо, Е. И. Выдриной (1959),
Л. П. Юрко (1971) и др. — у S. typhimurium.
Ферментативные свойства сальмонелл разнообразны ие толь-
ко у представителей отдельных подродов, но могут варьировать
jb пределах одного и того же серовара. Они обычно образуют
усероврдород (S. paratyphi А и другие серовары редкоУпнеобд
«,/разуюТ индола.^хотя иногда могут встречаться отдельные cepcl-
Y вары илгГйх разновидности, образующие индол. По данным
F. Kauffmann (1954, 1966), до 1954 г. было известно всего 7 се-
роваров, образующих индол, а к 1965 г. их насчитывалось до
til 30. Они не ферментируют лактозу (за исключением сероваров,
'/ входящих в III подрод) и салицин (исключение составляют
\/сальмонеллы IV подрода), утилизируют цитрат в среде Симон-
са (S. typhi не утилизируют) и вариабельны в ацетатном агаре.
4 Для сальмонелл характерны также ферменты-лиэии. -и лпнй-|
тиндекарбоксилаз и'аргинипдегидролазы, хотя в настоящее вре-'
мя изврсТИБГПГТЪммы S. typhimurium, S. enteritidis v-. ratin и не-
которых других сероваров, обладающие пониженным содержа-
нием фермента лизиндекарбоксилрзы или совсем его не имею-
щие (Рожнова С. Ш., 1976]. Они дают положительную реакцию
с метиловым красным и отрицательную реакцию Фогеса —
Проскауэра, ферментируют глюкозу (с образованием газа) и
маннит, но не ферментируют сахарозу и адонит, хотя известны
случаи выделения штаммов отдельных сероваров, ферментирую-
щих сахарозу (S. newport, S. nieleagiirlis, S. Stanleyville и др.).
Отношение сальмонелл к дульциту, инозиту, ксилозе, пиперину
по Штерну, D-тартрату и некоторым другим субстратам может
быть неодинаковым у одних и тех же сероваров, что позволяет
подразделять их на ряд стабильных биохимических вариантов.
Перечень основных биохимических признаков сальмонелл
представлен в табл. 51, а в табл. 52 приведены основные биохи-
мические реакции отдельных сероваров сальмонелл.
Вариабельность ферментативных признаков сальмонелл, как
уже было отмечено ранее, была положена в основу их подраз-
деления на четыре подрода, дифференцирующие характеристики
которых представлены в табл. 53
Подрод I включает абсолютное большинство известных ныне
сероваров са льмонелл. К подроду II отнесены сравните ni.no ред-
ко встречающиеся серовары сальмонелл, которые отличаются от
представителен I пол рола способностью разжижать желатин и
давать положительную реакцию в тесте с малонатом натрия.
~73альмбнёллы подрода IV в отличие от представите т₽й-двух
предыдущих подродов характеризуются способностью фермен-
тировать салицин и расти в присутствии КС N.
Таблица 51. Биохимические свойства бактерии рода Salmonella
Тесты или субстраты Реакция Тесты или субстраты Реакция
1 2 2
Адонит Арабиноза (Тлицер|пр(по Штерну) ГлИКД'з (газ) Дульцит Инозит Ксилоза Лактола Мальтоза (Мании}) Рамноза (^ахарозу Сорбит Трегалоза Реакция с метиловым красным Реакция Фогеса — Прос- кауэда СПндо.й 4.(4) X + .— X X X , / X 77 -1- + + + Сероводород Мочевина (гидролиз) Жела гни (22 °C) Фейн зяланнндезаминаза Л (пиндекарбоксилаза A pt пницдегидролаза Орин тин декарбоксилаза Глутаминовая кислота Цитрат Симонса Цитрат Кристенсена Ворсщповление нитратов /Ацетар' Малонат Мукат D-Тяртрат 1-Тартрат L-Тартрат В-Галактозилаза KCN Подвижность 1 1 1 + 1 1
У—817
129
Таблица 52. Биохимические свойства сальмонелл некоторых сероваров
Условные обозначения: 4- положительная реакция; — отрицательная Ре-
акция; X — поздно и непостоянно положительная реакция; d — различные типы реакция.
Таблица 53. Характеристика основных ферментативных свойств подродов
сальмонелл
Подроды
Тесты или субстраты I 11 III IV
P-Галактозидаза — — .х + .—
Лактоза — — + .Х —
Маловат натрия — + -1- —
Желатин — + + +
KCN — — —
Дульцит + + —
I алактуроиат — + d— I-
D-Тартрат + —.X —.X -.х
Мукат + + d —
Условные обозначения: + положительная реакция; — отрицательная реак-
ция; X — поздняя н непостоянно положительная реакция; d — различные типы реакций.
Подрод III объединяет большую группу сероваров сальмо-
нелл, ранее выделявшихся в самостоятельный род Arizona и от-
личающихся от входящих в подроды I и IV сероваров способ-
ностью большинства штаммов ферментировать лактозу и мало-
нат. ’
В табл. 54 приведены основные биохимические свойства
сальмонелл, с помощью которых проводят дифференциацию их
с другими энтеробактериями.
Установление биохимических характеристик сальмонелл с
учетом возможных отклонений отдельных из перечисленных
признаков является лишь первым этапом их идентификации,
1.1П
Таблица S4. Осцоаиые дифференциальные признаки сальмонелл ж сходных
антеробактерн*
Тесты или субстраты
0-Гялактозидаза
Иилол^
Сероводород
Гидролиз мочевины
Рост в ирису ic шин KCN
Лизиндекар>..>к< плаза ’
I(итрат
Мядоилт-----------------
Мукат
D-Тартрат
Реакция Фогеса—Нрос-
кауэра
Гидролиз желатина
Фенилаланин
Годы
требующим последующего изучения антигенной структуры выде-
ленных штаммов.
Антигенная структура и серологическая идентификация.
Антигенная структура сальмонелл сложная, а обозначения их
антигенных формул соответствуют набору антигенных факторов,
которые в них обнаруживаются. Так, антиген, содержащийся в
стенке микробной клетки сальмонелл, называется соматическим
или О-антнгеном, а содержащийся в жгутиках — жгутиковым
или П-антигеном. Оба чти антшена имеют четкие характеристи-
ки, основанные на их свойствах.
О антиген сальмонелл расположен на поверхности тела клет-
ки и состоит из фосфо типи чо-иолисахзридных комплексов,
включающих до 60% полисахаридов, 20- 30%— липида и 3,5—
4,5% — гексозамнна.
Основная специфичность О-антигена в серологических реак-
циях обусловлена присут опием на концах полисахаридных це-
почек, формирующих отдельные антигенные факторы, опреде-
ленных полиозидов (дидезоксигексоз). Например, для антиге-
на 9 (группа D) характерен полнозид тивелоза (3-6-дидезокси-
D-манноза); для антигена 4 (группа D) — абеквоза (3-6-диде-
зокси-Э-галактоза); для антигена 2 (группа А)—паратоза
и т. д. Иммунный комплекс О-антигена 12 обусловлен присутст-
вием двух латеральных цепей, на концах которых находится в
одном случае рамноза, в другом — глюкоза.
В соответствии с содержанием тех пли иных О антигенов
сальмонеллы детят на серологические группы, при этом отдель-
ные антигенные факторы обозначаются арабскими цифрами.
9* 131
Как уже указывалось, наличие у сальмонелл Н-антигена свя-
зано с присутствием у микробов жгутиков. Н-антигены сальмо-
нелл могут существовать в двух серологических фазах: первой и
второй (или «специфической» и «неспецифической»).
Антигенные факторы 1-й фазы обозначаются прописными
буквами латинского алфавита, антигены 2-й фазы — арабскими
цифрами или прописными буквами латинского алфавита с араб-
скими цифрами. Сальмонеллы, у которых Н-антиген представ-
лен двумя фазами, называются двухфазными в отличие от мо-
нофазных, имеющих только антигенные факторы 1-й фазы.
Одним из компонентов О-антигена является Vi-антиген. Vi-ан-
тиген является соматическим антигеном, принадлежащим к груп-
пе К-антигенов. A. Felix и R. М. Pitt (1934), впервые открывшие
его у S. typhi, назвали его «антиген вирулентности». Эти иссле-
дователи считали, что этот антиген обусловливает вирулент-
ность возбудителей брюшного тифа, хотя, как теперь доказано,
он не является прямым носителем вирулентности микробов и
может быть обнаружен не только у S. typhi, но и у S. paraty-
phi С и у S. dublin, а также у некоторых других бактерий се-
мейства кишечных (Escherichia, Citrobacter).
Vi-антиген термолабилен. Он полностью разрушается при ки-
пячении в течение 10 мин, частично инактивируется при нагре-
вании при температуре 60 °C в течение часа и под действием фе-
нола, чувствителен к действию соляной кислоты и этанола. Наи-
более полное его развитие происходит при температуре 37 °C.
Vi-антиген — полимер N-ацетиламино-гексуроновой кислоты.
Присутствие его на поверхности тела бактерий препятствует аг-
глютинабельности их в О-сыворотке, т. е. делает бактерии
«О-инагглютинабельными».
Помимо указанных трех основных антигенов, у сальмонелл
известны и другие антигены. К числу их относится М-антиген
(слизистый антиген), обнаруженный F. Kauffmann (1935, 1936)
у слизистых штаммов S. paratyphi В, S. cholerae-suis, S. anatum,
S. dublin и др. М-антиген — кислый полисахарид, его основным
структурным компонентом является коланиковая кислота. Он
нерастворим в воде, разрушается под воздействием кислоты и
этанола и обладает слабыми антигенными свойствами.
Позднее F. Kauffmann (1956, 1957) был описан еще один со-
матический антиген, названный им Т-антигеном (от слова tran-
sient). Первый Т-антиген (Tt) был обнаружен у S. paratyphi В
и S. typhimurium, второй Т-антиген (Т2)—у S. bareilly.
Наконец, специальными исследованиями Л. К. Степановой
(1980) было доказано наличие у ряда сероваров сальмонелл
(S. paratyphi A, S. paratyphi В, S. typhimurium, S. heidelberg,
S. haifa, S. cholerae-suis, S. typhi, S. Stanley, S. anatum и др.)
еще одного поверхностного антигена, названного также К-анти-
геном. Этот антиген представляет собой белково-полисахарид-
ный комплекс, содержит до 60—65% белка и 25—30% углево-
дов, устойчив к воздействию кислоты и этанола и обладает вы-
132
раженными антигенными свойствами, стимулируя синтез специ-
фических К антител в высоких титрах.
Мозаичное «троение антигенов са н.монелл определяется на-
личием вариаций, которые приводя! к некоторым закономерным
изменениям антигенов постоянных сероваров, т. е. у сальмонелл
мы имеем дело не со стабильными антигенными структурами, а
с комплексами антигенов, подверженными внезапным вариа-
циям.
В практической работе знание Tai их вариавий необходимо
для получения однородных результатов и правильной их интер-
претации. У сальмонелл различают несколько видов антигенных
вариаций.
Н -О-вариации — переход пз жгутиковой НО-формы в без-
жгутиковую О-форму. Такой переход встречается ре iko, но поч-
ти всегда необратим. Некоторые серовары сальмонелл (S. galli-
nanini и S. pullorum) существуют только в О-форме.
S—R вариации— переход от гладкой формы (S-форма) к
шероховатой (R-форма), в результате ’«его происходит качест-
венное и количественное изменение (J антигена. ( хшествуют
также формы, промежуточные между гладкими и шероховаты-
ми. которые различаются по морфологии колоний (S-блестящие,
гладкие. R-тусклые с шероховатой пов< рхностью) Однако в не-
которых случаях колонии, которые по серологическим свойствам
относятся к шероховатым, могут иметь вид гладких н, наоборот,
морфоло! нческн шероховатые <|юрмы содержат антигены, при-
сущие гладким колониям. Различно поведение шероховатых и
гладких форм культур в изотоническом растворе хлорида нат-
рия. культуры из R-фпрм колоний выпадают в виде нестойкого
агг потивата, тогда как культуры из S-формы колонии сохраня-
ются вь в «вешенном состоянии. При кипячении в плотническом
растворе хлорида натрия культуры из R формы колоний образу-
ют осадок на дне пробирки, тогда как культуры из S формы ко-
лоний находятся во взвешенном состоянии (равномерная мут-
ность среды).
Во избежание образования шероховатых форм среда для
хранения штаммов не должна содержать углеводов и пересевы
необходимо производить по возможности реже Оптимальными
способами сохранения культур в S-форме являются: использова-
ние яичной среды (среди Дорсе) или высушивание в вакууме.
Вариации формы — О-варвацин и V—W вариации — количе-
ственные изменения соматических антигенов сальмонелл.
О-варпациями называют количественные изменения О-анти-
гена. Наиболее часто изменениям подвергаются О антигены 1, 6
н 12. Вариации, касающиеся О-антигена 1 (присутствие или от-
сутствие его), связаны с лнзогенизацией культуры [Iseki S.,
Kashiwaei К., 1955, 1957; Stocker В., 1959, и др ] и встречаются
у сероваров тех серологических групго, которым этот антигенный
фактор присущ (главным обвозом групп Л. В и D). Состояние
лнзогенности, вызванное нн«|>екцией конвертирующим фагом,
133
обусловливает присутствие О-антигена 1, который сохраняется
до тех пор, пока микроб остается лизогенным. При утрате лизо-
генности выявить этот антиген не удается. Следует также отме-
тить, что присутствие или отсутствие антигенного фактора 1 в
штаммах указанных групп1 не изменяет названия серовара.
В противоположность этому изменения, возникающие в О ан-
тигенах сальмонелл группы Е при их лизогенизапии, впекут за
собой изменения в названиях сероваров. Так, J. Iseki, Т. Sakai
(1953) с помощью конвертирующего фага (ets), присущего всем
сальмонеллам группы Е2, осуществили замену О-антигена груп-
пы Et (3, 10) на О-антиген группы Е2 (3, 15). Иначе говоря,
S. anatum была превращена в S. newington. Об осуществлении
с помощью лизогенной конверсии передачи различных антигенов
в пределах O-fpynn Е], Е2 и Е4 сообщали также S. Iseki, Т. Sa-
kai (1954) Н. Fukumi с соавт. (1955) и Н. Uetako с соавт.
(1955).
Тот же самый феномен фаговой конверсии лежит в основе
изменений в штаммах группы С, содержащих О-антиген 61 (пар-
циальный антиген комплексного антигена 6). N. Escobar и
Р. Edwards (1964) показали, что сальмонеллы, имевшие О-анти-
гены 6. 7, несли фаг, способный конвертировать О-антигены 62, 7
в 61, 7.
Что касается О-антигена 12. являющегося комплексным ан-
тигеном, состоящим из трех фракций: 12|, 122 и 123, то измене-
ниям подвергается только одна фракция О-антигена 122, что
•также связано с лизогенностью бактерий.
V—W-вариации (или Vi-вариации) касаются только Vi-анти-
гена, содержание которого в культурах может варьировать. Со-
ответственно количеству его в культурах S. typhi последние
можно подразделить на три группы:
V-форма — содержит Vi-антиген в большом количестве и яв-
ляется О-инагглютинабельной;
W-форма — не имеет Vi-антигена и является О-агглютина-
бельной;
VW-форма — промежуточная, она содержит Vi-антиген и тем
не менее является О-агглюгинабельной.
Большинство штаммов S. typhi содержит Vi-антиген, особен-
но развит он в свежевыделенных штаммах и в культурах, выра-
щиваемых при температуре 37 °C.
Вариации фазы (Н-вариации) — определенные качественные
изменения жгутиковых антигенов, в результате чего отделы ые
антигенные комплексы, входящие в 1-ю («специфическую») и
2-ю («неспецифическую») фазы, могут присутствовать или от-
сутствовать. В зависимости от структуры Н-антигена различают
монофазные серовары, существующие только в одной фазе, и
дифазные, у которых присутствуют одновременно обе фазы, хо-
тя в популяции последних удается обнаруживать как моно-, так
и дифазные особи. У некоторых сероваров сальмонелл Н-анти-
ген представлен только одной (1-й или 2-й) фазой: S. typhi
134
группы D (9, 12, Vi : d:—); S. IV Argentina группы Ci (6, 7 :
: Z3e: ); S. IV chameleon группы I (16:74, Z32 —);
S. IV seniinole группы R (1, 40 : g, Z5| :—); S. II группы G2
(13, 23: :1, 6); S. II группы R (40 —: 1,7); S. II группы S
(42: —: 1, 6) и др. Известны также постоянные варианты неко-
торых двухфазных сероваров, у которых 1-я фаза не выявляет-
ся. Например. S. cholrrae-suis v. kunzendorf (6,7 : —1,5) отлича-
ется от S. cholerae-suis (6, 7 : с : 1, 5) отсутствием антигена «с»-
в 1-й фазе.
Помимо указанных, естественно образующихся фаз, у саль-
монелл может возникать третья, так называемая индуцирован-
ная фаза, встречающаяся в штаммах при культивировании их в
средах, содержащих гомологичную индуцированной фа >е Н-сы-
воротку. В таких фазах обычные ll-антигены могут быть полно-
стью или частично утрачены и заменены новыми Н антигенами.
Фаза 3 может встречаться и в естественных условиях. Так,
Р. Endrewes и Л. Moran (1916) выявили индуцированную пли
«наведенную» фазу (Z23) у S. minnesota не только в экспери-
ментальных условиях, но и у свежевыделенных из организма
штаммов.
Подтверждением того, что антигенные рекомбинации у саль-
монелл могут встречаться и в естественных условиях, служат
факты виде пения штаммов с необычной и сложной антигенной
структурой. Так, Р. Endrewes и D. Bruner (1942) описали S. sa-
linatis, которая обладала очень сложным 11-антигеном и имела
комплекс «d» в обеих фазах (4, 12 : d, е, h : d, е, n, Zjs). J. Tay-
lor с соавт. (1960) сообщили о своеобразном типе вариаций
Н-антигсня v S. senltenberg (1, 3, 19: g, s, t), у которой перио-
дически обнаруживали присутствие еще одного из четырех
Н-аптн1 енов (z27, z43, z4g или z4e), способных спонтанно утрачи-
ваться. Сходные культуры, обладающие тремя пли четырьмя ре-
вертирующими Н-фазами, были описаны Р. Edwards с соавт.
(1962), G. Douglas и Р. Edwards (1963), A. Me Whorter с соавт.
(1961) и др. Однако следует отметить, что упоминавшиеся анти-
генные вариации (хотя и не следует упускать из виду) ни в
коей мерс нс служат препятствием пи для повседневной бакте-
риологической практики, ни для эпидемиологических заключе-
ний. так как в естественных условиях они встречаются очень
редко.
Следует напомнить также, что сальмонеллы могут иметь.об-
щие антигены не только в пределах их от тельных О- групп, но и
с представителями других родов семейства энтеробактерий.
(Esi berichia, Stiigella.~Citrobacler, Klebsiella И-ДГ-1, нто необхо-
диЫо иметь в виду при идентификации сальмонеллТу
‘ Несмотря на всеска iaintoeo мотайчши и ангигенной структу-
ры сальмонелл и вариабельности последней, при серологической
идентификации этих бактерий во внимание принимаются лишь
три основных антигена (О, П и Vi). Именно этот принцип поло-
жен в основу диагностической антигенной схемы Кауфмана —
135
Уайта, представляющей собой по существу каталог антигенов,
имеющих первостепенную диагностическую ценность. В соответ-
ствии со структурой О-антпгенов сальмонеллы распределяются
на О-группы, объединяющие большее или меньшее число серова-
ров, аранжированных в пределах групп в алфавитном порядке
обозначении их Н-антигенов (1-й фазы). Последняя схема
Кауфмана — Уайта, изданная международным центром ВОЗ по
сальмонеллам в 1978 г., включает 50 О-групп, объединяющих
1889 сероваров сальмонелл. Приводимая ниже схема Кауфма-
на— Уайта (табл. 55) представлена в сокращенном виде и
включает главным образом серовары сальмонелл, выделявшиеся
в последнее десятилетие в СССР.
Серологическая идентификация (определение сероваров)
сальмонелл начинается с изучения выделенной культуры в реак-
ции агглютинации на стекле с поливалентной адсорбированной
О-сывороткой к сальмонеллам групп ABODE. При отсутствии
реакции культуру испытывают с поливалентной сывороткой,
включающей антитела к антигенам сальмонелл редких групп
(И, 13, 14, 16, 17, 23 и др.). При получении положительного ре-
зультата с поливалентной сывороткой ABODE культуру
испытывают с отдельными О-сыворотками для определения при-
надлежности ее к одной нз О-групп в соответствии со схемой
Кауфмана—Уайта. После установления принадлежности куль-
туры к какой-либо О-группе (А, В, С, D, Е) определяют полную
структуру ее О-антигенов, а затем испытывают культуру с моно-
рецепторными Н-сыворотками. Исследование начинают с Н-сьь
вороток, содержащих антитела к антигенам 1-й фазы наиболее
распространенных в данной местности сероваров сальмонелл.
После определения Н-антигена 1-й фазы переходят к определе-
нию антигенных компонентов 2-й фазы и таким образом уста-
навливают антигенную формулу (серовар) выделенной культу-
ры. Для установления антигенной формулы некоторых серова-
ров нз группы Ci и Di необходимо проводить испытание культу-
ры с Vi-сывороткой с целью выявления Vi-антигена (S. typhi,
S. dublin и S. paratyphi С).
Для агглютинации с' О-сывороткой следует брать верхнюю
часть выросшей культуры на скошенном агаре, а для агглюти-
нации с Н-сыворотками — из конденсата или из самой нижней
части (наиболее подвижные особи). При отсутствии четкой
реакции агглютинации с О-сывороткой рекомендуют повторные
(4—5) пассажи культуры на 10% желчном бульоне и скошен-
ном агаре, после чего проводят рассев ее в чашку со слабоще-
лочным агаром с последующим отбором отдельных колоний и
их испытанием в реакции агглютинации.
При серологической идентификации культур возможны труд-
ности в выявлении Н-антигена или одной из его фаз, что может
быть связано с угнетением или утоатой Н-янтигена (утрата под-
вижности), либо с преобладанием в популяции особей с преиму-
щественным содержанием какой-либо одной фазы, с отсутствием
136
Таблица 55. Схема Кауфмана — Уайта (сокращенная). Антигенные фор-
мулы Salmonella
Серовар Соматический антиген (О) Ж«утикоячЛ антиген (Н>
фаза t фаза 2
Группа А (02)
S. paratyphi Л S. kiel 1. 1. 2, 12 2, 12 «Л (L5)
Труп па В (04)
S. kisangani S. hessarek S. fnlica S. arechavaleta S. bispebjerg S. abortusequi S. tinda S. paratyphi В (S. schoUnnielleri) S. java S. limete S. Canada S. uppsala S. II sofia S. ahony S. aborttisbovis S. wagenia S. schleissheim S. wien S. legon S. abortusovis S. allendoi t S. bury S. Stanley S. schwarzengrund S. duisburg S. salinatis S. sainlpaul S. reading S. kaapstad S. Chester S. san-diego _S derby S. agona S. essen S. II. caledon S. halo S. California S. kingston - S. budapest S. banana S. typhlinurluin S. lagoa S. agamn S. gloiiepsler S. le tas S. fyris • 1, 4, 4. 1. 1, 4, u 1. 1. 1. 4, 4. 1. 1. 1. 1. 4. 1. 1. 4, 4, 4, 1. 1. 1. 4. 1. 1. 1, 1. 1, 1. 1. 4, 1. 4, 4, 1. 1. 4, 1. 1, 4. I. 4, 4. 4, (5), 12 12, 27 (5). 12 (5), 12 4. (5), 12 12 4, 12. 27 4, (5), 12 4, (5), 12 4, 12, 27 12 12, 27 4. 12, 27 4, (5), 12, 4, 12, 27 4, 12, 27 12, 27 4, 12, 27 4, 12, 27 12 12, 27 12, 27 4, (5), 12, 4, 12, 27 4, 12, 27 12 4. (5), 12 4. (5), 12 12 4. (5). 12 (5). 12 4 (5), 12 4, 12 12 4, 12, 27 (5). 12 12 4. (5), 12, 4. 12. 27 (5). 12 4. (51. 12 4, 5), 12 12 4. 12. 27 (5). 12 5, 12 27 27 27 a a a a a a b b b b b b b b b b b c c c c d d d d, e, h e, h e, li e, h e, h e, h f. 8 f. g. s g. m g. m, (s), t g. m. s g. >n, t g. s, t g. t nt, t I 1 1 i k 1. v 1,2 1,5 1.5 1,7 e, n, x e, n, x e. n, zis 1,2 (1.2) 1,5 1,6 1,7 (e, n, x) e, n, x e, n, x e n, z18 1, w 1.5 1,6 1,7 1.2 1.7 e, n, z1B d, e, n, z1B 1,2 1.5 1,7 e, n, x e, n, z1B (K2) e, n. x (i?2) i?5 1.2 1,5 1.6 1, w e, n. z1B 1.2
137
Продолжение табл. 55
Соматический Жгутиковый антиген (И)
Серовар
антиген (О) фаза 1 фаза 2

S. azteca 4,(5).12,27 1, V 1,5
S. bredeney 1,4,12,27 1, V 1. V 1 »7
S. kimuenza 1.4.12,27 e, n, x
S. brandenburg 1,4,12 1, v 1. ". zl5
S. logo 4,12 1, w 1 »6
S. vein 1,4,12,27 е. zI3, z2R I, ", Z1B
S. kunduchi 1.4,(5),12,27 е, z13> z23 1.2
S. heidelberg 1,4,(5),12 Г 1,2
S. bradford 4,12,27 г 1,5
S. remo 1,4,12,27 г 1.7
S. Southampton 1,4,12,27 г z«
S. africana 4,12 г, i 1. w
S. coeln 4, (5),12 У 1.2
S. teddington 1,4,12,27 У 1.7
S. ball 1,4,(5),12,27 У e, n, x
S. jos 1,4,12,27 У e, n. z(S
S. shubra 4,(5),12 Z 1,2
S. kiambu 4,12 Z 1,5
S. Indiana 1,4.12 Z 1.7
S. preston 1,4,12 Z 1, w
S. entebbe 1,4,12,27 Z , 7e
S. II nordenham 1,4,12,27 Z e. n, x
S. Stanleyville 1,4,(5),12,27 z4» zia (1.2)
S. kalamtt 4,12 z4- Zs4 (1,5)
S. haifa 1,4,(5),12 Z10 1.2
S. ituri 1,4,12 Z10 1,5
S. fortune 1,4,12,27 ZI0 z«
S. brancaster 1.4,12,27 Z2B —
Гр ynna C| (Об, 7)
S. san-juan 6.7 a 1.5
S. austin 6.7 a 1,7
S. denver 6,7 a e, ", zIB
S. brazzaville 6,7 b 1,2
S. edinburg 6,7 b 1.5
S. georgia 6,7 b e, n, ztg
S leopoldville 6,7 b z«
S, .paratyphi C “ 3. ChOlffitestfis 6,7(vi) 6,7 c (c) 1.5 1.5
STlyphisuis ' 6,7 1.5
S. birkenhead 6,7 c 1.6
S. isangi 6,7 d 1.5
S. amersfoort 6,7 d e, n, x
S. gombe 6,7 d e, n. ztB
S. livingstone 6,7 d 1, w
S. larochelle 6,7 e, h 1.2
S. lomita 6,7 e, h 1.5
S. norwich 6,7 e, h 1.6
S. braenderup 6,7 e, h e, n, zJ5 (1.2.7)
S. montevideo 6.7 g, m, (P). s
S. menston 6,7 g, s. t (1.6)
S. haelsingborg 6,7 m, p, t, (u)
S. Oranienburg 6.7 m, t —
138
Продолжение табл. 55
Сомлтнп*»ск1тП aiiuiiPH (O) Жгутиковый антиген (H)
Ссропар t фаза 2
S. norlon S. tliompson S. daylona S. Singapore S. concord S. iriiinu S. bonn S. potsdam S. Colorado S. nessziona S. kenya S. virchow S. infant's S. nigeria S. cojindale S. papuana S. richmond S. bareilly S. galow S. inikawasima S. II losaninnga S. eaquatoria S. inganda S. esclnveiler S. djngu S. tennessce S. Ill arizonae 6,7 6.7 6,7 0.7 6,7 6,7 6,7 6.7 6,7 6.7 6.7 6.7 6,7 6.7 6.7 6.7 6,7 6.7 6,7 6.7 6,7 6,7 6,7 6,7 6,7 6,7 6,7 i k k k 1. v 1. V 1. V J, V 1, W J. bl *» 7f3 г г г г г У У У У Z Z4> 72Т ZfO Zln Z3 9 1, w 1,6 1.6 е, п, х 1.2 1,5 е, п, х е. п, z16 1,5 1.5 е, п, х 1,2 1.5 1,6 1,7 е, n, zie 1,2 1,5 1,7 е, n, z1B 1,5 е. п, 1,5 1,6 е, и, х 1,6
Группа С2 (06, 8)
S. сигасао 6,8 a 1,6 1,7 e, n, x
S. nordnlcr 6,8 a
S. narashino 6.8 a
S. па goy а 6,8 b 1,5
S. galnni 6,8 b e, n x
S. banalia S. wingrove 6,8 6,8 b c ze 1,2 1,5 1,6 e, n, x 1.2 1,5 e n x
S. tilah 6.8 c
S. bronx 6.8 c
S. belcin S. iniiciichcn 6,8 6,8 c n
S. Manhattan 6.8 d
S. sterrenbos 6.8 d
S. berston 6.8 d e, n,’zls 1,2 1,5
S. newport 6,8 et h
S. koltbns 6,8 11
S. tshiongwe 6.8 e, h P D 7--
S. sandow S. chincol S II baragwanath 6.8 6,8 6.8 1, H g, in, s Ш, t c> '-IB e. n, zis (e. n, x) 1.5
S. П germiston 6 8 in, t p *1 V
S. lindenbiirg S. takoradi 6,8 6,8 6.8 6,8 i i 1,2 1,5 e, n, x e, n, zie
S. bonariensis S. aba I i i
139
Продолжение табл. 55
* Серовар Соматический антиген (О) Жгутиковый аитигеи (H)
фаза 1 фаза S
S. blockley 6,8 k 1.6
S. Charlottenburg 6,8 k e, n, Zl4
S. litchfield 6,8 1. V 1.2
S. loanda 6.8 1. V 1.5
S. manchester 6,8 1. V 1,7
S. edmonton 6,8 1. V e, n, z14
S. fayed 6,8 1, w 1.2
S. bovismorbificans 6,8 r 1.5
S. hidalgo 6,6 r e. n, zt4
S. tananarlve 6,8 У 1.5
S. praha 6,8 У e, n. zw
S. kuru 6,8 z 1. w
S. chailey 6,8 z4> zas e. n, zu
S. duesseldorf 6,8 z4. z14
S. tallahassee 6,8 z4> zM —
S. mapo 6,8 z10 1.5
S. hadar 6.8 zl< e, л. x
S. giostrup 6,8 Z10 e. n, zlt
Группа С» (08)
S. shipley 8,20 b e, n, z1B
S. Virginia 8 d 1.2
S. labadi 8,20 d Ze
S. cmck 8,20 g. ni, s
S. Kentucky 8,20 i z.
S. amherstiana 8 1. V 1.6
S. hindmarsh ‘ 8,20 ’• г 1.5
S. aitona 8,20 Г. (!) ze
S. alagbon 8 У 1.7
S. corvallis 8,20 (z,)
S. albany 8,20 Z4,
S. molade 8,20 ZR
S. tamale 8,20 (e. n,zIS)
Группа Ci (06, 7, 14)
S. kadtina 6.7,14 c e, n. Zi*
S. eimsbuettel 6,7,14 d 1, w
S. gelsenkirchen 6,7.14 1. V z-
Группа D| (09, 12)
S. sendai 1,9,12 a 1.5
S. miami 1.9,12 a 1,5
S. onarimon 1.9,12 b 1.2
S. frintrop 1.9,12 b 1,5
S. alahama 9,12 c e, n, zie
S. typhi 9,12,(vl) d
S. ndolo 9,12 d 1 5
S. eastbourne 1.9,12 e. h 1 5
$. berta 1.9J2 f. g. t
S. enteritidis g.m .(1,7)
=*5; 1,9,12 —ЙГЖ'Ч’
—S~dubiuL— S. rostock 1,9,1.2,(yj) 1 x.nr^ . JL P и. , P. U
140
ГТродо.1 табл. 55
Сероаяр Соматический антиген (О) ЖгутнкоаыЯ антиген (Н)
фаза 1 фаза 2
S. tnoscow 9,12 е. ч —
S. pensacola 1.9.12 m, t —
S. serembin 9,12 1 1.5
S. claibornei 1.9.12 к 1.5
S. mendoza 1,9.12 1. V 1,2
S. panama 1.9,12 1. V 1.5
S. kapemba 9,12 1. V 1.7
S. II dare^salaam 1.9,12 1, W е. п, х
S Javiana 1.9,12 1. 7И 1.5
S. Jamaica 9,12 г 1.5
S. lawndale 1.9.12 г 1,5
S. angolr 1.9,12 г ze
S. wangafa 1.9,12 z4. 7аз (1,7)
S por'land 9,12 1.5
S. gailitiariim (pullorum) 1.9.12 —
Группа Di (09, 46)
S. baildon 9.16 а е, п, х
S. A'ernipcrode 9,16 1, g
S. irnha 9.16 1, V 1,5
S. shoredilch 16 г е. п.
S. II Inarlcni 9.16 Z е, и, х
S. Jishabi 9,16 zl0 1.7
Группа D3 [01, 9. 12(46), 27]
S. zuerich 1.9,12(46),27 С 1 zs»
Группа E| (03, 10)
S. oxluid 3.10 а 1.7 1 5
S. butanlan 3,10 ь
S. huvudsla 3,10 ь 1.7
S. okefoko 3,10
S. sbanp mi 3.10 <1 1.5
S. v<j|p 3,10 е, h 1 2
S. nmenster 3,10 е, h 1,5 1.6 1.7
S anatum 3.10 е, h
S. n\lx a 3,10 •< li
S. newlands 3.10 е, h
S. meleagridis 3,10 е. h 1. w
S amsferdain 3.10 g, ГП, 8
S Westhampton 3.10 Ё. s.' t i к
S. falkrn^pe S. Zanzibar 3.10 3.10 в, л, г1в
S nchanga 3,10 1. V I 2
S. sinstorf 3,10 1. V 1. V 1. V 1 *5
S. london S. give 3.10 3.10 1.6 1.7
S. rusisi S. Uganda 3,10 3,10 1. V е. п. z„
S. II we (park 3.1*) *is 1. zas
S. seegcfeld 3 .0
S elisabelhville S. slmi S. weltevreden 3J0 3,10 3,10 г» 1 г г г 1.7 е, n. z„ Ч
141
Продолжение табл. 55
Серовар Соматический антиген (О) Жгутиковый антиген (Н)
фаза I фаза 2
S. amager 3,10 V 1,2
S orion 3,10 у 1.5
S. bolton 3,10 у e, n. Zjs
S. Stockholm 3,10 у 7»
S. finchley 3,10 Z e, n, x
S. adabraka 3,10 (1.7)
S. okerara 3,10 Z10 1.2
S. lexington 3,10 zw 1.5
S. coquilhatville 3,10 1.7
S. kristianstad 3,10 zw e, n, z1B,
Группа Ej (03, 15)
S. newington 3,15 е, h 1.6
S. selandia 3.15 е, h 1.7
S. Portsmouth 3,15 1. v 1.6
S. newbrunswick 3,15 1. V 1.7
S, kinshasa 3,15 1, z!3 1.6
S. binza 3,15 У 1.5
Труп па Ез (ОЗ, 15, 34)
S. minneapolis 3,15,34 е, h 1.6
S. thomasville 3,15,34 у 1,5
S. Illinois 3,15,34 1.5
S. harrisonburg 3,15,34 Z10 1.6
Группа E« (Ol, 3, 19)
S. accra 1.3,19 b Ze
S. ahmadi 1.3,19 d 1.5
S. taksony 1,3,19 i ze
S. bedford 1.3,19 e, n, zIB
S. schoeneberg 1.3,19 z e, n, z1B
S. dessau (1),3,15,19 g. S, t
S. cannonhill (1).3,15,(19) У e, n. x
Группа F (011)
S. marseille 11 a 1.5
S.chandans 11 d e, n, x
S. chingola 11 e, h 1,2
S. aberdeen 11 1 1.2
S. veneziana 11 fl e, n, x
S. abaetetuba 11 k 1.5
S. kisarawe It k e.’n, x, (z1B)
S. Ill arizonae 11 k
S. maracaibo 11 1. vi *25 1 ,5
S. senega! 11 г 1*5
S. rubislaw 11 г c П, X
S. wentworth 11 Ztft' 1.2
S. Icne 11 Ю Z28
142
Продолжение табл. 55
Серовар Соматический антиген (О) Жгутиковый антиген (Н)
фаза 1 фаза 2
Группа GI (Q13, 22)
S. mar liall 13,22 а 1> z13, ZJ8
S. ibadan 13,22 ь 1,5
S. friedenut 1 ‘,22 d 1,6
S. bron 13,22 g m (e. n, zjj) 1,6
S. poona 1,13,22 z
S. bristol 13,22 z 1 »7
S. Tanzania 1,13,22 z e, n, z18 1.5
S. roodepoort 1,13,22 4o
S. II difton 13,22 4r 1,5
S. leiden 13,22 4s —
Группа G» (013, 23)
S. atlanta 13,23 b —.
S. diirhatn 13,23 b e, n, zie
S. II 13,23 d e, n, x
S. wortlnngton 1.13,23 z 1, w
S. ajiobu 13,2* z4. 4» —
S. Ill arisonae 1,13,23 4- 44 —
5 cubana 1,13.23 4. (Z3?)
S. (anti 13.2.1 4b
Группа Н (06. 14)
S. minna 1.6.14,25 c 1. w
S. heves 6,14,24 d 1.5
S. charity 1.6.14.25 d e, n. x
S. onderMk-poort 1,6.14.(25) e, h 1.5
S. aracas (I),6.14,(25) g. m. s —
S. II emmerich 6,14 (m, I) e, n, x
S. buzu 1.6.14,25 I 1,7
S. II 6.14 k (e. n, x)
S. HI arizonae 6,14 k z
S. boe ker (1).6,14,(25) 1. V 1.7
S. horshain 1.6,14.(25) I, v e, n, x
S. carrau 6,14,21 У 1,7
S. madelia 1,6,14.25 У 1,7
S. stindsvall 1,6.14,25 z e, n, x
S. IV 6,14 z4> 4» —-
S. HI arisonae (6).14 4o (z):(zM)
Группа I (016)
S. hannover 16 a 1,2
S. anninigun 16 a 1.6
S. oldonburg 16 d 1.2
S. gaminara 16 d 1.7
S. nottingham 16 d e, 4»
S. weston 16 e, h 4
S. orientalis 16 k e, n, zl5
S. shanghai 16 1. v 1,6
S. welikade 16 I. v 1.7
S. saphra 16 у 1.5
S. II haddon 16 z4- 4» —-
S. Ill arizonae 16 4b 4s
143
Продолжение табл. 55
Серовар Соматический антиген (О) Жгутиковый антиген (Н)
фаза 1 фаза 2
Группа J (017)
S. kinondoni 17 a e, n, x
S. kirkee 17 b 1.2
S. II hillbrow 17 b e, n. x, zIb
S. berlin 17 d 1,5
S. II verity 17 1, n, x. ztB 1,6
S. II bleadon 17 (D. g. t (e, n, x, zlb)
S. Ill arizonae 17 r z
Группа К (018)
S. usumbura 18 d 1,7
S memphis 18 k 1,5
S. HI arisotlae 18 r z
S. II 18 У e, n, x, z1B
S. blukwa 18 z4> z24 —
Группа L (021)
S assen 21 a (1.5)
S. minnesota 21 b e, n, x
S. spartel 21 d 1,5
S. magwa 21 d e, n, x
S. good 21 I. g e, n, x
S III arizonae 21 g. Z51 -—•
S. ruiru 21 У e, n, x
S. II gwaai 21 z4>z:4 —
Группа M (028)
S. dakar 28 a 1.6
S. halle , 28 c 1,7
E. mundonobo 28 d 1,7
S. patience 28 d e, n, zlb
S. опа 1 28 g, S, t —
S. ilala 28 k 1.5
S. taunton 28 k e, n, x
S. nashua 28 1, v e, n. zIB,
S. telaviv ( 28 У e, n. z1&
S. II ceres 28 z z3»
S III arizonae 28 Zl0 for)
S. umbilo 28 Z10 e, n, x
S. moroto 28 z10 1, w
Группа N (030)
S. zehlendorf 30 a 1,6
S. urban» 30 , b e, n, x
S. II 30 ' c Z30
S. godesberg 30 g. m ——
S. morehead 30 i 1,5
S. soerenga 30 i 1. w
S. aqua 30 k 1.6
S. angoda 30 k e, n, x
S. donna 30 1. v 1,5
S. morocco 30 1. Z1J. ZH e, n, г1В
144
Продолжение табл. 55
Серовар Соматический антиген <O) ЖгутяеппмЛ яятнген (Н)
фаза 1 фаза 2
S. gege 30 Г 1,5
S. bodjonegoro 30 z4. 44 —
S aragtia Г Г 30 > у п п a О (035) Чв
S. tchad 35 Ь —
S. adclaide 35 f. g —
S. ealing 35 g, m. s —
S. agodi 35 g. t 1 —
S. gamhia 35 e, n, zt>
S. Ill arizonae 35 k z43
S HI arizonae 35 ZB1 1,5,7
Группа P (038)
S. Sheffield 38 c 1,5
S. II carletonville 38 d (1,5)
S. kasenyi 38 e, h 1,5
S. korovi 38 g. m, s —
S. Il fouipoinle 38 g. t —
S. ingtilani 38 1 1,2
S. lansing 38 I 1,5
S. Inverness 38 k 1,6
S. HI arizonae 38 (k) z»s
S. roan 38 1. v e, n. x
S. Colombo 38 У 1,6
S. IV 38 Zj, z„ —
S. HI arizonae 38 z47 Z»S
Группа Q (039)
S. Wandsworth 39 b 1,2
S. II 39 c e, n, z,
S. anfo 39 У 1.2
Группа R (040)
S. riogrande 40 b 1.5
S Johannesburg 1,40 b e, n, x
S. II 1,40 c Z31
S. II boksburg 40 g, m, s. t k e, n, x 1,6
S. allandaie 1,40
S. II sunnydale 1,40 It », n. x, zit
S, milleel 1,40 1. V 1.2
S. HI arizonae 40 «4. Z»4 ——
S. degania 40 *4< *14 41
Группа S (041)
S Vietnam 41 b (Z.)
S. egusi 41 d (1,5)
S. lethe 41 g. t
S. 11 dubrovnik 41 z 1,5
S. waycross 41 z4. 4« —
S. ipswich 41 z4» ZH 1,5
S. Il negev 41 Z1B 1,2
10—817
145
Продолжение ,абл. 55
Серовар Соматический антиген (О) Жгутиковый антиген (Н)
фаза 1 фаза 2
S. landala 41 Z10 1.6
S. inpraw 41 zie е, п, х
S. offa 41 z»« ——
Группа Т (042)
S. faji 1.42 a e. и, г,»
S. antwerpen 1,42 c e. n. zIB
S. Ill arizonae 42 1, v z33
S. 11 detroit 42 z 1.5
S. II 42 4 1.6
S. loenga 1.42 z10 z«
S. weslaco 42 Z3« —
Группа U (043)
S. berkeley 43 a 1.5
S. miiwaukee 43 f. g —
S. mbao 43 i 1.2
S. ahuza 43 k 1.5
S. kingabwa 43 У 1.5
S. IV houten 43 z4- z13 —
S. irigny 43 zse —
Группа V (044)
S. niarembe 44 a 1, w
S. kermel 44 d e, n, x
S. gamaba 44 g. m, s —
S. christiansborg 44 z4. z34 —
S. guinea 44 ZIO (M)
S. IV 44 z»«> (Z3«)
Группа W (045)
S. dewersoir 45 c e, n, x
S. dugbe 45 d 1.6
S. suelldorf 45 f. g —
S. Ill arizonae 45 g. ZM —
S. II 45 Z3» 1.5
Группа X (047)
S. II bilthoven 47 a (h5)
S. saka 47 b
S. stellingcn 47 d e, n, x
S. II quimbamba 47 d z3»
S. luke 1.47 g. m
S. bergen 47 i e. n. zlg
S. lyon 47 k e. n. z1B
S. teshie 1.47 I. zl». zM e. n, zw
S. moualine 47 У 1.6
S. kaolack 47 z 1.6
146
Продолжение табл. 55
Жгутиковый антиген (II)
Соматический
Серовар фаэа 1 фаза 2
антиген (О)
Группа Y (048)
S. II hagenbeck 48 d ч
S. hamtnonia 48 е, п, х, Z|B ч
S. Ill arizonae 48 1 Z
S. dahlem 48 к е, п, z14
S. djakarta 48 Ц. Ч« *—
S. IV 48 Ч.. Ч. —
Группа Z (050)
S. 11 krtigersdorp 50 е. п, х 1,7
S. IV wassenaar 50 К, Чг —
S. Ill arizonae 50 т 1,5(7?
S. dougi 50 У 1,6
Группа 051
S. tione 51 а е, п» х
S. IV harmeln 51 —
S. II 51 г» е, п, х, zl5
группа 052
S lloltbek 52 b е, п, х
S. utrecht 52 d 1,5
S. saintemarie 52 8. * —.
S. Ill arizonae 52 1, v Чз
Группа 053
S. Ill arizonae 53 г Z
S. Ill 53 7Ь 2М
S. II humber 53 Ч, —
Группа 054
S tonev 21,54 b е, п, х
S. uccle 3,54 8. 8, 1
S, steinwerder 3,15.54 У 1,5
Группа 055,
S. II tranoroa 55 Группа 056 1 к 1 z39
S. II artis 5G b 1
S. II 56 zia е, п, х
S. Ill arizonae 56 Ча —
Группа 057
S. anlonio 1 57 1 а 1 ze
S. Ill arizonae 57 I
S. II locarno 1 57 1 Ча 1 Ча
Группа 058
S. II 58 а (z,)
S. II 58 с
S. II basel 58 1,5
S. Ill arizonae 58 Г Z
10*
147
Продолжение табл. 55
Серовар w Соматический ан- тиген (О) Жгутиковый акткгеи (Н)
фаза 1 фаза 2
Группа 059
S. 11 betioky 59 .k (z)
S. Ill arizonae 59 I. V | z
S. HI arizonae 59 zi« 1
Группа 060
S. Ill arizonae 60 k 1
S. II luton 60 « e, n, x
S. Ill arizonae 60 z»i Z»1
Группа 061
S. Ill arizonae 61 с 41
S. Ill arizonae 61 г 1/5,7
S. Ill arizonae 61 ZS1 z
Группа 062
S. HI arizonae G2 С. zBI —
S. Ill arizonae (2 • z«. ZM —
S. Ill arizonae 62 z4» 7за —
Группа 063
S. Ill arizonae 63 8. zm —
S. Ill arizonae 63 z4> Z,1 —
S. Ill arizonae 63 z»« —
Группа 065
S. Ill arizonae 65 c 15,7
S. Ill arizonae 65 (k) Z41
S. Ill arizonae 65 z>i z«
Группа 066
D. maregrosso 66 1 ^5
S. brookfield 66 1 Z41
Группа 067
S. crossness 67 1 ' 1.2
Примечание. I. Римские цифры (II, III, IV) после родового названия (S) ука-
зывают на принадлежность серовара к соответствующему подроду.
2. ( )—означает, что данный антигенный комплекс может отсутствовать.
1-й фазы Н-антигена (S. cholerae-suis v. kunzendorf и др.) или
полным отсутствием Н-антигена (S. gallinarum и S. pullorum),
о чем было сказано ранее. Для выявления искомой фазы Н-ан-
тигена используют феномен роения по Гарду, для чего применя-
ют неплотный (0,8—1%) слабощелочной агар, разлитый в чаш-
ки Петри. При добавлении к агару сыворотки, соответствующей
той фазе, которую удалось определить, распространение бакте-
рий, богатых Н-антигеном этой фазы, будет угнетено, в то время
как особи бактерий, содержащие преимущественно другую фазу,
будут распространяться на поверхности неплотного агара, обра-
148
зуя макроколонпю, занимающую иногда всю поверхность агара
в чашке Петри. Па периферии такой макроколонии будут скап-
ливаться бактерии, содержащие эту (невыявленную прежде)
фазу Н-антигена, которая легко обнаруживается в реакции аг-
глютинации на стекле. Для приготовления 0,8—1% агара в ма-
ленькие колбочки разливают но 15 мл 2% агара и хранят их
в холодильнике. Перед употреблением агар растапливают и к
нему добавляют 15 мл мясопептонного бульона (можно буль-
она Хоттннгера), при этом получают 1% агар. Охлажденный до
45 °C агар той же концентрации вливают в чашки Петри и по-
сле его застывания подсушивают в течение 15—20 мин в термо-
стате при 37 °C. В центр чашки Петри на агар наносят 1—2 кап-
ли сыворотки, соответствующей выявленной фазе Н-антигена.
После тою как сыворотка впитывается в агар, на то же место
петлей наносят испытуемую культуру (18-часового роста на ско-
шенном агаре) на площадь 3— 4 мм диаметром. Чашки инкуби-
руют при 37 °C в течение 18—20 ч. На следующий день с края
макроколонии берут культуру п испытывают ее в реакции аг-
глютинации на стекле с соответствующими монореценторными
Н-сыворотками.
Для выявления искомой фазы Н-антигена можно использо-
вать также U-образную трубочку Хайна, заполненную полужид-
ким (0,2—0,4%) слабощелочным агаром, смешанным с Н-сыво-
роткой к антигену подавляемой фазы.
При выявлении в слабоподвижной или неподвижной культу-
ре особей, обладающих жгутиками, можно также использовать
U-образную трубочку с полужидким агаром. В этом случае сы-
воротку в агар не добавляют. Культуру усевают в одно колено
трубочки, при этом наличие роста в протвоположном (от посе-
ва) колене трубочки будет обусловлено подвижными особями.
При отсутствии агглютинации с поливалентной О-сывороткой
ABCDE н положительной реакции агглютинации с поли-
валентной О-сывороткой редких групп до дальнейшего опреде-
ления серологической характеристики культуры необходимо с
помощью дополнительных биохимических тестов подтвердить ее
принадлежность к тому или иному подроду Salmonella. Если
изучаемая культура по указанным ранее признакам может быть
отнесена к одному из подродов сальмонелл, то проводят опреде-
ление ее антигенной структуры с помощью моновалентных
О-сывороток (11, 13, 14, 16 и т. д.) и Н-сывороток, как было
указано ранее.
В некоторых случаях для точного определения серовара не-
обходимо обязательное определение дополнительных биохими-
ческих свойств выделенной культуры в связи с тем, что отдель-
ные из сероваров имеют идентичную антигенную структуру и
различаются только по ферментативным свойствам, как это по-
казано в табл. 56.
Большую помощь при идентификации сальмонелл может
оказать испытание чувствительности выделенной культуры к
149
Таблица 56. Характеристика биохимических и серологических свойств не-
которых сальмонелл
Серовар Антигенная структура Биохимические свойства
S. paratyphi В 1,4,5,12 : b: 1,2 Ацетат — D-Тартрат —
S. java 1,4,5,12 :b: 1,2 Ацетат + D-Тартрат 4-
S. cholerae-suis 6,7:c: 1,5 Арабиноза — Трегалоза — D-Тартрат +
S typhi-suis 6,7 : c: 1,5 Арабиноза + Трегалоза + D-Тартрат —
S. mission 6,7: d: 1,5 Инозит —
S. isangi 6,7 : d : 1.5 Инозит +
S. enterilidis var. jena 1,9,12 : gm : — Глицерин (бульон + Штерна)
S. enterilidis var. ratin 1,9,12 : gm : — Глицерин (бульон — Штерна)
S. gallinarum 1,9,12: — : — Орнитнн — Дульцит + Глюкоза (газ)
S. pullorum 1,9,12: — : — Орнитин + Дульцит — Глюкоза (газ) 4-
сальмонеллезному О-бактериофагу, являющемуся высокоспеци-
фичным для этих бактерий. Он лизирует 97,5% штаммов саль-
монелл п только 0,3% штаммов культур, принадлежащих к дру-
гим родам семейства кишечных [Килессо В. А., 1963; Felix А.,
Callow В., 1943; Thai R , Kallings L., 1955]. Среди наиболее час-
то встречающихся сероваров сальмонелл резистентными к
О-бактериофагу могут быть некоторые штаммы S. derby, S. ten-
nessee, S. anatum, S. london и некоторые другие.
Методика испытания чувствительности культур к О-бакте-
риофагу сводится к следующему: две капли 4- или 18-часовой
бульонной культуры испытуемого штамма (можно использовать
взвесь суточной агаровой культуры в изотоническом растворе
натрия хлорида) тонко оттянутой пастеровской пипеткой или
петлей (диаметром 0,4—0,5 см) наносят на хорошо подсушен-
ную чашку Петри со слабощелочным агаром (pH 7,2—7,4);
после подсыхания культуры на одну из капель петлей или пас-
теровской пипеткой меньшего диаметра наносят О-бактериофаг,
а на другую в качестве контроля — каплю бульона. Бактерио-
фаг используют либо неразведенным, либо в разведении 1 : 5 (в
150
зависимости or титра, указанного на этикетке). На одной чашке
таким образом можно испытнь одновременно 8—10 культур.
Чашки с нанесенными культурами и О-бактериофагом помеща-
ют на 18—20 ч в термостат при 37 С, после чего учитывают
результаты. 1(сложи тельная реакция (наличие лизиса) опреде-
ляется но появлению на месте нанесения фага четко очерченной
зоны сливного лизиса (CI.) пли большего или меньшего числа
отдельных негативных колонии, отчетливо видимых невооружен-
ным глазом. При отсутствии лизиса в местах нанесения фага
будет сплошной рост культуры, как в контроле.
Определение эпидемиологических маркеров. После того как
устанавливается принадлежность выделенных штаммов сальмо-
нелл к определенным сероварам (типам), некоторые из них
(наиболее широко распространенные) подвергаются дальнейше-
му изучению с целью их виутрисероваровой дифференциации
или эпидемиологического маркирования. Последнее предназна-
чается для практических целен — совершенствования эпидемио-
логического обследования и анализа (установления или исключе-
ния эпидемиологических связей между отдельными случаями за-
болевании; выявления источников и факторов передачи возбу-
дителей; расшифровки вспышек; отличия привозных случаев за-
болеваний от местных и др). При этом важно подчеркнуть, что
любой из методов дифференциации сальмонелл, равно как и лю-
бых других возбудителей инфекционных болезнен, должен
удовлетворять следующим требованиям: определяемые вариан-
ты и препараты, необходимые для их определения, должны
быть стандартными; микртюр! анпзмы могут быть подразделены
на соответствующее число вариантов; методика определения ва-
риантов должна бьпь проной. а результаты воспроизводимы-
ми. Применяемые методы должны быть стандартизованы с тем,
чтобы, где бы они ни применялись, результаты были сравнимы.
О и р е д е л е н и е биона р о в. Как было уже сказано ранее,
для сальмонелл характерна определенная вариабельность в фер-
ментации отдельных углеполов, что позволяет выявить в преде-
лах отдельных сероваров большее или меньшее чис и» стабиль-
ных биохимических варттанюв или биоваров, которые могут слу-
жить в качестве эпидемии.иноческой метки штамма. I < гествен-
во, что такая дифференциация по биохимическим признакам
целесообразна прежде всею в отношении наиболее широко рас-
пространенных на той или иной территории сероваров сальмо-
нелл, к числу которых в irepnvio очередь можно отнести S. typ-
liinuiriiJin. Для подразделения этого серовара на бновары (ра-
нее обозначавшиеся, как биохимические типы) необходимы раз-
нообразные наборы тестов, в зависимости от числа которых
удается дифференцировать большее или меньшее число его био-
варов. Так, известна укороченная схема, широко применяемая
в ряде стран, позволяющая лс1ко п быстро подразделить S. typ-
himurinm на 4 стабильных бповара в зависимости от опгошения
изучаемых штаммов к рамно те и инозиту (табл. 57)
151
Таблица 57. Биовары S. typhimurium (укорочен-
ная схема)
Обозначения биоваров Рамноза Инозит
а + +
ь •
с .
d — +
Возможна дифференциация S. typhitroniim и на большее
число биоваров, основанная на их отношении к арабинозе, кси-
лозе, рамнозе, D- и i-тартратам, мукату и инозиту. Такой набор
тестов позволяет определить 25 биоваров возбудителя (табл. 58),
хотя при отсутствии какого-либо из указанных ингредиентов
можно применить и меньший набор тестов. Следует заметить,
что по указанным признакам можно дифференцировать (при не-
обходимости) на биовары и другие серовары сальмонелл. Так,
например, можно упомянуть предложенный М. Kristensen
(1938) метод дифференциации S. typhi, основанный на неодина-
ковом отношении отдельных штаммов этого серовара к ксилозе
Таблица 58. Биовары S. typhimurium
Условные обозначения Арабиноза Ксилоза Рамноза D-Тартрат i-Тартрат Мукат Инознт
1 +
2 + 4- — — —. — —
3 + 4- + —- — — —
4 + + + 4- -— —
5 + + + + + —- —
6 + + + 4- + + .—_
7 + + + + + + +
8 + —— + 4- + 4- +
9 + + ’— + + + +
10 4- + — 4- 4* +
11 — + + — 4- 4-
12 + 4* -— + + + —
13 .—, -— — 4- + + +
14 — — -L- + -4-» + 4-
15 16 “Г "t" + + +
17 — + + — — +
18 — + + — — 4- +
19 + + 4- — — 4-
20 + + 4- —• + — —
21 + 4- + 4- + +
22 4- + —1— •—- + + —
23 + —р — + 4- 4-
24 + + + -Д- — + —
25 + + + + 4- 4-
152
и арабинозе, что дает возможность подразделить эти микроор-
ганизмы на три оиовара:
I бновар — ксилоза 4-, арабиноза —
II биопар — ксилоза —, арабиноза —
III бновар — ксилоза I, арабиноза 4
Этот метод дифференциации S. lyphi с успехом может быть ис-
пользован в эпидемиологических целях при невозможности опре-
деления фаговаров или распространении из какой-либо террито-
рии S. lyphi, преимущественно одного фаговара.
В качестве другого примера дифференциации отдельных се-
роваров по биохимическим свойствам можно привести издавна
известную схему подразделения S. enlerilnlis и S. dublin на ряд
биоваров, которые к тому же имеют определенные названия
(табл. 59).
Таблица 59. Биохимические вариаитм S. enteritidis и S. dublin
Биовары Арабиноза* Дульцит* Рамноза* Бульон Штерна**
S. enteritidis + -1- 4 4+
S. enteritidis X 4- 4-
v. danysz S. enteritidis, v. chaco -1- (+) 4- 4
S. enteritidis, v. essen (-1) 4- 44
S. dub'in (-J-) или — X 4- 4
S. dublin, v. aecra 4- 4 4
S. dublin, v. coeln (4 ) или - 4- (4) 44
• + положительная реакция п трч<’ин<' I 2 дней: < 1-> »игтожителы»ач реакция позже
3-го дня; (|) или — роложитгльняя реакция позже Зю лня или отрицательная; — от-
рицательная реакция; X различные реакции:
•* 4- + фиолетовое окра щипание среды; 4 фиолетово красное окрашивание среды;
— цвет среды не изменяется.
В среды с мукатом и тартратами носов культуры проводят
петлей, используя 18-часовую бульонную или агаровую культу-
ру. В тесте с мукатом результаты учитывают через 48—96 ч по
изменению цвета среды. При положительном результате перво-
начальный цвет среды (синий с зеленоватым оттенком) изменя-
ется на зеленовато-желтый.
В тесте с тартратами результаты учитывают через 48—96 ч
по величине выпавшего осадка через 30 мин после добавления
О,В мл насыщенного водного раствора ацетата свинца (объем
среды в пробирке должен быть 3—4 мл). Величина осадка при
положительном результате незначительная и не превышает
*/« объема среды. При отрицательном результате осадок обычно
занимает */2 объема среды пли более. Для обеспечения возмож-
ности учета результатов реакции в разные сроки (через 48, 72 и
96 ч) культуру засевают в несколько пробирок.
В глицерино-фуксиновый бульон Штерна вносят агаровую
культуру. Учет результатов проводят в течение 7 дней. При по-
153
ложительном результате цвет среды меняется, она краснеет и
приобретает фиолетово-белесый оттенок. При постановке дан-
ного теста необходимо учитывать реакцию в контрольной (неза-
сеянной) пробирке, в которой среда при стоянии в термостате
приобретает слегка розоватый оттенок.
Фаговары. Практическое применение методов дифферен-
циации возбудителей на фаговары (фаготипы) основано на
одном из самых важных свойств бактериофагов — специфично-
сти по отношению к микробу-хозяину.
Существует несколько типов схем для подразделения саль-
монелл на фаговары, в основе которых лежат разные принципы,
и отличающихся главным образом природой и свойствами бак-
териофагов, включаемых в схему.
Известны схемы, основанные на использовании дикого типа
фага и определенного числа адаптированных к нему фагов (на-
пример, схема для определения фаговаров S. typhi). Существу-
ют схемы, представляющие собой комбинацию диких типов фа-
гов, их адапчантов и лизогенных фагов (например схема A. Fe-
lix и В. Callow для S. typhimurium) или только дикие расы фа-
гов (схема, предложенная в 1948 г. К. Lilleengen для S. typhi-
murium). Описаны схемы, состоящие только из лизогенных фа-
гов, выделенных из штаммов сальмонелл определенного серова-
ра, для которого создавалась схема. К числу последних относит-
ся схема, разработанная Smith (1951) для S. dublin.
Наконец, в основе подразделения сальмонелл на фаговары
может быть положен совсем иной принцип — идентификация ли-
зогенных фагов, несомых бактериальными штаммами сальмо-
нелл определенного серовара (например, схема, предложенная
J. Sechter и Ch. В Gerichter в 1969 г. для S. blockley) и др.
В настоящее время известны и с успехом применяются схе-
мы для фаготипирования различных сероваров сальмонелл, при
этом одни из них получили международное признание (напри-
мер, схема фаготипирования S. typhi, S. paratyphi A, S. paraty-
phi В., S. typhimurium), тогда как другие приняты лишь в от-
дельных странах (схемы для S. anatum, S. bareilly, S. bovis-
morbificans, S. dublin, S. enteritidis, S. newport, S. panama
и др.).
В СССР осуществляют фаготппирование трех сероваров.
S. typhi, S. paratyphi А и S. paratyphi В с использованием типо-
вых бактериофагов, выпускаемых Тбилисским научно-исследо-
вательским институтом вакцин и сывороток (НИИВС) М3
СССР.
Одной из первых и получивших широкое международное
признание является схема дифференциации на фаговары S. typhi,
разработанная J. Craigie и С. Yen (1938) и основанная на стро-
го специфическом отношении бактерий этого серовара к адапти-
рованным Vi-бактериофагам II серологического типа (Vill).
Схема включает серию фагов (96), с помощью которых S. typhi
можно подразделить на 96 фаговаров. Помимо указанных адап-
154
тированных Vi 11 бактериофагов, при определении фаговаров ис-
пользуется неадаптированный брюшнотифозный Vi бактериофаг
(Vil), который выявляет присутствие в культуре изучаемого
штамма Vi-антигена. Чиповые фаги и определяемые с их по- ,
мощью фаговары S. typhi обозначаются одинаковыми символа-
ми— заглавными буквами латинского алфавита (от Л до Т
включительно) и арабскими цифрами (от 25 до 55). Одним из
необходимых условии для установления фаговара культуры
S. typhi является наличие в ней Vi антигена, так как именно с
ним связана чувствительность культур к Vi-бактернофагам.
Вторым обязательным условием для определения фаговара яв-
ляется использование VilI-бактериофагов в рабочих тест-разве-
дениях (РТР), которые обычно указаны в приложении к набору
фагов пли на этикетках ампул с фагами.
Для установления фаговара суточную агаровую культуру
изучаемого штамма (после проверки на содержание в ней Vi-ан-
тигена с помощью Vi-сыворотг и) пересевают в пробирки с 2—
3 мл бульона Мартена или Хогтигпера (pH 7,0 -7,2) и инкуби-
руют в термостатг при 37 СС в течение 3 4 ч. Молодую бульон-
ную культуру наносят на чашку Петри г 25—30 мл 1,5—1,7%
слабощелочного хорошо подсушенного агара. Чашки с агаром
готовят накануне, оставляя нх с закрытыми крышками, а на
следующий день подсушивают с открытыми крышками в течение
20—30 мин. Культуру наносят на чашки петлей (диаметром
5 мм) пли тонко оттянутой пастеровской пипеткой в виде от-
дельных капель. Число капель культуры должно быть па 3 еди-
лшцы больше чис.га испольлемых бактериофагов: одну из них
испытывают с Vil-фагом, вторую — с <) < альмон»-глезным поли
валентным фагом, а третья кайля служит контролем культуры,
на нее вместо ф иа наносят каплю бульона. Культуру можно за-
сеять на чашку в ви те сплошного газона, на который нос -е под-
сыхания наносят петлей нли тонко оттянутой пастеровской пи-
петкой Vi II-бактериофаг и в тест-разведения ., а также Vil- и
•О-бактернофаги. После подсыхания капель фага чашки остав-
ляют в термостате при 37 °C и учитывают резу тьтаты дважды
(через 5—6 и 18 -2(1 ч). Учет результатов проводят невооружен-
.ным глазом или с помощью 5 г-ратной лупы через дно чашки в
прямом освещении.
фаговар культуры определяют в соответствии с приведенной
схемой (табл. 60), которая вк почает сокращенное число бакте-
риофагов (15), выпускаемых Тбилисским ПИИВС.
Если штамм дает слабую реакцию Vi-агглютинаиин. а ре-
зультаты определения фаговара нечеткие, штамм распевают и
гпод контролем Vi-сыворотки отбирают колонии, наиболее бога-
тые Vi-антлгеном, которые вновь подвергают фаготнвнрованию.
Высев для отбора г олений проводят из 3—4-часовон бульонной
.культуры гга слабощелочной аг ар.
При учете результатов исследования необходимо учитывать
возможные отклонения в полученных результатах, а также из-
155
Таблиц a 60. Схемг определения фаговаров S. typhi
CL Бактериофаги
п гз е A Bt Bl Bl Ci Cl Cl Q Cs C. C,
А CL CL CL CL CL CL CL CL CL CL CL
В, ± CL — 444 — — + 4+4 — + —
В2 44 — CL 4--ь 444 — — —- — — *—
В^ — — CL — — — —- — —
С1 4 444 4—F 444 CL CL CL CL CL CL CL
с, CL 4 — — — —
С, — — — — —— CL CL + — 4- 4
С. — — — — — — •— CL — —
с. - -
С, — — —. — — — — — —• CL —
С7 —— *— —- — —— — — -j-4—h 4 4-4-4 CL
D, — ± — — ± CL — — — —
и» — —•
D,
d5 .— ± — — ± CL — — — — —
D„ .— — — — •— SCL 444 — — •— —
D, —•
De —
E, — 4- — — ± — — — — — —
E, — —
E, — —
—- —
F, —
Fj — — —
f4
F, — — — — — — — — — -— —
G — — .— — 4 — —— — —- —- —
H — 4 4 4- + — 4 + -J- — —
h
I, —
К
Li —
lJ —
Mi .— —
ML —-
N
О — — — 444 — — — — — —
T — 4— — — — ~|— — — —
27
28
38
39
40
42 — 44 — SCL 44 — 444 CL — SCL SCL
46
Условные обозначения: CL сливной лизис; SCL полуслнвной лизис; +++
± единичные негативные колонии; — отсутствие лизиса.
156
Бектерноф-и
D! D» D< D* D, Da Et Ei E* Eto
CL CL CL CL CL CL CL CL CL CL CL
4- 4^4—F
+i ++ +4 + +++ — 4-4-4- 4--1- 4—1“+ — H-4- SCL
+++ — — —— SCL — — — 4-4-4-
+++ + 4-4 4-4- 4-4 4 4- —F — ± 4-4-
— —— f-i — —— •— — —
— —. — b+L —— — — — — —
- —
CL CL CL CL CL CL CI. — —. — ±
— CL 4- — — —- — — — —
.— CL — — +4- — — — — ——
— — —. CL CL CL ± — — ±
*4“ — — CL — —- — — —’ —
— — — CL —. — — — —
— .— — CL -— — —
— __ — — — CL CL CL CL
CL —
CL —•
CL
— — — — — 4- — — ± 4-
— — — — — — — — — —

— - — .— — — — 4-4-4- — — — —
4-4-4- — ± 4-4-4- — — — — — CL SCL
± — — — — rh — tfc — — ±
—— — — — CL — 4-14- — 4-4- 1 1~-

отдельные негатнгны колони i (более SO); ++ отг'яьные негативные колонии (до 20);
157
Бактериофаг!!
а £ е Fi Fl F< Fl G H h и к Li Li Mi
А Bj &. С, с’ С4 С, С, С7 Di D, D< DB D. D, ь Et 1: Ею Fi F, F. & H l: к Li L, Mi Mt N О T 27 28 38 39 40 42 46 3++ 1 ± 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 -H 1 I Itf-H+I 1 +1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 l + l ++ + ± h । pi H-11 i+i 11111111+1++PP11111 i+i 11 и-111 i+i+i i+p r + + + + + + •4“ I lllllllll + lllllllH-llPlPlII + l llllllllllll I++P + 1 ++ 1 CL ++-F +++ ± ± CL CL CL ++ CL ± 4—I—F I + I 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 l+Pl 1 1 1 1 1 1 H-1 1 1 1 1 1 H- 1 1 1 1 1 1 ± 1 ++P + T++_ CL +++ + CL l I 1 I I I l 1 1 l I I I I 1 l Рн-1 1 l I I I I 1 1 1 l I 1 I 1 1 I I I IH- ijgpl P 1 P 1 H- 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 PP+ 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 + 1 l +Ф l l l H-1 ++ 1 +P iiiiiiiiiiiiiiPiih-iiiiiiiiiiiiiiiih-iiiJiih-JiP CL ± SCL ± CL +++ d 1 I -и I 1 1 1 1 1 1 1 I 1 i I 1 i I i i I i । -HI । led । i + I I I I I I 1 1 I CL +++ CL ++ ± ++ + + CL ++ +++
158
Продолжение габл. 60 60
Бактериофаги
Ml N о т 27 28 38 39 40 42 46
CL CL CL CL CL CL CL CL CL CL CL
+++ — ++ + + 4—F SCL +++ +4-4- CL 1 1 CL
+++ CL + SCL S(.L CL CL CL — —J-— -—
CL CL С L CL SCL CL SCL CL —— SCL CL
++ ± — ++ ± SCI SCL + ++ CL ± ±
— — •— — — — — +++ —
++ — — zb -4- ± ± ± CL ± —

+—
++
— + — — -— ± ± ± rt: — ++
*—
— — — — — 4- — Ч- — +
— — — — — — — — OL +++ ±

-4- — — — — -+- ± * — SCL
++

+—
— — — ~~ — d- — — —
— . —— ±
+ rfc — ± — +H—F + 4^+ ± CL
— — — — —• — — — — — —
•—. —. - « — — ± rfc — — ±
—• —— —- —— .— — ± — — ± ±
CL
CL
•— CL — ± — — — — — ±
++4 —— CL — •— +++ ++ — CL SCL CL
— +4—F —• CI. •— CL CL CL — 1 ‘ 1 +
— —— — — CL — — — — — CL
— •— — .—. CL — SCL ± — —
— — — —— CL — —= — —
— •— •— — —> ± ± CL — —
— — — —— — — CL —— —
SCL — —— — 1 1 1 4 4 4- +++ CL CL CL
+++ SCL CL
159
Таблица 61. Схема определения фаговаров S. paratyphi В
Г>акте
Фаговары штаммов 1 2 3a 3b Jersey Beccles
1 CL CL +4- 4- CL
1 var. 1 CL CL 4- ——• CL SCL
1 var. 1 CL CL OL +4-4- CL SCL
2 — CL — + —
2 var. 1 — CL — — — SCL
За — — CL SCL — SCL
За — — CL SCL SCL
За var. 2 — — CL SCL <— —
За 1 — — CL — — —
За 1 — — CL — — —
За 1 — — CL — — —
За 1 var. 1 — — CL —. — SCL
За 1 var. 1 — CL — — SCL
3b —— —• — SCL — SCL
3b — — — SCL — SCL
3b — — — SCL — SCL
3b var. 1 1 .— —- SCL — SCL
Jersey — — — — ' CL SCL
Beccies — — — —- —. SCI.
Beccles — — —- — — SCL
Beccies — — — -— — SCL
Beccles — — — — — SCL
Beccies var. I — — — » - SCL
Taunton —. — — —
Taunton (Dundee) — — — - — __
BAOR — — — + — —
BAOR (ii. t.) —— — —
Dundee —
Worksop — — — — — —
Условные обозначения: CL сливной лизис; SCL полусливной лизис; OL
колонии (более 20); ++ отдельные негативные колонии (до 20); + единичные негативные
* Приведены дополнительные обозначения фаговаров в зависимости от реакции штам
вестные правила в обозначении фаговаров, к числу которых
относятся следующие:
штаммы фаговара А лизируются всеми ViII-фагами и
Vil-фагом;
подразделение фаговаров на подфаговары в группах В, С,
D, Е и т. д. построено таким образом, что штаммы подфаго-
вара с порядковым номером 1 (Bi, Ci, Di, Е( и др.) лизиру-
ются не только гомологичными фагами, но и всеми другими
фагами данной группы;
культуры, лизирующиеся Vil-фагом и (или) ViIV-фагом,
но не чувствительные ни к одному из ViII-фагов, обознача-
ются как «Vil + IV». Отсутствие лизиса такой культуры фа-
гами может быть вызвано врожденной резистентностью к
Vi-фагам или тем, что она принадлежит к новому фаговару,
к которому еще не получен адаптированный фаг;
160
р нофягн Taunton SCL SCL SCL SCL SCL SCL SCL SCL SCL SCL SCL SCL SCL SCL SCL SCL SCL SCL о |t?l -55111 lcSc5cocl 1 1 !5I lol 1 1 Dundee CL SCI SCL SCL SCI. SCL SCI S< I. SCL SCL SCL SCL SCL S< L SCL St L ScL SCL St L SCL SCL SCL St L f i i i i i Ц i i i i i i -TT--1 i i i i i i i i i i i d 1 e CL CL CL CL CL CL CL CL CL CL CL CL CL CL CL CL CL CL CL CL CL <1 CL < L CL < I. CL CL CL CL CL CL CL CL CL CL CL CL t L ( 1. t I. CL CL CL CL c CL — CL CL CL CL CL CL CL CL CL f SCL SCI SCL SCL SCL SCL CL SCL h SCL SCL SCL SCL SCL SCL SCL SCL SCL SCL SCL SCL SCL SCL SCL SCL SCL SCL SCL SCL SCL SCL SCL SCL SCL SCL SCL (- 4 1риме- ание* (1) (1) (Q) (2) (2) (B) (S) (B) (B) (M) (Q) (B) (Q) (A) (ВТ) (P) (M) (J) (A) (ВТ) P ’(BM) (M) (B) (B) (M) (M) (A)
лизис со вторичным ростом; [OLJ непостоянная реакция; +++ отдельные негативные
колонии; — отсутствие лизиса; (н. т.) нетипичный.
мов с Б последними типовыми бактериофагами Тбилисского НИН ПС.
культуры, не обладающие Vi-антигеном, не чувствитель-
ные ни к Vil-, ни к Vill-бактернофагам, но хороню лизирую-
щиеся (J-фагом, обозначаются как «Vi-Heranimibie», или W-
формы;
культуры, дающие реакцию со многими Vifi-фагами, но
не принадлежащие к специфическому фаговару, обозначают-
ся как «деградированные Vi-штаммы», или как «полилиза-
бельпые».
Для успешного исследования таких культур рекомендуется
изучение нескольких (2—5) колоний, так как некоторые из них
могут сохранять признаки определенного фаговара. Нередко та-
кие «деградированные Vi-штаммы» проявляют выраженную
однотипность в спектре чувствительности к ViII-фагам, что мо-
жет быть использовано в качестве эпидемиологической метки
для штаммов, выделенных из различных источников.
11—817
161
Для определения фаговаров S. paratyphi В применяют стан-
дартную схему Феликса и Келлоу, включающую И фагов, с по-
мощью которых устанавливается 13 основных фаговаров и 35
их постоянных подфаговаров. Типовые бактериофаги и выяв-
ляемые с их помощью фаговары имеют одинаковые обозначе-
ния. В нашей стране используют упомянутую схему Фелпкса и
Келлоу, включающую 10 фагов, дополненную 5 фагами, полу-
ченными в Тбилисском НИИВС. С помощью этой схемы удается
установить 11 основных фаговаров S. paratyphi В и 18 их постоян-
ных подфаговаров. Установление фаговаров S. paratyphi основа-
но на определении спектра лизиса испытуемого штамма не-
сколькими типовыми бактериофагами. В представленной схеме
(табл 61) приведены типы реакций с бактериофагами культур
различных фаговаров и их названия в соответствии со схемой
Феликса и Келлоу и дополнительные обозначения фаговаров в
зависимости от реакций штаммов с 5 дополнительными фагами
Тбилисского НИИВС (графа «Примечание»).
Методика определения фаговаров этих бактерий аналогична
таковой для S. typhi. Отличие заключается лишь в числе допол-
нительных капель культуры: для S. paratyphi В их наносится
не три, а две (одна для испытания с сальмонеллезным О-фагом,
а другая служит контролем культуры). Принадлежность культу-
ры к определенному фаговару устанавливают в соответствии с
приведенной схемой. Однако следует иметь в виду, что изучае-
мый штамм может отклоняться от указанных в схеме спектров
лизиса. Если штамм не лизируется ни одним из типовых бакте-
риофагов, его обозначают как «нетипирующийся», если лизи-
руется несколькими фагами, но по спектру лизиса не укладыва-
ется в установленные схемой фаговары, то его обозначают как
«деградированный».
Определение фаговаров S. paratyphi А
Дифференциацию на фаговары сальмонелл этого серовара
осуществляют в соответствии с международной схемой, предло-
женной D. Banker (1955) н включающей 6 специфических бак-
териофагов, с помощью которых удается определить 6 фагова-
ров этих бактерий. Бактериофаги и фаговары штаммов обозна-
чают арабскими цифрами (1, 2, 3, 4, 5 и 6). Установление фаго-
варов основано на определении четких спектров лизнса изучае-
мых штаммов S. paratyphi А бактериофагами определенных ти-
noi нли группами фагов (табл. 62).
Методика определения фаговаров S. paratyphi А аналогична
таковой для S paratyphi В. Установление фаговара культуры
проводят в соответствии с приведенной схемой. При определе-
нии фаговара могут встретиться отклонения от прилагаемой
схемы. Изучаемый штамм может оказаться не чувствительным
ни к одному иэ типовых бактериофагов. Такой штамм обознача-
ют как «нетипирующийся» Если штамм лизируется нескольки-
162
Таблица 62. Схема фаготипирования S. paratyphi А
фагов Фаговары 1 2 3 4 8 6
1 CL CL CL CL CL CL
2 — CL — — — CL
3 — — CL — —
4 ++ ++ — CL +++ ++
5 — - CL
6 — — ~— — <CL
Условные обозначения: CL слнвноЛ лпзис; 4 1+ отдельные негативные
колонии (более 10); +4- отдельные негативные колонии (менее 10); — отсутствие лизиса.
ми типовыми фагами, но спектр лизиса ие укладывается в уста-
новленные схемой фаговары, его обозначают, как «деградиро-
ванный».
Следует отметить, что наибольший успех при опре телении
фаговара S. paratyphi Л (равно как и при определении фагова-
ров S. typhi и S. paratyphi В) достигается в том случае, если
изучению подвергается не одна, а несколько культур (2—4), по-
лученных из отдельных колоний исследуемого штамма.
Дифференциация отдельных серзваров сальмонелл может
быть основана на определении у них способности продуцировать
колицины или на установлении характера их чувствительно-
сти к определенным колицинам. Однако эти методы, широко ис-
пользуемые для дифференциации шигелл н некоторых других
бактерий, применительно к сальмонеллам не получили широко-
го признания прежде всего потому, что среди них относительно
редко встречаются колнциногсниые штаммы. Как теперь установ-
лено, способность продуцировать колицины у бактерий, в том
числе у сальмонелл, связана с присутствием в клетках микроор-
ганизмов особых колициногенньтх факторов — так называемых
Col-плазмид. Последние обладают различными свойствами, в
том числе неодинаковой способностью подавлять рост бактерий
одного и того же серовара, что собственно и дает возможность
рассматривать эти свойства (Со1+ или Col-) в качестве генети
ческих (эпидемиологических) маркеров.
В качестве эпидемиологических маркеров может быть ис-
пользована и в настоящее время используется чувствительность
или устойчивость сальмонелл к различным антибактериальным
лекарственным препаратам в первую счеоедь к антибиотикам.
Собственно маркеро в в этом случае служит спектр антибио-
тиков, к которым испытуемый штамм оказывается устойчивым.
Обычно у штаммов, происходящих от эпидемиологически свя-
занных случае I, спектры резистентности или «ан^ибиотикограм-
мы» оказываются сходными. Однако следует отметить, что этот
метод дифференциации сальмонелл не может быть принят без-
оговорочно поскольку в силу разных причин спектр устойчиво
сти отдельных штаммов может изменяться. Естественно, что такой
11* 163
способ дифференциации сальмонелл может быть применим
только в отношении тех сероваров, среди которых часто обнару-
живаются полирезистентные штаммы, в частности в нашей
стране к числу таких сероваров следует отнести S. typhimurium.
В настоящее время установлено, что возникновение рези-
стентности к одному или нескольким химиотерапевтическим пре-
паратам у сальмонелл может быть связано с приобретением
ими особых факторов резистентности или R-плазмид.
Плазмиды (R-факторы) — автономно реплицирующиеся
структуры или, по определению J. Lederberg (1952), внехромо-
сомные наследственные детерминанты, были открыты впервые
в 60-х годах японскими исследователями у шигелл .[Watana-
be Т., 1963; Mitsuhashi S., 1969]. Основным механизмом лекар-
ственной устойчивости, сообщаемой бактериям R-факторами,
является приобретение клетками способности синтезировать эн-
зимы, разрушающие химиотерапевтический препарат. Обширные
данные литературы [Howe К., Zinton А., 1976, и др.] свидетель-
ствуют о том, что значительное распространение R-плазмид сре-
дн патогенных и других микробов, обитающих в организме че-
ловека и животных, явилось результатом бесконтрольного при-
менения антибиотиков в медицинской и ветеринарной практике.
Широкое распространение множественной лекарственной ус-
тойчивости, детерминируемой R-плазмидами, обусловлено дву-
мя обстоятельствами: селекционирующим действием антибиоти-
ков и способностью R-плазмид передаваться посредством
конъюгации между бактериями, принадлежащими к разным ви-
дам, родам н даже семействам 1 Watanabe Т., 1971; Datta N.,
Hedges R., 1972]. Помимо систематического наблюдения за чув-
ствительностью выделенных культур к антибиотикам (установ-
ления их антибиотикограмм), важное значение для эпидемиоло-
гического анализа имеет характеристика R-плазмид, включаю-
щая изучение маркеров устойчивости, конъюгативности, группы
несовместимости, способности ингибировать фактор фертильно-
сти (fi+), молекулярной массы плазмидной ДНК-
На основании полученных данных об идентичности или раз-
личии свойств изученных плазмид можно судить об эпидемиоло-
гическом родстве содержащих их штаммов.
Несомненно, что все изложенное относительно R-плазмид и
их характеристик представлено в очень сокращенном виде.
В деталях с этой весьма сложной и важной проблемой можно
ознакомиться в работах В. Д. Тимакова и др. (1980), Г. Мей-
нелла (1977), Е. Andersen, Е. Threlfall (1974), С. Cherubin
(1981), Н. Tschape, Е. Tietze (1981), П. Брода (1982) и др.
РОД CITROBACTER
Род Citrobacter объединяет группу ферментативно родствен-
ных бактерий, названных так благодаря их способности утили-
зировать цитрат (citrus — лимон, bacter — мелкие палочки) и
164
использовать его в качестве единственного источника углерода.
Название бы по предложено ('. Werkinan, G. Gillen (1932), а
также И. Е. Минкевнчем (1948) Отдельные представители это-
го рода первоначально были включены в другие роды и были
известны под различными названиями. В силу бпизостн их фер-
ментативных свойств к Е. coli нх часто включали в род Escheri-
chia [Vaughn R, I.e.vin M„ 1942]. Бактерии, утилизирующие
цитрат п медленно ферментирующие лактозу, были известны, как
группа Bethesda — Ballerup | Edwards Р., West М., Bruner D.,
1948]. Позднее R. S. Breed, G. M. Murray, A. P. Hitchens (1957)
классифицировали штаммы, медленно ферментировавшие лакто-
зу, как вид Paracolon intermedium, входящий в род Paracolon-
bacteriiini, а штаммы, быстро расщепляющие лактозу, — как ви-
ды Е. freimdii рода Escherichia. В последующем бактерии, ути-
лизирующие цитраты и медленно и быстро ферментирующие
лактозу, были отнесены к роду Citrobacter на том основании,
что онн имели схолные антигены. Детальное изучение, биохими-
ческих характеристик Salmonella coli 1 и некоторых других се-
ротипов Е. coli позволило установить их фактическую принад-
лежность к роду Citroharfer. Отдельных из известных ныне
представителей рода Citrobacter прежде относили к другим ви-
дам (С. koseri, С. diveinn) и родам (Levinea, Podlewskia).
Классификация и номенклатура. Согласно «Определителю
бактерии Берги» (1974) род Citiohacter включает два вида:
1. Citrobacter fretindii (WerkmanC и Gillen G., 1932|. Название
C. fretindii было дано в честь бактериолога A. Freund. Сино-
нимы Bacterium fretindii (Braak IL, 1928], Escherichia freun-
dii (Braak H., 1928; Jale M., 1939]
2. Citrobacter intermedins [Werkinan C„ Gillen G., 1932]. Этот
вид в свою очередь подразделяете я на два биовара («а» и
«Ь») в зависимости от некоторых ферментативных характери-
стик. В соответствии с антигенной струк1урой Citrobacter
подразделяются на серовары.
Цитробактеры обнаруживаются в испражнениях и моче лю-
дей, в водг открытых водоемов и других объектах внешней сре-
ды. Их можно отнести к естественным обитателям кишечника,
так как онис большим постоянством могут быть обнаружены у
здоровых люден. Однако некоторые серовары бактерий рода
Citrobacter (О-групп 8, 4, 5, 7, 6, 3, 12, 22 и др.) могут вызывать
как спорадические случаи, так и вспышки заболеваний, проте-
кающих по типу гастроэнтеритов, диспепсий или пищевой токси-
коинфекции [Рагинская В П„ 1969 1973; Scdlak J., 1068, и др].
Они могут быть выявлены в качестве этиологического агента,
при инфекциях моче- и желчевыводящих путей, оти гах, остео-
миелитах, менингитах [Scdlak J., 1961, 1968, и др.]. Что касает-
ся их патогенности для лабораторных животных, то она факти-
чески ш изучена.
Биологические характеристики. Цитробак гер — мелкие па-
лочки, как правило, подвижные благодаря наличию перитрихи-
165
ально расположенных жгутиков, капсул не образуют. Они хоро-
шо растут на обычных питательных средах;и могут использо- ।
вать цитрат, как единственный источник углерода. В отличие от
Е. coli рост этих бактерий на средах, содержащих желчные со-
ли, желчные кислоты и бриллиантовый зеленый, не подавля-
ется.
На среде Эндо лактозоположительные варианты Citrobacter
образуют колонии, окрашенные в розовый или красный цвет, но.
лишенные типичного для Е. coli металлического блеска; у лак-_
тозоотрицательных вариантов колонии бесцветные или Серова- j
тые с розовым оттенком, более темным в центре. На среде Плос- I
кирева ~лактозоотрицательные_штаммы Citrobacter образуют '
слегка опалесцирующие выпуклые колонии, окрашенные в тон
среды (слегка розоватые}; лактозоположительные колонии име-
ют более интенсивную розово-красную окраску с темным цент- ,
ром. На висмут-сульфит агаре через 48 ч инкубации цитробак-
теры дают обильный рост, образуя светло-зеленые, коричневые
или черные колонии без окрашивания участка среды под коло-
нией. Рост их па этой среде более обильный, чем сальмонелл,
и отличается неприятным запахом. Основой идентификации Cit-
robacter являются их ферментативные свойства.^Они утилизи-
руют цитрат в среде Симонса, образуют газ в глюкрзе,}фермет
хируюх ушктозу в равные сроки (встречаются лактозоотрицатель*
пые штаммы},• а-также'фермёптируют матщит, рамнозу, сорбиту,'
„арабинозу, ксилозу, мальтозу, рбычпо нс ферментируют инозит,
нс обладают лизпидСйарбокснлазой, фенилалднипдезамнназоп и
желатиназой. Мочевину гидролизую'гПтчень слабо и медленно
или вообще не гидролизуют; положительны в реакции с мети-
ловым красным и отрицательны в реакции Фогеса— Проскауэ-
1 ра. Большинство штаммов цитробактер образуют сероводород и
не образуют индола.^Опи вариабельны в отношении сахарозы,
салицина, дульцитаТрафинозы и адопита, а также проявляют
различные реакции в тестах с аргинином, орнитином и малона- ,
том; утилизируют соли органических кислот — мукат и D-тарт- |
рат. Основные биохимические признаки цитробактер приведены ’
в табл. 63.
Вариабельность некоторых ферментативных признаков Citro-
bacter положена в основу разделения их на 2 вида, характери-
стика которых представлена в табл. 64.
Согласно «Определителю бактерий Берги» (1974) С. inter-
medins может быть подразделен на 2 биохимических типа в со-
ответствии с их ферментативными свойствами, характеристика
которых приведена в табл. 65.
Принимая во внимание трудности, которые могут возникнуть
при дифференциации цитробактеров от сальмонелл, в дополне-
ние к изучению биохимических свойств может быть использо-
ван тест с О-сальмонеллезным бактериофагом, который лизиру-
ет подавляющее большинство сальмонелл и не лизирует цитро-
бактеры. Способ испытания штаммов на чувствительность к
166
Таблиц а 63. Биохимические свойства бактерии рода Citrobacter
Тесты или субстраты Реакция Тесты или субстраты Реакция
Лдонпт Арабиноза Глюкоза (газ) Дульцит Миозит Ксилоза Лактоза Мальтоза ffianiniD Рамноза Салицин ^СахарозУ) Сорбит Трегалоза Реакция с метиловым краевым Реакция Фогеса — Мрос кауэра 1 + 1 1 : - 1 3 3 Qiii.iojP Сероводород Мочевина (гидролиз) Желатин (??’(’) Фенплаланпплсзяминаза Лпзиндекарбок< плаза Api нниндегидролаза Глутаминовая кислота Орнитин декарбоксилаза Цитрат Симонса Восстановление нитратов Малонат Мук ат DI артрит Р-Галактозидаза KCN Подвижность J -I—1—1—i—гхтт| хх 1 1 1
Таблица 61. Дифференциация видов Citrobacter
по биохимическим реакциям (по Ewing)
Тост ПЛИ ГУбСТрЯГ ПИДЫ
< frcniulll • <1|УГ>13ПЯ
Маловат 1 1
11 идол + 1
Сероводород +, -
Мочевина +. - 1. II)
Адовит — -1
Таблица 65. Характеристика ферментативных свойств биохимических ти-
пов (вариантов) С. freunilil (по tiepin)
Тест или субстраты С. freniidii С. intermedins biotyp a C. int* »m«»dius hi»'i . p b
Сероводород Индол Малонат KCN + 1 1т 1 i I + 1 + 1 i 1 1
сальмонеллезному о бактериофагу изложен и предыдущем раз-
деле «Род Salmonella*.
Антигенная структура и серологическая идентификация. Бак-
терии цитробактер обладают ()-, К- п 1 Бант щенами, янлчющи-
мися основными у всех представителен энтеробакгерин. Фуида-
167
ментальные исследования, выполненные О. Westphal с соавт.
(1960) и др., посвященные изучению антигенов этих бактерий,
показали, что серологически одинаковые или близкие штаммы
Citrobacter и Salmonella имеют идентичную или очень сходную
структуру углеводов их О-антигенов. Полисахаридные комплек-
сы большинства энтеробактерий имеют следующие общие угле-
воды: глюкозу, галактозу, глюкозамин, гептозу и КД О (2-кето-
3-деоксиоктониковую кислоту). Другие углеводы, одни или в
комбинации, ответственны за специфичность. К ним относят га-
лактозамин, маннозу, рамнозу, абеквозу, колониковую кислоту
и новые дидеокси-сахара [Sedlak J. et al., 1971; Keleti J. et al.,
1971]. О-антиген бактерий Citrobacter локализуется в их клеточ-
ной стенке и представляет собой липополисахаридо-протеиновый
комплекс. Количественное содержание моносахаров О-антигена
в каждой О-группе постоянно. О-антигены термостабильны,
Н-антигены локализуются в жгутиках и являются термолабиль-
ными белковыми соединениями. О-антигены ряда серологиче-
ских групп имеют мозаичное строение и, кроме основных групп
антигенов, содержат парциальные факторы, свойственные дру-
гим О-группам. Штаммы серологических групп 05 и 029 имеют
Vi-антиген, серологически идентичный с Vi-антигеном S. typhi и
S. paratyphi С.
Антигенно-диагностическая схема бактерий рода Citrobacter
была предложена М. West, Р. Edwards в 1954 г. и включала
32 0-группы и 87 Н-антигенов в 75 комбинациях. В последую-
щем эта схема была дополнена J. Sedlak, М. Slajsova (1966,
1967) еще восемью новыми О-группами (037—044), а к 1969 г.
она включала 42 0-группы и более чем 90 Н-антнгенов. Основ-
ные О-антигены обозначают арабскими цифрами, парциаль-
ные — строчными буквами латинского алфавита, которые ука-
зывают на то, что этот парциальный антиген является частью
О-антигена. Н-антигены обозначаю’ арабскими цифрами. О- и
Н-антигены являются простыми или комплексными, содержащи-
ми 2 или 3 парциальных антигена, в том числе общими для мно-
гих групп. Перечень известных ныне О- и Н-антигенов, имеющих
диагностическое значение, представлен в табл. 66.
Наличие перекрестных реакций у Citrobacter с сыворотками
к другим энтеробактериям свидетельствует о существовании
родства между самими бактериями цитробактер с одной сторо-
ны и сальмонеллами и эшерихиями с другой [Рагннская В. П.,
1973; Edwards Р., Ewing В., 1955, 1962; Sedlak J., Slajsova М.,
1967]. Примеры родства О-антигенов представителей рода Cit-
robacter и Salmonella приведены в табл. 67.
Определение сероваров возможно у С. freundii при помощи
специфических О- и Н-сывороток в реакции агглютинации на
стекле в соответствии с приведенной антигенно-диагностической
схемой этих бактерий. Первоначально культуру испытывают с
поливалентными О-сыворотками, каждая из которых включает
антитела к антигенам ряда О-групп.
168
Таблица 66. Антигенно-диагностическая схема бактерий род i Citrobacter
О-группя О -RiiTWiemiMft комплекс: Н-кнтн1ен
О1 la. lb. I'. 1 1,2; 14,15,16: 21,25,26; 21.25,27; 39
02 2а, 1Ь 1,2 1,5,6; 7,8,10; 8,10,11; 14,15,16; 13,
17; 21.22; 23.28; 32,34; 35,37,39
03 За, ЗЬ, 1с 4,5; 5.6; 7,8.10; 8; 8,9; 9.13,14; 14,15,
16; 13,17; 21.22; 21,23; 21,24; 21,25,27;
9,29,30; 9,29,31; 32,33; 32 34; 39; 47; 90
04 4а, 4Ь 4.5; 5,6; 7.8.10; 9,13,14; 13,18,19; 19,20;
9,29,30, 9.29.31; 32;34; 44,45; 44,46; 95
05 5я, 5b, 4Ь 53,54; Г.3,73; —
Об 6, 4Ь, 51» 72; 54
07 7, ЗЬ, 1<- 4,5; 7.8,10; 8,9; 9,13,14; 21,22; 21,23;
21,25,27; 32,33,39; 68
8а, 1 1.2; 5.6; 8.12; 9,13,14; 9,13,15; 21,22.
21,25.27; 9,29,30; 32,33; 39,53,55; 67
08 Яа, 8Ь 1.2; 8,12; 9.13,14; 21,25,26; 21,25,27,35; 37
8а. 8с 5,6; 9.13,14; 13,17; 21,25,27; 32,33; 35.
37; 76
09 9а, 91» 1,2; 2,3; 4,5; 8,9; 13,17; 21,25,26; 32,33;
32,34; ТО.48
OIO Ю,9Ь 13,17; 9,29,30; 48; —
ОН 11 9,13.14; 14,15,16; 32,33; 35,37; 35,36;
38; 77.78; 83
012 12а, 12b 5,6; 13.17; 35.36; 57; 9,29,31
12а, 12с 62,5.
013 13 5,6; S0; 65; 66; 69
014 14 40,41; 61
015 15 13.1Я.1Ч; 21,22; 32,34
016 16 21,24; 58
017 17 21,24; 44,45; 75
018 18 56
019 19 14.15.16; 87,74
я 120 20 10,41. 43
021 21а, 21b 60; 9,29,31; 40,41; 44. 45; 53,54; 21,24
022 22 64
023 23 52; 41,97
< >24 24 49,51; 85
025 25 35,36. 38
026 26 49,50, 5°
027 27 40,41
028 28, 1с 70
029 29 8.10,11; 40,42; 74; 75; 77,78; 77,79; 77,
80; 77,88; 82; 83; 84; 85; 96; 87; —
ОТО ТО,21b 76; 35,37; 89
031 31 71
032 32 23,28
033 .33 87
034 34 68
О 15 36 91
036 36 35.36; 54,73
037 37 1.5*
038 38 92
039 39 61; 94
040 40 76
041 41 93
042 42 63: 98
• Н-лнтнген идентичен Н-янтнгену 1,5 сальмонелл
169
Таблица 67. Родство между О-антигенами Citrobacter и Salmonella
Огруппы Citrobacter О-антигены Salmonella Серовары Salmonella О-группы Citrobacter О антигены Salmonella Серовары Salmonella
Ci 3 41 S. waycross Ci 23 18 S. cerro
Ci 9 30 S. urbana Ci 26 21 S. ininnesota
Ci 11 40 S. riogrande Ci 37 48 S. djakarta
Ci 12 44, 57 S. niorembe, S. locarno Ci 38 Ci 39 8, 20 3, 10 S. kentucky S. anatuin
Ci 14 38 S. Inverness Ci 40 57 S. locarno
Ci 19 6, 14, 25 S. onderste- poort Ci 41 Ci 42 55 54 S. tranoroa S. nccle
Ci 20 17 S. kirkee Ci 43 28 S. dakar
Ci 21 Ci 22 6, 14, 24 4, 5 S. carrau S. paratyp- hi В Ci 44 35 S. adelaide
Перечень и обозначения поливалентных О-сывороток, выпус-
каемых в СССР и содержащихся в них антител к отдельным
О-антигенам, представлены в табл. 68.
При работе с поливалентными сыворотками целесообразно
начинать с сывороток Ci ОА, Ci OD и Ci OF в связи с тем. что
Citrobacter соответствующих групп встречаются в стране наиоо-
лее часто.
При положительном результате реакции агглютинации с од-
ной из поливалентных сывороток продолжают серологическую
идентификацию культур с сыворотками к О-аптигенам, входя-
щим в состав поливалентной смеси. При получении положитель-
ного результата реакции агглютинации с одной из указанных
сывороток устанавливают принадлежность штамма к серологи-
ческой О-группе. При агглютинации культуры одновременно
с двумя или тремя поливалентными сыворотками, содержащи-
ми общие антитела, культуру дополнительно испытывают с со-
ответствующими факторными сыворотками и на основании по-
лученных данных определяют антигенную структуру штамма.
Например, изучаемая культура агглютинируется одновременно
двумя сыворотками (О8а, 8Ь и 08а, 8с), в этом случае кулыуру
проверяют с факторными сыворотками 08b и 08с. Если культу-
Та блица 68 Поливалентные сыворотки для бактерий рода Citrobacter
Групповые
сыворотки
Агглютинины к О-янтигенам
Ci OA la, lb, 1c, 2a, 3a, 3b, 4a, 4b, 5a, 5b, 8a, 8c
Ci OB 9a, 3b, 10a, 10b, 11, 12a, 12b, 12c, 13, 14
Ci ОС 7, 3b, 1c, 16, 17, 18, 19, 20
Ci OD 21e, 21b, 22. 23. °4. 26
Ci OE 21a, «я 29, 30, 31, 32
Ci OP 33. 34, 35. 36, 37
Ci OG 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44
170
ра ие агглютинируется сывороткрм 08b ио агглютинируется сы-
вороткой О8с, то она содержит антигены 08, 8с, В том слу-
чае, если культура агглютинируется сывороткой 08b. но не дает
агглютинации с сывороткой О8с, она содержит антиген 08а, 8Ь.
После установления О-группы определяют Н-антиген с ис-
пользованием поли- и моновалентных I I-сывороток. Для опреде-
ления О- и II антигена в реакции агглютинации на стекле ис-
пользуют 18—24 часовую агаровую культуру. Реакцию прово-
дят общепринятым способом. Серологический вариант бактерий
Citrobacter устанавливают по сочетанию выявленных О- и Н-ан-
тигенов. Антигенное строение < ilrobacter обозначают формулой.
Например: 03?; ЗЬ; 1с:Н21; 22 или сокращенно — За; ЗЬ;
1с: 21; 22.
Таким образом, принадлежность выделенного штамма к роду
Citrobacter и определенному серовару устанавливается на осно-
вании изучения его биохимических свойств и антигенной струк-
туры.
РОД KLEBSIELLA
Клебсиеллы известны как в< >збудителн заболеваний дыха-
тельных путей: пневмонии, рнносклеромы и озены. В последние
годы их выделение”описано при заболеваниях урогенитального
тракта, мозговых оболочек, г таз, суставов н позвоночника, при
различных гнойно-септических осложнениях, а также при ост-
рых желудочно-кишечных заболеваниях. Клебсиелл считают
возбудителями внутрибольничных инфекций, различных заболе-
ваний новорожденных. При чгом отмечено их выделение с рук
персонала отделений, в том числе операционных, с мочевых ка-
тетеров, из растворов для переливаний и аэрозолей, и нищи и
в пищеблоках больниц, а также из воздуха и с предметов окру-
жающей среды в отделениях стационаров, в том числе с буты-
лочек и сосок для кормления детей, с пеленальных столиков,
кранов, из воды цветов и т. д.
Доказана этиологическая роль клебсиелл при остром первич-
ном сепсисе с определенным клиническим симптомокомнлексом
(с явлениями менингоэнцефалита, пневмонии, гломерулонефри-
та и геморрагическим синдромом либо без менингоэнцефалита
с преимущественным поражением органов желудочно-кишечного
тракта). Предложено рассматривать заболевания, вызываемые
клебснеллами, протекающие ио типу острого сепсиса или ло-
кального поражения отдельных органов, как самостоятельную
нозологическую форму—клебсиеллез, подлежащую учету и ре-
гистрации как любое инфекционное заболевание [Киселева Б. С.
и др., 1973; Красноголовеп В. Н., Киселева Б. С., 1982].
Кроме того, клебсиеллы описаны как возбудители различных
заболеваний животных- мастита, пневмонии, септицемии коров,
свиней лошадей, обезьян. Они широко распрострпнеиы также
в природе: почве, воде, цветах, зернах, семенах, овощах, выделе-
171
ны из морской и питьевой воды, молочных продуктов. Клебсиел-
лы найдены как в почвах пустынь, так и воде антарктического
озера, в древесине лесных деревьев и в стоках текстильного
производства, в сахарном тростнике и т. д. Такое широкое пов-
семестное распространение клебсиелл называют экологической
загадкой, и связано оно, тто-видимому, с особыми биологически-
ми свойствами этих микроорганизмов — наличием капсулы, ко-
торая, возможно, обеспечивает их устойчивость ко многим фак-
торам окружающей среды (антибиотикам и дезинфектантам,
низким и высоким температурам, ультрафиолетовому облуче-
нию).
Патогенность клебсиелл была известна с момента их описа-
ния. Так. немецкий исследователь Е. Klebs (1875) обнаружил
овальные «кокки» — monas pulmonale — в бронхиальном секре-
те, легких, почках и жидкостях мозговых желудочков людей,
умерших от крупозного воспаления легких, осложненного менин-
гитом, но не сумел выделить микробы в чистой культуре. Нача-
ло открытия клебсиелл длительное время связывали с имрнем
Фридлендера [Friedlander С., 1882], который выделил из экссу-
дата пневмонического очага больного, умершего от пневмонии,
типичные микроорганизмы и описал их свойства: наличие кап-
сулы и гроздевидный характер роста в желатине, а также пато-
генность для лабораторных животных — белых мышей и мор-
ских свинок. Позднее русский исследователь К- Ф. Флеров
(1895) на основании собственных экспериментов и анализа опуб-
ликованной к тому времени литературы приходит к выводу, что
микроорганизмы, описанные Фридлендером, являются не только
специфическими возбудителями крупозной пневмонии, но и
«микробами нагноения, способными вызвать гнойно-септические
процессы». Подтверждает это мнение и перечень наименований,
под которыми клебсиеллы описаны в разные годы: Pneumo-
coccus Friedlander, Вас. capsulatus septicus Banti, Вас. endocar-
ditis capsulatus Weckselbaum, Вас. septicaemie mucogene hominis,
Вас. enteritidis mucosus и др.
Из общего числа более чем 60 наименований вначале приня-
тым было «палочки Фридлендера», в дальнейшем переимено-
ванные в клебсиеллы (по предложению Trevisan).
Классификация и номенклатура. Клебсиеллы объединены в
род Klebsiella, относящийся к трибе Klebsielleae по всем сущест-
вующим классификациям энтеробактерий. В «Определителе бак-
терий Берги» (1974) представлено 3 вида: К- pneumoniae,
К. rhinoscleromatis, К. ozaenae. Такой классификации рода при-
ерп.ва члСЬ ТГ"В1'цу1Щге“<ЯгеП1ба'Леты в области изучения клеб-
сиелл [Kauffmann F., 1966; Edwards Р. R., Ewing W. Н„ 1972;
0rskov I., 1974]. Кроне того, описано значительное число видон,
таксономическое положение которых дискутируется (табл. 69).
Английской шкочой исследователей [Cowan S. Т. et al., 1960]
была предложена классификация, в которой сделана попытка
отделить виды клебсиелл, вызывающих заболевания легких
172
Таблица 63, Классификационное положение отдельных видов рода Klebsiella
Автор, годы F. Kauffmann, 1966: W. Н. Е vlnit, I97S: Р R. Е’1» irds. У Н. Е .Ini. 1972; I. Зга- kov, 1974* S D Hcnr ksen. 19 9. 1952 S T Cowan et a!.. I960; S. T. Cowan. 1974 S. Slopek et el.. 1967: I. Durlako- wa et al.. 967 S Bascomb et al.. 1971 V B. Sker- man et al.. I960 А. П. Красили иико*. 1975 Б. С. Кисе- лем, I9S2
К. pneumonia
К. pneumoniae
К. pneumoniae
К. pneumoniae
К. pneumoniae
K. pneumo-
niae
К. aerogenes
К. aerogenes
К. aerogenes
K. aeroge-
nes/oxytoca/ed-
wardsii
Kiebsiella:
К pneum iniae
K. aerogenes
Kiebsiella:
K. fricdiSn-
deri
K. edwardsii
var. edwardsii
(K. edwardsii)
K. edwardsii
var. atlantae
(K. atlantae)
К. ae'-ogenes
var. edwardsii
К. pneumoniae
var. atlantae
Класс!
K. oxytoca
K. unnamend
К. oxytoca
К. oxytoca
К. rhinoscle-
romatis
K. rhlnoscle-
romatis
K. rhinosclero-
ma Js
K. rhinosclero-
matis
K. unnamend
K. mobilis
K. rhinoscle-
roma tis
K. mobilis
K. rhino-
scleromatis
К ozaeni е
К. ozaenae
К. ozaenae
К. ozaenae
К. ozaenae
К. ozaenae
Frischella
F. rhinosclero-
ma tis
F. ozaenae
Frischella
F. rhinosele-
romatis
F. ozaenae
Та же классификация приведена в «Определителе бактерий Берги» (1974).
Таблица 70. Характеристика видов
wan с соавт. (1960)
Тест или субстрат
клебсиелл по классификации S. Т. Co-
lo i
Фимбрии
Глюкоза (газ)
Лактоза (кислота)
реакция с метиловым красным
Реакция Фогеса — Нроскауэра
Цитрат Симонса '
Мочевина
Глюконат
Малонат
Лнэиндекарбоксилаза
Тест 44 °C
Дульцит
Условные обозначения: Л — К- аегорепеч Ра — К. ed'vardsil var. edward-
sil; Ph — К. pneumoniae; Pc — К. edwardsil var. atlantae: R— K. rhinoscleromatis;
О — К. ozaenae.
(К. pneumoniae-sensustricto, К- edwardsii, К. atlantar), от рас-
сматриваемых как сапрофиты К- aerogeues (табл. 70). Основ-
ными тестами, предложенными для отличия патоь енного вида
pneumoniae, явились реакции с метиловым'краспым, Фоге-
са — Прбскауэра, ферментация дульцита и рост в средйХ KCN.
Важно отметить, что в «Определителе бактерии Верги» в ха-
рактеристике вида К. pneumoniae представлены данные, соот-
ветствующие свойствам К. aerogenes по классификации Cowan.
В указанном руководстве не представлен также вид К. oxyto-
са, описанный в 1886 г. под названием Вне. oxytocum Fliigge
для штаммов, образующих индол. Для отнесения к этому виду
выделяемых культур, кроме образования индола, предлагается
учет и других реакций: разжижение желатина; газообразование
в лактозо-желчно-солевом бульоне при 44,5 °C; разжижение пек-
тина; образование пигмента на глюконатсодержащих средах;
использование гндроксилбензойной кислоты в качестве единст-
венного источника углерода. Особенности поветения на этих,
средах, а также опыты генетических исследовании свидетельст-
вуют о возможности выделения штаммов, образующих индол,
в самостоятельный вид [Brenner D. J., 1979].
К роду KlebsieHa предложено отнести один из видов рода
Enterobacter — Е. ac-rogenes под названием К. mobilis [Bas-
comb S. et al., 1971] В «Одобренных списках названий бакте-
рий», несмотря не продолжающуюся дискуссию, представлено
5 видов рода Kl₽bsiella: К. pneumoniae, К. oxytoca, К. mobilis,
К. rhinoscleromatis, К ozaenae [Skerman V. В. et al., 1980].
Характеристика К. rhinoscleromatis и К ozaenae значите чьно.
отличается от таковой К. pneumoniae и не совпадает с теми Kpir-
174
териями, которые соответствуют определению рода Klebsiella
в целом.
Общее, что пра, тнчески объединяет эти микроорганизмы в
один род — наличие капсулы и порядковый номер капсульного
антйгенаГОтличаются по своим клиническим проявлениям и за-
болевания, вызываемые представителями трех основных видов
рота Поэтому заслуживает внимание предложение о выделе-
нии возбудителей риносклсромы и озепы в самостоятельный род
Frischella по имени немецкого исследователя (Frisch А., 1882),
описавшего палочку склеромы в патологически измененных гра-
нуляциях и секрете верхних дыхательных путей больного этим
заболеванием (Красильников А. П., 1975].
В качестве новых видов предлагают также рассматривать
клебенелл, выделяемых из растений и почвы: К- rubiacearum,
К nodoantrum, а также К- planticola [Bagley S. Т. et al., 1981],
хотя особых ферментативных отличий эти виды нс имеют. Для
их выделения в самостоятельные таксоны нужны дальнейшие
сравни гельные исследования.
Важно отметить также, что культуры с характеристикой
К. pneumoniae («Определитель бактерий Верги») или К. aeroge-
nes (Cowan) выделяются из различного патологического мате-
риала, в том числе из лс1ких и мокроты при заболеваниях пнев-
монией. Так, культуры, выделенные из ткани легкого умерших
от пневмонии, по ивержденной наюлоюанатомическн и гисто-
логически как «пневмония Фридлендера», имели ферментатив-
ную активность К aerogenes п кроме трех известных ссрова-
ров — палочек Фридлендера А, В и С (пли К. pneumoniae К1,
К2, КЗ) —были представлены еще 10 другими сероло! вческими
разновидностями: К9, К11, КН. К16, К18, К19, К20, KG2, К64,
КЯ2 (Киселева Б. С. и др . 1382]
Несмотря на 100-летнюю историю кчебсиелл, до последнего
времени нет ясности в вопросе о наименовании этих бактерий:
клебсиеллы или палочки Фридлендера так как она названия
встречаются в литературе. При необходимости подчеркнуть па-
тогенность штаммов, вы (елейных не из легких, а из других ис-
точников, обычно приводят их обозначение (Вас. 1 riedlanderi).
По-разному обозначают культуры, выделяемые из различных
источников, но имеющие одинакова ю характеристику: К. pneu-
moniae— для штаммов из мокроты; К- aerogenes—дтя штам-
мов из других источников (мочи, испражнений, отделяемого ран,
окружающей срезы и т. д.), хотя в «Определителе бактерий
Берги» вид К- pneumoniae дан для штаммов, выделяемых из
разных источников
Парадоксальным ока «ялось, что, введя в классификацию
обозначение Kkhjiella и добавляя к нему различные эпитеты,
потеряли в названии имя Фридлендера, впервые выделившего
и описавшего эти мнкроорт анизмы Кроме того, палочки Фрид
лендера, считавшиеся патогенными возбудителями пневмонии,
а также «микробами нагноения, способными вызвать септиче-
175
ский процесс» [Флеров К- Ф-, 1895], с изменением названия на
клебсиеллы стали относить к условно-патогенным бактериям
или сапрофитам. Для патогенных бактерий, которыми всегда
считали возбудителей пневмонии Фридлендера, вначале оставп
ли термин К. pneumoniae (по классификации Cowan они также
обозначены как К friedlanderi), а в последующем, объединив
все клебсиеллы в единый вид, К. pneumoniae (Берги) стали счи-
тать их условно-патогенными представителями энтеробактерий.
В настоящее время в связи с доказанным фактом, что клеб-
сиеллы вызывают не только заболевания легких, но и другие
патологические процессы, а также имеют ферментативную ха-
рактеристику рода Klebsiella независимо от источника их проис-
хождения, мы считаем целесообразным вернуться к обозначе-
нию вида К. friedlanderi, объединив в этом названии имена
двух исследователей, впервые описавших данные бактерии в ли-
тературе. В составе рода можно выделить не только этот вид,
но и вид К- oxytoca — для штаммов, образующих индол с уче-
том только этого признака, не принимая во внимание другие
характеристики (см. табл. 70). Следует также поддержать пред-
ложение А. П. Красильникова о выделении возбудителен рино-
склеромы и озены в самостоятельный род с двумя вилами, так
как, кроме особенностей ферментативной активности, эти мик-
роорганизмы имеют и другие отличия, например разный состав
жирных кислот [Васюрснко 3. П., 1980].
Биологические характеристики. Род Klebsiella объединяет не-
подвижные, имеющие капсулу, грамнегативные, лишенные спор
палочки, неровно-овальнойформы, длина и толщина которых
колеблятся от 0,6 до 6 мкм и от 0,3 до 1,5 мкм соответственно.
Они располагаются единично, парами или цепочками. Опти-
мальная температура роста для большинства капсульных бакте-
рий 35—37 °C, предел от 12 до 43°C [Weiss R., 1981], оптимум
pH — 7,2.
Капсула обычно наблюдается у штаммов, выделенных непо-
средственно у людей или животных, однако после культивирова-
ния на питательных средах некоторые штаммы теряют способ-
ность к капсулсобразованию, другие, наоборот, сохраняют ее го-
дами. Бескапсульные варианты клебсиелл могут восстанавли-
вать капсулу после пассирования через организм животных ли-
бо через углеводсодержащие среды.
Значительное число штаммов клебсиелл образует фимбрии.
В зависимости от способности к гемагглютинации и морфологш?
фимбрии разделены на 2 типа: маннозачувствительные толстые
(6,5—7 пт) и маннозорезистептные тонкие (4,5 пт). В послед-
ние годы появились сведения о том, что фимбриальные антигены
клебсиелл подобно фимбриальным антигенам других энтеробак-
терий способствуют их адгезии к поверхности клеток, а также
механизму конъюгации и являются возможным фактором виру-
лентности [Weiss R., 1981].
Г Непременной, особенностью клебсиелл считают пышный рост_
№
и образование на питательных средах больших, влажных коло-
ний, частично сливающихся друг с другом, нередко очень сли-
зистых, выпуклых, лактозоположнтельных (К. рш. nmoniae).
Слизистый характер ^олбппАптёрёдко^связываю г с наличием1
капсулы и обычно используют при отборе колоний со сред пер-
вичного посева при поиске клебсиелл [Edwatcis Р. R.,.
Ewing W. Н., 1972; \Vei=s R. 1981, и др.]. Однако на питатель-
ных средах, обычно используемых для выделения к ибсиелл,.
они образуют наряд»' с крупными, слизистыми, выпук тыми, бле-
стящими обычные по размеру, а также мелкие, неслизш гые, су-
ховатые колонии. И хотя принято считать, что слизистый харак-
тер роста знаменует наличие капсулы, мы нередко не обнаружи-
вали се в бактериях из больших слизистых колонии при отчет-
ливой капсуле в мазках из мелких суховатых.
Объяснение этому феномену можно найти в рабов Г. Kauff-
inann (1949), который впервые описал различные формы клеб-
снелл и показал, что некоторые культуры этих бактерий имеют
тенденцию к продукции капсулы, но не образуют большого кое
лпчества слизи, друi не— наоборот:
I. Гладкие <]> о р м ы:
1. МКО— слизистая, капсульная, с О-антигеном.
2. КО — неслизистая, капсульная, с О-антигеном
3. МО — слизистая, бескапсульная, с О-антигеном.
4. О — неслизистая, бескапсульная, с О-антигеном.
II. Шероховатые формы:
1. MKR— слизистая, капсульная, без О антигена,
2. KR — песлизииая, капсульная, без О-антигена
3. MR — слизистая, бескапсульная, без О-антиген»
4. R — неслизистая, бескапсульная, без О-антигена
На продукцию капсулы или слизи влияют условия гсльтиви-
рования; продукции полисахаридной субстанции особенно спо-
собствует высокое соотношение в среде углевода п азота.
Капсульный антиген клебсиелл, хотя он и обозначен знаком
«К», не относится ни к о чной из трех разновидное ген поверх-
ностных К-антнгенов Кауфмана (А. В, L), а являет» я истиннсь
капсульным антигеном, для разрушения которого недостаточно^
температурной обработки и поэтому для получения беекапсуль-
ных вариантов нужны специальные довольно сложные методы
селекции [Киселева Б. С., 1'182; Slopek S., 1968; Edwards Р. R.,
Ewing W. П , 1972)
Доказательством наличия капсульного антигена у клебсиелл
является не феномен О-инаылютннаоельности, а определение
капсулы разными способами: в мазках, окрашенных тушью, в
реакцПп набтхзйтпгкапсулы. проводимой с гомологичной сыво-
роткой и микроскопией препаратов, в реакции капсу щной аг-
глютинации на стекле п в пробирках, при электронно микроско-
12—817
177
пическом исследовании, при исследовании в косопроходящем
•свете по Landy. Методы определения капсулы в основном при
•окрашивании отрицательные, когда капсула остается неокра-
шенной и видна на темном окрашенном фоне, и положительные,
посредством которых окрашивается сама капсула [Dugiiid J. Р„
1951; Bitton G. et al., 1971]. J. P. Duguid первый показал, что
лучшие результаты для негативного обнаружения капсулы дает
простой способ окрашивания препаратов тушью. Для проведе-
ния этой реакции вначале готовят раствор туши, разводят ее
1 : 3 дистиллированной водой, центрифугируют 15—20 мин при
2—3 тыс. об/мин, сливают надосадочный слой туши и стерили-
зуют его в автоклаве при 0,5 атм в течение 30 мин Затем на
предметном стекле смешивают 1 : 1 раствор туши с петлей су-
точной агаровой культуры, делают мазок (стеклом, как при ис-
следовании крови), фиксируют его в пламени горелки, после
чего окрашивают 3—5 мин карболовым фуксином Циля, разве-
денным 1 : 3, смывают водой и микроскоппру ют с иммерсионной
•системой. При такой модификации способа Бурри внутри неок-
рашенной зоны капсулы (К-форма), резко очерченной на тем-
ном фоне, видна окрашенная в красный цвет бактериальная клет-
ка палочковидной (Ьормы. При О-форме бактерий видны отдель-
ные микробные клетки без капсулы, неокрашенная зона вокруг
бактерий отсутствует.
Капсульные формы клебсиелл (МКО, КО, MKR, KR) не реа-
гируют с соматическими (О или R) агглютининами и. как Vi-
культуры S. typhi, инагглютинабельны в соответствующих (О
или R) сыворотках. В противоположность этому бескапсульиые
формы (МО, О, MR, R) вступают в реакцию с соматическими
агглютининами. Шероховатые (R) формы наблюдаются очень
часто у клебсиелл, даже среди шт аммов, недавно выделенных
[Edwards Р. R., Ewing W. Н., 1972), и выявляются в тех слу-
чаях, когда имеются неслизистые, бескапсульиые формы, опре-
деляемые по обычным критериям шероховатости. У клебсиелл,
как и у эшерихий, наблюдаются R-формы, особенно среди штам-
мов, выделенных из мочи.
Значительная часть клебсиелл растет на средах типа_Эндо и
Плоскирева с образованием тактозоположительных колойииГна-
поминйкППих колонии эшерихии (ЬерМейтипующих~лакт' зу, с
металлическим блеском или без него. На этих средах возможно
•образование лактозоотрицательных колоний (чаще па среде
Плоскирева). Колонии могут быть разного размера, слизистые
и неслизистые, красные, розовые, белые, прозрачные и непроз-
рачные, бесцветные, бежевые или желтые (после дние чаще на
среде Плоскирева). Имеются разная степень выпуклости коло-
ний, темные или розовые центры, белые ободки. Несмотря на раз-
ную окраску колоний на одной и той же среде, при изучении их
ферментации на средах Гисса положительная реакция в сре-
де с лактозой наблюдается в 1-е сутки. Среди штаммов, выде-
ленных со среды Плоскирева как подозрительные на шигеллы
Я 78
(от больных с диагнозом острой дизентерии), нами идентифици-
рованы клебсиеллы, дающие положительную реакцию агглюти-
нации с эшерихиозпой сывороткой 0124 : К72 (живая культу-
ра— до титра К-антнтел, гретая в том же тигре, что и живая)..
1 Jo характеру роста на питательных средах эти культуры не от-
личались от эшерихий серогрупиы 0124 : К72 и этим была за-
труднена их идентификация. Этот случай еще раз подчеркивает
необходимость установления ротовой принадлежности выделяе-
мых культур до проведения серологического типирования. По-
этому оценка роста на селективно-дифференциальных средах
для суждения о принадлежности выделяемых культур к клеб-
сиеллам имеет относительное значение С чашек первичного по-
сева следует снимать колонии различною вида, не учитывая их;
окраску или наличие слизистого роста.
В жидких питательных средах клебсиеллы растут с образо-
ванием либо гомогенной мути, либо осадка, пленки на поверх-
ности или кольца шГстеике пробирки. Появление пленки часто,
связывают с фимбриеобразуюшпми штаммами. Культуры клеб-
сиелл некоторых К-ссроваров за обычный срок инкубации в
бульоне (4—6 ч) дают очень слабый, почти невидимый рост, прч
высеве из которого на плотные питаю тьные среды, однако, на-
блюдается рост отдельных колоний, Обычно такой слабый рост
отмечается у культур с антигенами KI — Кб и у старых лабо-
раторных штаммов, длительно хранившихся на обычном полу-
жидком агаре.
В косопроходящем свете по метолу Landy независимо от на-
личия или отсутствия слизи или степени прозрачности в прохо-
дящем свете колонии клебсиелл имеют разный оттенок свече-
ния, хотя отмечено преобладание яркой розово-дымчатой окрас-
ки и гомогенной поверхности у штаммов, имеющих отчетливую-
капсулу в тушевом препарате и не прозрачных в проходящем
свете. Колонии таких штаммов могут иметь оранжево дымчатую
окраску с бежевым оттенком или яркую розово-зеленовато-жел-
тую, небольшую исчерченность.
Прозрачные в проходящем свете колонии в косопроходящем
свете светятся тускло, имеют зеленоватый или серый оттенок,
в тушевом препарате капсула у них отсутствует [Киселева Б. С ,
1982].
Помимо однородных колонии с одинаковым характером све-
чения, при исследовании этим методом наблюдаются различные
стадии диссоциации у розово дымчатых колоний отмечены от-
дельные сегменты либо края зеленого или серого цветя, как бы
обнажающие! я под розово-дымчатым покровом, что спадает впе-
чатление сползающей капсулы Па поверхности зеленых или се-
рых колоний могут быть кусочки розово-дымчатой окраски.
У таких диссоциирующих колоний в проходящем своде наруше-
ния структуры поверхности не выявляется, колонии выглядят
одинаково непрозрачными, ровными и слизистыми, т. е. типично
капсульными
12*
179 »
С х с м я 2. Селекция капсулы у к 1сбспслл
Исходная нультура
I
0,2% глюкозный бульон (4—6 ч)
I
Чашки Петри с 1,3% слабощелочным агяроы (18-20 ч)
Тушевом препарат
0,2% глюкозный бульон (4-6 ч)
I
Среда ВФА (18-20 ч)
Тушевой препарат
В тушевом препарате из этих колоний имеются как капсуль-
'ные, так и бескапсульные формы.
Для получения чистой капсульной популяции следует приме-
нять методику селекции капсулы с пассированием через угле-
водсодержащие среды (глюкозу и сахарозу) при контроле за
чистотой популяции и степенью диссоциации в косопроходящем
•свете [Киселева Б. С., 1982]. При этом культуру 1 выделенную
или хранившуюся в лиофилизированном виде или на полужид-
ком агаре) засевают вначале в 2—5 мл бульона Хоттингера с
0,2% глюкозы и инкубируют 4—6 ч при 37 °C, после чего дела-
ет высев на поверхность 1,3% слабощелочного агара в чашках
Петри таким образом, чтобы получить рост изолированных ко-
лоний. Инкубируют 18—20 ч при 37 °C, после чего просматри
вают выросшие колонии в косопроходящем свете по методу
Landy. Отбирают розово-дымчатые колонии, засевают их по-
вторно в бульон с 0,2% глюкозы на 4—6 ч и наносят на пред-
метное стекло для приготовления тушевого препарата. Затем
выросшую бульонную культуру засевают на скошенную поверх-
ность среды ВФА (Ворфеля — Фергюсона агар). Инкубация на
этой среде 18—20 ч при 37 °C, затем со среды повторно готовят
тушевой препарат. Если при этом во всех полях зрения наблю-
дается отчетливая капсула, а в косопроходящем свете — на
чашке однородные розово-дымчатые колонии, культуру с ВФА
используют для различных целей: постановки реакции агглюти-
нации, хранения и сушки культур, приготовления диагностиче-
ских препаратов. Если капсула наблюдается не во всех полях
зрения, а на чашке при просмотре в косопроходящем свете от-
мечают диссоциирующие формы, проводят дальнейшее пассиро
ванне культуры со среды ВФА высевом в бульон Хоттингера
с 0,2% глюкозы и т. д. до получения однородной капсульной по-
пуляции (схема 2).
В отличие от эталонных культур международной коллекции
клебсиелл, штаммы которой требуют постоянного контроля, пас-
180 •
сировапяя и селекции для развития и сохранения капсулы, свс-
жсвыделепные кулыуры клебсиелл при наличии диссоциации с
помощью этого метода быстро (через 1—2 пассажа) восставав^
ливают капсулу. Среда ВФА нриюдна также для хранения
культур в условиях лаборатории в течение 1 мес с последующим
пересевом, в то время как за этот же срок в обычном полужид-
ком агаре наступает диссоциация с отщеплением бескапсульных
вариантов. На обычных питательных средах клебсиеллы, не-
смотря на их известную устойчивое гь, склонны к диссоциации и
довольно быстро могут погибнуть.
Во внешней среде клебсиеллы обладают высокой устойчиво-
востью. Так, в пробах пыли, взятых при различной степени
•влажности, отмечены их сохранение до 2’/г лет [Gunder-
inan К- О., 1°72] и гибель в связи с высокой влажностью возду-
ха (53—86%) при постоянной температуре (25 °C) [Turner А.
•et al., 1973]. а также при надевании до 55СС через 30 мин
[Weiss R., 1981]
Клебсиеллы устойчивы и к действию низких температур и
вычелены нз воцы Антарктического озера при отсутствии других
представителен энтеробактерии. Выделенные в этих условиях
штаммы (как из волы озера, так и от заболевших диареей по-
лярников, использовавших волу для питья) имели диапазон тем-
пера гурного роста от +4 до I 45 СС п были способны при этом
(в том числе в условиях холодильника) образовывать на среде
Энцо обычные по морфологии колонии с однотипными фермен-
тативными реакциями при культивировании на средах «пестрого
ряда» в термо» гате (при 37 °C) в в холодильнике (при +4 °C).
Указанные особенности позволили считать клебсиелл факульта-
тивными психрофильпымн бактериями | Киселева Б. С. и др.,
19/8]
Клебсиеллы устойчивы также к д»ошфектантзм и были вы-
делены при контроле дезинфекции в O4aie кишечного заболева-
ния Они оказались устойчивыми н к ультрафиолетовому облу-
чению и были обнаружены в питьевой воде после |₽йствия бак-
терицидных ламп при ои утенши в ней эшерихии. Из этой воды
выделены те же серологические ра пювндности, что и из испраж-
нений больных диареей, ясно п.зовавшнх воду для питья [Арте-
мов Т. 3., Киселева Б. С., 1983]
Нод влиянием некоторых антибиотиков (пенициллина, цефа-
лоспоринов) па растущие культуры клебсиелл в отдельных слу-
чаях происходит образование L-форм [Buze L. В et al., 1976;
IJIhnann U., 1977] Появление их, возможно, объясняет частый
переход заболеваний, вызванных клебсиеллами, в хроническую
форму.
Клебсиеллы обладают также высокой устойчивостью к бо.ть-
шинс гву широко применяемых в медицинской практике антибио-
тиков при чувствительности в основном к некоторым аминогли-
козидным препаратам: гентамицину, тобромипину, сизомицину,
амикацину, неомицину, мономпцину, канамицину, а также к ри-
181
фампицину (у некоторых штаммов — к ампициллину) п<ри сла-
бой чувствительности к полимиксину В, цефапотину, цефалори-
дину и высокой устойчивости к пенициллину, левомицетину, тет-
рациклину, эритромицину, карбенициллину и др. В течение ряда
лет гентамицин считали антибиотиком выбора для лечения
клебсиеллезной инфекции, однако в последнее время появились
данные о циркуляции гентамицинрезистентных штаммов, особен-
но при внутрибольничных клебсиеллезных инфекциях. Высокую
устойчивость к антибиотикам считают одной из биологических
особенностей клебсиелл и объясняют этим повышение их роли
при различных заболеваниях. У эталонных штаммов Фридленде-
ра А и В, выделенных в доантибиотическую эру, обнаружена
высокая чувствительность ко всем существующим антибиотикам,
что свидетельствует в пользу другой точки зрения — появление
антибиотикорезистентных штаммов клебсиелл произошло в ре-
зультате лечения антибиотиками [Киселева Б. С. и др.. 1982].
Быстрая смена чувствительности клебсиелл к гентамицину и ри-
фампицину после лечения этими антибиотиками вызывает раз-
витие устойчивости уже после однократного курса лечения.
Устойчивость клебсиелл к антибиотикам связывают с R-плаз-
мидами, потеря которых может происходить за небольшой срок
при пассировании в бульоне. Поэтому в рамках рутинной диаг-
ностики число пассажей штаммов, исследуемых на антибиотико-
чувствительность, должно быт ь незначительным и тогда спектр
резистентности соответствует таковому у выделенного <дикого»
штамма [Dick-gieser N., 1980].
Фильтраты К. pneumoniae, содержащие стабильный токсин,
не влияют на интенсивность торможения агрегации тромбоцитов,
тогда как содержащие лабильный токсин — тормозят ее. Анало-
гичным образом действуют токсинсодержащие фильтраты
V. cholerae, S. dysenteriae 1 при отсутствии этого свойства у дру-
гих бактерий [Fumarola D. et al., 1976]. По ферментативным
свойствам представители рода Klebsiella соответствуют общей
характеристике семейства Enterobacteriaceae (табл. 71). Соглас-
но докладу Подкомитета (1963) они являются неподвижными
капсульными бактериями, ферментирующими глюкозу с образо-
ванием кислоты и газа, а также лактозу, сахарозу, маннит, са-
лицин, адонит, инозит, глицерин, целлобиозу, нерастворимый
крахмал (последние четыре субстрата с образованием кислоты
и газа). Они вариабельно ферментируют дульцит, ие образуют
индола и сероводорода, не разжижают желатин, не имеют фе-
нилалаИиндезаминазы, орнитиндекарбоксилазы, аргининдегид-
ролазы при наличии лизиндекарбоксилазы и уреазы; способны
утилизировать цитрат как единственный источник углерода, а
также малонат; растут в среде с цианистым калием; дают поло-
жительную реакцию Фогеса — Проскауэра, отрицательную —
с метиловым красным. У К. ozaenae, К. rhinoscleromatic отмече-
ны другие биохимические реакции. Некоторые клебсиеллы спо-
собны к образованию индола и разжижению желатина. Реакцию
• 182
Таблица 71. Ферментативная характеристика бактерии рода Klebsiell
Тест или субстрит Ре «цня Тест иля субстрат Реакция
Сероводород
Мг.чевнна
Цитрат Симонса
Малонат
Фенилаланиндезамииаза
Подвижность
Л гзиндекарбоксилеза
Орпитиилекарбоксилаза
Аргиниидегидроляза
Реакция с метиловым крас-
ным
Реакция Фогеса — Прос-
«а > ш.
< 'цш/м
Желатин
kfN____________s.
CAjic I4.pi! л я_Срсда. 7
Цитрат Кри iruceua
люкоза (ггз)
Сорбоза
1)-Тартр^т
Пчозит
Пульпит
Са липни
Л юнит
Рамноза
Ксилоза
Мальтозг
Сорбит
Арабиноза
Рафиноза
Целлобш за
крахмал
в среде с мочевиной у клебсиелл отмечают как замедленную и
не такую интенсивную, как у протеев, и. кроме тою, возможна
положи тельная реакция с метиловым красным и отрицательная
Фогеса — Ироскауэра у культур, принадлежащих к капсульным
тинам, традиционно включенным в род Klebsiella (К. ozaenae,
К rhinoscleroniatis).
Клебсиеллы являются более активными представителями
семеме <ва энтеробактерий и утилизирую! многие субстраты. От-
дельные отклонения, касающиеся I -2 признаков и бплее, на-
блюдаются при ферментации различных субстратов
У кулыур, выделенных на территории СССР, отмечена в ос-
новном типичная характеристика. Наиболее вариабельные реак-
ции установлены при образовании индола (19% положитель-
ных), ферментации дульцита (27% положительных), в реакции
с метиловым красным (41,6% положительных) и Фогеса —
Проскауэра (8 6% отрицательных). Некоторые атипичные реак-
ции отмечены у штаммов, выделенных из разных источников, в
основном имеющих антигены KI, К2 и К-4
Пест образования индола, считавшийся ранее дифференци-
рующим при определении принаднежности выделяемых культур
к эшерихням (ННДОЛ + ) или клебсиеллам (индол ) и предло-
женный как ведущий критерий при нДТТПифйкацнн лактозополо-
жительных штчммов [Kauffmann F., 196G], не имеет решающего
зданецця после введения вида К. oxytoca.
Ферментативная характеристика клебсиелл с учетом резуль-
татов изучения культур, циркулирующих на территории СССР,
представлена в табл. 71.
183 ~
Реакции с метиловым красным и Фогеса — Проскауэра так-
же многие годы являлись основными для определения принад-
лежности выделяемых культур к клебсиеллам и наряду с опре-
делением индола и утилизацией цитрата входят в классические
тесты IMVIC ( 1- + )-*
После работ S. Т. Cowan с со; ьт. (1960) оказалось невоз-
можным отделять К. pneumoniae (---1---F), рассматриваемые
как патогенные микроорганизмы, от условно-патогенных Е. aero-
genes (-----Ь +). По этой классификации у К- edwardsii и
К. atlantae наблюдались и другие реакции (—XX + ).
При изучении реакции с метиловым красным нами установ-
лена ее нестабильность при повторном изучении культур, хра-
нившихся в полужидком агаре и лиофилизированном виде, при-
исследовании отдельных колоний популяций, у штаммов, выде-
ленных от одного и того же больного. Это непостоянство может
объяснить противоречивые результаты при изучении этой реак-
ции разными исследователями и затруднения в связи с этим при
определении видов рода Klebsiella. Такое непостоянство явилось
характерным только для штаммов К- pneumoniae, так как у
К. ozaenae, К- rhinoscleromatis, а также у других энтеробакте-
рий характерным было наличие положительной реакции с мети-
ловым красным и отрицательной Фогеса — Проскауэра. У штам-
мов К- aerogenes и Е. cloacae результат реакций также был ста-
бильным: с метиловым красным — отрицательным, Фогеса —
Проскауэра— положительным. Таким образом результат этих;
реакций не может быть основополагающим при определении
принадлежности выделяемых культур к клебсиеллам.
Основные тесты для дифференциации наиболее сходных по
ферментативной характеристике бактерий, имеющих близкое ан-
тигенное родство (эшерихии и клебсиеллы), представлены в
табл. 72.
Таблиц 72. Основные тесты для дифференциации К. pneumoniae и Е. co-
il по биохимическим свойствам
Тест или субстрат Е. coll К. pneumo- niae
Цитрат Симонса •—
Мочевина (по Преусу или Кристенсену) Малонат —
-
Адоннт + +, —
Инозит + +
Реакция с метиловым красным +
Реакция Фогеса — Проскауэра Пн дол
+. -
Подвижность +. -
* I — нндол; М — метиловый красный; V — Фогеса — Проскауэра, С —
цитрат.
184
Таблица 73- Основные ферментативные отличия отдельных представителей
трибы Klebslelleae
Тест или субстрат К. pneu- moniae Е. cloacae Е. вего- gen« Hafnla Serrat la
Малонат 4- + 4-. - X —
Л нзнндекарбокенда за 4- — 4- 4- 4-
Аргиннндегидроляза — 4- — —
4- 4- 4-
Д1ндод>
Мочевина ((Тр — X
Адонит — X
Арабиноза + 4- 4- 4- —
Дульцит -. 4- X 1- — —
Рапноза + -1- 4- 4-
Инозит 4- — 4- — X
Сорбит ^-4 4- 4- — 4-
Лактоза Gp 4- 4- —. х 4-
Рафиноза 4- 4- — —
Салицин + X + X 4-
Желатин — (4-) —— 4-
Подвижность 4- X
Наличие пигмента — —• — X*
• Красный пигмент у S. mercescens.
Основные различия ферментативных свойств представителей
трибы KlebsMIeae представлены в табл. 73.
К. rhinoscleromatis значительно отличаются от других клеб-
сиелл и имеют больше сходства с шчгеллами, для дифференциа-
ции от которых могут быть использованы определенные крите-
рии (табл. 74).
Таблица 74. Дифференциация К. rhinoscleromatis и Shigella [Ewing W. II., 1975)
Тест нлн субстрат К. fhlnns< ie- rotnall* Shigella
Индол KCN Орнитин текярбокси.чаза Ляктотя Сахароза Салицин, адонит, инозит КГ1'ЛОТЭ 1 (еллобноза Эскулин Ма тонат 1- X 4 . ( 1 ) 4- 4- 4- 4- 4-. - |Х 1 1 1
Для дифференциации штаммов энтеробактерий, имеющих
сходные реакции на среде первичной дифференциации с клеб-
сиеллам и, можно использовать ряд тестов (табл. 75)
В связи с нечоз томностью применения классических тестов
1MV1C для определения принадлежности выделяемых культур
185
Таблица 75. Биохимические тесты для дифференциации К. pneumoniae от
других энтеробактерий, не образующих сероводород, не расщепляющих моче-
вину в среде типа Олъкеннцкого, вариабельно ферментирующих глюкозу (с га-
зом) и лактозу
Тест или субстрат
Цитрат Симонса
Мочевина (по Преу-
су или Кристенсену)
Малонат
Подвижность
Лизиндекарбокси-
лаза
Орнитиндекарбокси-
лаза
Индол
Реакция с метиловым
красным
Реакция Фогеса —
Проскауэра
Желатин
Инозит
Дульцит
Сорбит
Рафиноза
Рамноза
-.(+) (+)
-}-37оС
—22°С
X 37°С X 37°С
+22°С
к клебсиеллам нами разработаны новая формула и нумериче-
ский ключ к ней, позволяющие достаточно четко дифференциро-
вать клебсиеллы от других энтеробактерий (табл. 76).
В основе этой формулы заложены основные дифференцирую-
щие тесты, описанные в разделе дифференциации энтеробакте-
рий: сероводород (H2S), орнитиндекарбоксилаза (О), подвиж-
ность (Motility — Мо), фенилаланиндезаминаза (phenylalanine
desaminase — Р), мочевина (Ureasa — U), цитрат Симонса (cit-
rate— С), малонат (Malonate — М), инозит (Inositol — I), ли-
зиндекарбоксилаза (Lysin decarboxylase—L).
К формуле составлен нумерический ключ, в основе которого
дана следующая оценка тестов: сероводород— 1280, орпитинде-
карбоксилаза — 640, подвижность — 320, фенилаланиндезамина-
за— 160, мочевина — 80, цитрат Симонса—40, малонат — 20,
инозит— 10, лизиндекарбоксилаза — 5. Все показатели положи-
тельных результатов суммируют и определяют принадлежность
выделенной культуры: если сумма результатов соответствует ну-
мерическому коду, выделенную культуру относят к соответст-
вующему виду
Антигенная структура и серологическая идентификация. Се-
рологическую идентификацию клебсиелл проводят на основе оп-
186
Таблица 76 Форпула HOMjPUCMIL для дифференциации клебсиелл от
других .нтеробгктерпЛ
Вид энтеробяжтерий
Н О Mo Р и ' С MIL
Нумеричсскпй код (наи-
более частое сочетание
цифровых показателей)
К. pneumoniae
К- ozaenae
К. rhinoscleromatis
Е cloacae
Е atrogenes
Н. alvei
S. marccscenr
S. liqucta-lens
S. ruuidaea
P. vulgaris
P. niirahilis
P. morganii'
P. rettge"i
P. inconstans
E. coli
Shigella (кроме S. son-
nei)
S. sonne1
Salmonella
C. ireundii
€ diversus
E. tarda
Y. pseudo! ub< rculosis
Y. enterocoliliCo
Erwinia
155
135, 55, 95. 125, 130
30, 10
1100
1035
1025. 706, 985, 665,
1020. 645. 965
1055. 1015, 1085, 1005
1095, 1015, 1085, 1090
475, 395, 435. 455, 465,
470
188!.. 1840
2520
1200
610
530, >20
965. J25, 960, 645, 325,
5
0
640
2315. 1655. 2305
238* 1680, 1600, 1360
1100, 1620
1605
400 Г0
1010, 720
1830, 1810, 1820
релелсния капсульных (К)-антигенов, хотя аналогично другим
энтеробактериям они имеют соматические антигены О и R.
Важность определения К-антигена продиктована тем, что свеже-
выделенные культуры обладают капсулой, а получение бескап-
сульных форм для определения О-антигена затруднено и может
приводить к образованию измененных структур, шероховатых
вариантов [Kauffmann F., 1966; Edwards Р. R„ Ewing W. Н.,
1972].
Гкрвое серологическое разделение клебсиелл провел J. A. Ju-
lianelle (1926), который среди капсульных бактерий, выделен-
ных Фридлендером при пневмонии, обозначил 3 антигена: А, В
и С и гетерогенную <Х» группу. В дальнейшем антигены D, Е, F
были определены среди культур, выделенных при озене [Gas-
tings W., Snijders Е., 1936]. У культур с характеристикой возбу-
дителей рнносклеромы был найден тот же антиген, что и у па-
лочек Фридлендера типа С. Позднее эти антигены сталь обозна-
чать арабскими цифрами Эта нумерация сохранена до настоя-
щего времени, причем один и тот же антиген КЗ оказался у
клебсиелл разных видов, различающихся по ф« рментативной ак-
187
тивности. В дальнейшем антигены К73, К75—К78 изъяты из
числа эталонных, так как К73 оказался Е. aerogenes, осталь-
ные— антигенно-родственными ранее описанным: К75—К68;
К76—К46; К77—К39; К78—К15.
Определение О-антигенов менее важно, чем К, так как число
их по сравнению с капсульными антигенами невелико. Выделе-
ние О-форм затруднено по причине термостабильности капсулы;
при одном и том же О-антигене имеется множество К-антигенов.
Для типирования по О-антигену культура должна быть четко
бескапсульной, иначе агглютинация может быть смешанной (О-
и К-агглютинация) за счет сохранения капсульной субстанции.
Первые 3 О-антигена клебсиелл описал F. Kauffmann
(1949), который рекомендовал для получения бескапсульных
культур пассирование в течение длительного времени через 50%
желчный бульон (1966), однако получение таким путем свобод-
ных от капсул форм вызвало значительные трудности. Антигены
04 и 05 описаны позднее I. Orskov (1954). Из числа 12 описан-
ных О-антигенов не все могут быть обозначены, так как 011
считают идентичным 04; 06 идентичен О1; 08 и 09, вероятно,
можно отнести к 02. Антигенно-диагностическая схема клеб-
сиелл, представленная с учетом К- и О-антигенов, описанных в
литературе, дана в табл. 77.
Таблица 77. Антигенно-диагностическая схема клебсиелл [Киселева Б. С.,
1982; Kauffmann F., 1966; Orskov F., Orskov I., 1978]
О-антиген К-антиген
1 1, 2, 3, 7, 8, 10, 12, 16, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 26, 29, 30, 32, 34, 37, 39, 41, 44, 45, 46, 47, 62, 63, 65, 66, 68, 70, 79
2 3 4 5 6(01) 7 8(02) 9(02) 12 0-антиген не установлен пли является R-антиге- ном 2, 3, 4, 5, 6, 8, 27, 28, 35, 43, 59 11, 25, 31, 33, 48, 49, 50, 51, 53, 54, 55, 58, 74 15, 42 57, 61, 71 64 67 69 72 80 9, 13, 14, 17, 18, 36, 38, 40, 52, 56, 60, 81, 82
Примечание. В таблице отсутствуют антигены К73, К75—К78, идентичные ранее
описанным, и связанные с ними антигены 010 и OIL
Так как один и тот же О-антиген может сочетаться с раз-
ными К-антигенами, могут иметь место перекрестные реакции
за счет О-антигена в OK-сыворотках, причем при повторных ис-
следованиях, если диссоциирует популяция штамма, реакции
могут не воспроизводиться. В таком случае может оказаться по-
лезным применение реакции набухания капсулы для доказа-
188
тельства, чю реакция идет за счет К-антител. Судя hq данным!
литературы, при типировапии культур клебсиеллсзцыми сыво-
ротками наблюдается множество непостоянных перекрестных,
реакций агглютинации и набухания капсулы, невоснроивводи-
мых даже в руках одного исследователя, тем более разных [Са-
sewcll М. W., 1975; Orskov F., 0rskov I., 1978, и др.| Поэтому
никто из авторов, изучавших антигены ктебсиелл и получавших,
к ним диагностические сыворотки, ие писал об антигенном род-
стве между К-антнгенами клебсиелл. Отмечены лишь различ-
ные результаты реакции агглютинации (или набухания капсу-
лы), наблюдаемые при исследовании сывороток или штаммов.
F. 0rskov и I. Orskov (1978) подчеркивают, что число пере-
крестных реакций между К-антигснами клебсиелл велико и оно-
варьирует даже от кролика к кролику, в сыворотках, получен-
ных в разное время, различными авторами и в разных учреж-
дениях, чю невозможно дать таблицу перекрестных реакций*
(таблицу антигенных взаимосвязей и антигенного родства). Ав-
торы приводят только наиболее частые реакции штаммов с
клебенеллезными сыворотками, наблюдаемые в их лаборатории:
I -6; 2—69; 2—13—30; 3-68; 5- 46; 7—10; 8—74; 11—21; 11 —
33; 14—64; 13—78; 18 -41; 20-51; 22—37; 24—43; 26 -74; 27—
46; 28—46; 29—42; 30 69, 33—35; 41—79; 41—81; 65—80 и
70—80.
Даже при использовании коммерческих сывороток Дифко-
(США) выявлены диагностически значимые титры в одной сы-
воротке к разным штаммам: КП с КП (1 : 32) и с K2I (1 : 16),.
К12 с К12 (1:8) и с К29 (1:8), К64 с К64 (1 : I*.) и с К14
(1 : 16) [Casewell М. W.. 19/5]. Конечно определение К-антиге-
на невозможно при использовании таких сывороток ни в реак-
ции агглютинации, ни в реакции набухания капсулы. Анализ-
этих реакций показывает, что объяснить их за счет О-антител
невозможно, так как многие культуры, дающие положительную
реакцию, в том числе набухания капсулы, принадлежат к раз-
ным О труппам (например К13 п КЗО, KI 1 и К61, КП и К21).
С помощью селекции капсульною антигена, используя для
иммунизации животных и контроля специфичности сывороток в-
реакции агглютинации штаммы в чистой капсульной форме, мы.
получили специфические К-сыворотки, дающие только гомоло-
гичную реакцию агглютинации, не нуждающиеся в подтвержде-
нии реакцией набухания капсулы [Киселева Б. С., 1982]. Этими-
сыворотками установлено незначительное число гетерологичных,
реакций, как правило, повторяющихся при повторных иссле-
дованиях и при использовании свежевыделенных культур в кап-
сульной форме. Эти опыты позволили выявить антигенные связи!
некоторых К-антигенов: односторонние—К1 (Кб); К13 (КЗО);
К22 (К23); КЗО (К2); К58 (KI); К58 (Кб); KG1 (К7); К61 (КЮ);.
К72 (К70); К80 (К70) и двусторонние—КП и К21; К14 и К64.
Удалось избежать многочисленных перекрестных реакций
при применении специфических К-сыворчток, приготовленных к
189'
селекционированным К-тест-штаммам, и культур, находящихся
в чистой капсульной форме.
При исследовании некоторых свежевыделенных культур оп-
ределить К-антиген не удается, так как они не агглютинируют-
ся К-сыворотками, при этом в тушевом препарате у бактерий
капсула либо не выявляется, либо очень маленькая и определя-
ется в единичных полях зрения. В ряде случаев определить
К-антиген можно после 1—2—3-кратного пассирования таких
культур по разработанной нами методике селекции капсулы
(бульон с 0,2% глюкозой и среда ВФА) и без метода косопро-
ходящего света (при отсутствии необходимого оборудования).
При проведении реакции агглютинации клебсиелл с клеб-
сиеллезными К-сыворотками следует соблюдать правила их по-
становки и учета результатов. Так, при реакции агглютинации
на стекле большую каплю сыворотки наносят на предметное
стекло и в непосредственной близости от нее растирают непол-
ную петлю культуры в капсульной форме, выращенной на ага-
ре ВФА, круговыми движениями медленно их соединяют и сра-
зу учитывают результат. При внесении избытка кулыуры вы-
раженность реакции резко падает, так же как при наличии
большого количества сыворотки. В качестве контроля использу-
ют каплю изотонического раствора натрия хлорила, в которой
растирают культуру (вышеуказанным способом). При положи-
тельном результате быстро (в течение 30—60 с) наступает спе-
цифическая капсульная агглютинация с образованием агглюти-
ната, который в отличие от мелкозернистого О-агглютината име-
ет вид пластины, крупных хлопьев или грубых тяжей. Иногда
реакция настолько быстрая, что происходит в ушке петли и ее
можно не заметить. Если результат неясен, к смеси сыворотки
•с культурой добавляют каплю изотонического раствора натрия
хлорида, после чего характер осадка вырисовывается более чет-
ко. При отрицательной реакции смесь остается гомогенно мут-
ной, как и в контроле.
При неясных результатах (наличие агглютинации в 2—3 сы-
воротках), а также при отрицательном результате культуры пас-
сируют для получения полноценной капсульной популяции в со
•ответствии с изложенной методикой (при возможности с «тбо
ром колоний соответствующей окраски и морфологии в косопро-
ходяшем свете). Тнпнрование капсульными сыворотками повто-
ряют и, если реакция по-прежнему наблюдается с несколькими
•сыворотками, проводят пробирочную реакцию агглютинации в
разведениях 1 : 2 и 1:4, используя в качестве антигена взвесь
суточной агаровой культуры со среды ВФА в изотоническом
растворе натрия хлорида (живая культура) или с добавлением
к раствору 0,5% формалина (убитая культура). Пробирочную
реакцию ставят в объеме 1 мл в узких агглютинацнонных про-
бирках. сыворотку разводят изотоническим раствором натрия
хлорида в возрастающих двукратных разведениях, добавляют
в каждое разведение по 1—2 капли взвеси культуры. Контроля
’190
сыворотка в минимальном разделении в том же объеме и взвесь,
культуры в том же растворе, что в реакции агглютинации. Учет
результатов макроскопически после 18 20 ч инкубации при
37 °C. При положительном результате наступает просветление-
смеси и образование на дне пробирки агг.тютината. всплываю-
щего при легком встряхивании в виде диска, тяжей пли «зонти-
ка», распадающегося на хлопья при сильном в* |ряхпвании.
При отрицательном результате осадок не образуется, но иногда
его видимость создает слизь, которая при встряхивании легко
разбивается с образованием гомогенной мути. Учет реакции —
невооруженным глазом без ai 1 лютнноскона. При затруднении
оценки реакции на стекле положительной считается только реак-
ция при образовании в пробирках специфического капсульною-
arr.iioTHiiaia в одной из сывороток.
Причину нерекрес<ных реакций в клеГц неллезных сыворот-
ках усматривают и в том, что капсулы разных К антигенов име-
ют принципиально сходное строение [Weiss R., 1981] и состоят
из большого числа полисахаридов, построенных in отдельных
сахаров, чаще от 2 до 4, и связанных между собой гексуроно-
вых кислот, преимущественно глюкуроновых, реже галактоз ро-
ковых. Основу сахаров составляют галактояя, глюкоза, манноза,,
фукоза н/илн рамноза [Nininiich W, 1968, 1971]. В отдельных
К-аптпгенах имеются в различном количестве штаммоспеппФн-
ческие от татки формиата. ацетата и пирувата [Siitli* i land I \V.,
1971; Niiiiiiiich W 1979]. О антигены клебсиезл также почша-
хариднои природы, отнако иначе построены, чем К-антин-пы.
Харак1ерпые для К антигена гексуроновые кислоты у них пол-
ностью отсутствуют, но имеются типичные составные части
О-антигена: КДО, гептоза и глюкозамип. Наличие или отсутст-
вие определенных сахаров может служит!, критерием уставив ie-
ния принадлежности антщепа к К пли О. а также степени чис-
тоты полисахаридных препар нов.
Более четкие данные нмепнея об апнпеппых связях К иди
О-антin снов клебсиелл с пруими знтгрпбяктернями или пред-
ставителями семейства иневмокок; <>в (табл. 78).
Определение эпидемиоло1нческих маркеров. Несмотря на та-
кие м< годы тиинрования, как капсульные серо и фаготпппрова-
ние, TiiiPiiрованне по биоварам и клебеципам, энидсмио югпя
клебене.тлезной инфекции изучена мало
Особую надежду возлагают на серотппировяние, которое, по-
сравнению с другими методами считают наиболее пенными при
выяснении эпидемиологической ситуации, особенно при вс три-
больничных инфекциях (Rennie Р R. е( al., 19/8, Popo\ni AV
et al., 1979; Riser I- et al., 1'181].
Большинство работ посвящено выяси* ипю возмоя ностн при-
менения в эпил< миологических целях простого метола определе-
ния биоваров | Kaiiflmaiin F., 1954; 0iskov I., 1955; Kalnzew-
ski S., 1965; Dtirlakowa I. et al., 1967; Richard C., 1973; Pieac-
Mursic P. et. al , 1974J
191-
Таблица 78. Антигенные взаимосвязи клебсиелл с другими видами
аптеробактерпй и пневмококком
Антигены клебсиелл Антигены других микроорганизмов Автор, годы
K7 K8 К10 КН 01 03 04 05 ’К? (антигенно- родственный) К2 К2, К8. К9 К2, К9. К32 К34, К47, К48 К15, К24, К31 К39, К42, К59 Е. coli К55 родство Е. coli К34 родство Е. coll К39 идентичность Е. coli К37 родство Е. coli 019 родство Е. coli 019ab идентичность Е. coli 09 идентичность Е. coli 020 перекрестное род- ство Е. coli 08 идентичность Е. coli К72 перекрестное род- ство S. paratyphi В (М-антиген) Pneumococcus 2,3 Pneumococcus 2 Pneumococcus 19 Pneumococcus 10 F. Kauffmann, 1949 » » I. Orskov, 1954 Б. С. Киселева, 1982 (цнт. Perch, F. Kauff- mann, 1966) Avery et al., C. J. Lee et al., 1081 F. Kaulhnann, 1966 C. J. Lee et al., 1981 M. lleidelberger et al., 1975, 1976, 1978
При сравнении большого числа описанных схем биохимиче-
ского тппирования клебсиелл наиболее удобной нами признана
схема Richard (1973), основанная па изучении ферментации
всего 3 субстратов: дульцита, сорбозы и D-тартрата (табл. 79).
Табл и ца 79. Определение биоваров [Richard С., 1973]
Тест-субстрат Биовары
a b c d Da Db De Dd
Дульцит — + + -J- . +
Сорбоза •— — + + 1-
D-lap грат + — + *— + — “I —
Одновременное применение серотипирования с определением
биовара, а если возможно и фаговара, дает возможность допол-
нительной дифференциации клебсиелл и повышает значение
гкомплексного исследования для эпидемиологического анализа.
РОД ENTEROBACTER
В составе рода Enlerobacter объединены микроорганизмы,
-описанные в разное время иод наименованием Aerobacter aero-
genes, Bacillus cloacae, Paracolon aerobacter, Paracoli Typ III,
1192
Cloaca cloacae, Paracolobaclrum aerogcnojdes, Coccabacillus
acridionnn и др.
Название Enlerobacler предложено E. Hormaecbe и P. Ed-
wards n I960 г. и утверждено в 1963 г. на заседании Подкоми-
I тета но Enlerobacler iaceae Международного таксономического
1 комитета и в дальнейшем па заседании Юридической комиссии
того же подкомитета в 1970 г., где было отвергнуто родовое имя .
Aerobacter, предложенное в 1900 г. М. Bcijerinck и в 1958 г.
Е. llonnacclie, Р. Edwards. Название. Aerobacter первоначально
было предложено Bcijerinck для подвижных и неподвижных
бактерий, растущих при оптимуме температуры около 28 °C и
не растущих при 37 °C. Позднее оно использовалось бактерио-
логами для неподвижных микроорганизмов, способных к росту
и при 37 °C и выше. Е. Hormaeche и Р. Edwards в 1958 г. с
целью отличить клебсиеллы от подвижных бактерий с однотип-
, ними реакциями в тестах 1MVIC (индол—, метиловый крас-
ный—, Фогеса — Проскауэра + , цитрат-Ь) применили наимено-
вание Aerobacter только для подвижных микробов, растущих
при 37 "С. Когда же возникли трудности при использовании од-
ного и того же названия для двух различных микроорганизмов,
группу подвижных бактерий назвали Enterobacler.
I В последние годы возникло следующее предложение: считать
Enterobacler типовым родом семейства Enterobacteriaceae вза-
мен Escherichia и соответсгвеипо этому изменить название се-
мейства на Enterobacleraceae (Lapage S., 1979], что было ут-
верждено на Юридической комиссии того же Подкомитета
[Holl J., 1979|, но встретило возражения (Ewing W. et al., 1981]
и поэтому в «Одобренных списках названий бактерий» вообще
отсутствует обозначение семейства (Skerinan V. el al., 1980],
। а вопрос об Enterobacler, как о типовом роде семейства Ente-
robacteriaceae (пли Entcrobacteraceae), остался открытым.
1 Доказана патогенность Enterobacler для отдельных насеко-
мых. Например, они описаны как возбудители смертельной сеп-
। тицемии саранчи. D’llerelle в 1911 г. и др. использовали этих
j бактерий, известных в то время как Aerobacter acridiorum, для
заражения саранчи для получения искусственных эпизоотий.
Долгие голы оставалась нерешенной проблема патогенности
Enlerobacler для человека и позвоночных животных. Однако в
последние годы появились публикации о выделении энтеробак-
, теров при острых желудочно-кишечных заболеваниях, инфек-
циях желчных и мочевых путей, гнойных поражениях кожи,
мозговых оболочек, при сепсисе, внутрибольничных инфекциях
, (Sedlak .1., 19(>8|. Известны случаи тяжелых септических забо-
; леванин новорожденных с летальным исходом, связанных с пе-
реливанием Инфицированных жидкостей. При бактериемии, свя-
i зываемой с Е. cloacae, отмечают различные, входные ворота ин-
। фекцпи: мочевой и кишечный тракт, желчные пути после раз-
личных оперативных вмешательств. Отмечена устойчивость этих
бактерий к применяемым в медицинской практике дезинфектаи-
13-817
193
там; их находили при контроле стерильности рук у персонала
операционной [Киселева Б. С. и др., 1973; Reber Н., i960]. Бак-
терии Е. cloacae выделены неоднократно у больных с невыяснен-
ной этиологией острых кишечных заболеваний при разных ди-
агнозах (клиническая дизентерия, простая или токсическая дис-
пепсия, энтерит, гастроэнтерит), а также у больных с травмой
черепа и развитием менингита. При этом в отделяемом слизи
из носа, зева, раны на голове, из пупочной области и фекалий
одного и того же ребенка, а также в окружении больных в от-
деляемом из зева и носа персонала родильного отделения нахо-
дили штаммы с однотипными реакциями в отношении дульцита,
адонита и салицина. Нередко эти микроорганизмы выделяли из
крови больных с клиникой сепсиса [Киселева Б. С., Голубе-
ва И. В., 1977]. При пиелонефрите с обнаружением Е. cloacae
в моче отмечали тяжелое течение заболеваний с развитием у
некоторых больных эндотоксического шока [Абрамова 3. И.,
Киселева Б. С., 1973]. В пользу этиологической роли Е. cloacae
свидетельствует нарастание уровня антител к аутоштаммам в
крови больных при групповых острых кишечных заболеваниях
в титре от 1 : 160 до 1 :640 [Голубева И. В., Киселева Б. С.,
Свичкарева А. И. и др., 1972]. J. Sedlak (1968) приходит к вы-
воду, что, по-видимому, отдельные серологические разновидно-
сти энтеробактеров при соответствующих условиях могут'выз-
вать как кишечные, так и другие заболевания человека.
Классификация и номенклатура. Вопрос о делении рода
Enterobacter на виды является спорным. Если F. Kauffmann
(1953) обозначал разновидность подвижного микроба, разжи-
жающего желатин, как Cloaca cloacae, то W. Maassen и
W. Priess (1949), E. Hormaeche, M. Munilla (1957) разделяют
их на 2 группы: А (не ферментирующие инозит и глицерин, по-
ложительные в тесте с аргинином) и В (образующие газ в ино-
зите и глицерине, отрицательные в тесте с аргинином). Е. Hor-
maeche, Р. Edwards (1958) обозначают первую группу Aerobac-
ter cloacae (Cloaca А) и вторую Aerobacter aerogenes (Cloa-
ca В), которые Р. Edwards, W. Ewing (1960) рассматривают
как подгруппу А — Е. cloacae (A. cloacae), подгруппу В —
Е. aerogenes (A. aerogenes) н подгруппу С (Е. liquefaciens).
Кроме того, к Enterobacter американские авторы относят и бак-
терии Hafnia под названием Е. hafniae, которые F. Kauffmann
(1963) считает самостоятельным родом трибы Klebsielleae.
В соответствии с таксономической классификацией [Bascomb
S. et al., 1971] Е. aerogenes предлагают рассматривать как вид
рода Klebsiella под названием К- mobilis. Е. liquefaciens относят
к Serratia под названием S. liquefaciens, а Е. cloacae оставляют
как вид рода Enterobacter. На правах самостоятельного рода
выделяют Hafnia с предложением исключить ее из трибы Kleb-
sielleae. Неясен вопрос в отношении бактерий, известных под
названием Erwinia herbicola, Erwinia lathyri, Flavobacterium,
В. typhiflavum, которых американские авторы относят к Entero-
bacter под названием Е, agglomerans [Ewing W., 1973]. В по-
194
следнем издании «Определителя бактерий Берги» (1974) в со-
ставе рода Enterobacter имеются только 2 вида: Е. cloacae и
Е. aerogenes, тогда как Е. liquefaciens отнесен к Serratia (S. li-
quefaciens), а Е. agglomerans— к Erwinia под названием Е. her-
bicola. Однако в «Одобренных списках названий бактерий»
(1980) имеются Е. aerogenes и К. inobilis, Е. agglomerans и
Е. herbicola (Sherman V. et al., 1980], что может внести боль-
шую путаницу.
Появились публикации о выделении в роду Enterobacter еще
двух видов: Е. sakazaki [Farmer J. et al.. 1980] и E. gergoviae
[Brenner D. et al., 1980]. E. sakazaki ранее был известен как
«желто-пигментный Е. cloacae» и имеет с ним большое сходство
в опытах ДНК/ДНК гибридизации, но сорбнтогрицателен, ДНК-
азаположителен. Е. gergeviae сходен с Е. aerogenes и отличает-
ся от него способностью к гидролизу мочевины, отсутствием рос-
та в среде с KCN, отсутствием ферментации сорбита, муката и
разжижения желатина. Заслуживает внимания выделение куль-
тур обоих видов, характеризующихся множественной лекарст-
венной устойчивостью, из различного клинического материала,
в том числе при сепсисе, менингите.
биологические характеристики. Энтеробактеры — подвижные
грамотрицательные палочки с перитрихиальным расположением
жгутиков; некоторые штаммы имеют капсулу; хорошо растут на
обычных плотных питательных и селективно-дифференциальных
средах с образованием колоний обычного размера, слизистых и
неслизистых, напоминающих колонии эшерихий или клебсиелл
(лактозоположительные варианты), малиновых или розовых, с
металлическим блеском или без него; замедленно расщепляю-
щие лактозу штаммы растут на лактозосодержащих дифферен-
циальных средах подобно патогенным кишечным бактериям, об-
разуя бесцветные колонии с розовым пли бежевым оттенком
на среде Эндо или с желтоватым на среде Плоскирсва. В косо-
проходящем свете по Landy колонии обычно имеют зеленовато-
желто в а т ы и оттс н о к.
Энтеробактеры не образуют сероводород и индол, не имеют
фенилала^иидезаминазы, утилизируют цитрат, слабо активны
при гидролизе мочевины, вариабельны в тестах с малонатом и
аминокислотами, большинство пггаммцв замедленно разжижа-
ют желатин, отрицательны в реакции с метиловым красным,
положительпы в реакций~~Фдгёса —11роскауэра; ферментируют
глюкозу с_рбразованием кислоты и газа, обычно—маннит, лакто-
зу^ сахарозу, встречаются штаммы, ие~ферментирующиепослед-
них д в а у гл е в б д а и л (Г с замедлен но (юл о ж и т£льпоц__реа кцйёи;
ферментируют рамнозу, ксилозу, мальтозу, iсорбит, арабинозу',
рафинозу. _варцабельТ1о~—ПлТюзТГЕ ТгуТГьцйтГ салицин, адонит.
Ферментативная хараТсгерислика юридически признаипых~видов
рода Enterobacter представлена в табл. 80. Обращает внимание
сходство ферментативной активности К pneumoniae в Е. aero-
genes, которые различаются между собой четко только по орни-
13
195
Таблица 80. Ферментативная характеристика видов рода Enterobacter
Тест или субстрат Е. cloacae Е. aero- genes Тест или субстрат Е. cloacae Е. аего- genrs
Цитрат Симонса + + Алгннат — —
Мочевина (+) — Мукат X +
Малонат +. - + D-Тартрат X X
Сероводород Фенила ланиндеза- — —“ KCN Адонит + X + +
мин аза — •— Арабиноза + +
Подвижность Лизиндекарбо- + + кГлюкпза Угаз) ^Глицерин (газ!) + +
ксилаза Орнитиидекарбо- — + Дульцит Инозит X - +
ксилаза Аргининдегидро- + + Ксцлрза «Пактщд, + +* + +
лаза Реакция с мети- + — Мальтоза — + +
ловым красным Реакция Фогеса — — — ТсЛлноза Рафиноза - - _1_
Проскауэра + + Салицин X -1-
-Индол} —- •—- Сахарозд? +* +
Желатин Цитрат Кристен- (+) (+) Сорбит Целлобиоза + + + +
сена "Ацетат J + + + Эскулии + +
* Возможны нетипичные реакции в виде безгазового расщепления глюкозы, замед-
ленной или отсутствия ферментации лактозы, сахарозы.
тнндекарбоксилазной активности, уреазе, утилизации алгнната.
Агглютинабельность К-антигенов разрушалась при нагревании
до 100 СС в течение 2’/г ч и обработке сп'иртом и соляной кисло-
той и не разрушалась при 60 °C''в течение 1 ч, что характерно
для В-антигена, но в отличие от последнего у штаммов Е. cloa-
cae при прогревании при 100 °C в течение 2*/г ч и обработке со-
ляной кислотой исчезала связывающая способность, что не
свойственно В-антигену. Некоторые штаммы Е. cloacae агглю-
тинировались в сыворотке к антигену а, особенно групп ОЗ и
039.
J. Sedlak с сотр. подтвердили в своих исследованиях, что у
штаммов Е. cloacae имеется мозаичная антигенная структура,
характерная для всех энтеробактерий, и на основании проведен-
ных исследований установили провизорную антигенно-диагно-
стическую схему, которая дала им возможность подразделить
около 46% культур (из 200 изученных ими) на 9 серологиче-
ских О-групп. Эта схема в дальнейшем была расширена на 10
О-групп, что в целом составило 19 серологических О-групп, од-
нако авторы не приводят схему антигенной структуры подроб-
но; неизвестно, как эталонные О-тест-штаммы соотносятся меж-
ду собой в коллекциях R. Sakazaki и J. Sedlak.
Описано антигенное родство между Е. cloacae и другими эн-
теробактериями: Е. cloacae 011 02, 04. Об с S. onderstepoort,
196
S. ihompso.n, S. greenside, S. niinnesota, S. boydii 7 — цит. no
Sedlak J. (1968), c K- pneumoniae сероваров K.8, КН, K21, K2G,
K69 (Edwards P., Ewing W., 1972]. Нами подтверждено антиген-
ное родство Е. cloacae п К. pneumoniae К8 при одновременном
родстве этих штаммов с Е. coli 020 : К84. Бактерии вида Е. cloa-
cae также довольно активны при ферментации углеводов, одна-
ко у них наблюдается ряд отрицательных реакций: в среде с са-
лицином, дульцитом, аконитом встречаются штаммы с замедлен-
ной ферментацией лактозы или сахарозы. По вариабельным
реакциям при ферментации а донн га, дульцита и салицина у’
Е. cloacae возможно определение различных биохимических ва-
риантов.
Для дифференциации между собой различных родовых групп
трибы Klcbsielleae можно использовать тесты с аминокислотами,
ферментацию арабинозы, рамнозы, рафинозы, сорбита, гидролиз
мочевины, разжижение желатина, определение ДНК-азы, пиг-
мента, подвижности (табл. 81). Для дифференциации обоих ви-
дов энтеробактеров от сходных с ними по характеру роста на се-
лективно-дифференциальных средах эшерихий, дающих также
однотипные реакции на среде для первичной идентификации (не
образующие сероводород, ферментирующие, глюкозу с газом и
лактозу, не разлагающие мочевину), можно использовать среды,
содержащие цитрат Симонса, малонат, мочевину по Преусу или
Кристенсену, инозит, адонит, желатин, KCN, реакции с мети-
ловым красным и Фогеса—Проскауэра (табл. 82).
Таблица 81. Биохимические свойства бактерий трибы Klebsielleae
Тест или субстрат К. pneu- mo niae Е. аего- genes Е. cloacae Hafnia Serra li а
Лизин декарбоксилаза 4- + — + 4-
Аргянипдегидрочата — — 4- — —
Орнитиндекарбокснлаза —- 4- 4 4- 4-
Мочевина (+) — ( 1 ) —— X
Арабиноза 4- + 4- 4- —
Рамноза 4- 4- 4 4- —
Сорбит 4" + 4- 4-
Рафиноза + 4“ 4* —
Желатин (+) (-14 — *4“
Подвижность —. + 4- X 4-
Наличие лш мента __ X*
ДНК-аза — — — — 4-
* Красный пигмент у S. fnarccscrns.
Антигенная структура и серологическая идентификация. Об
антигенных свойствах Е. cloacae известно только из публикаций
R. Sakazaki, 11. Namioka (I960) [цит. по Sedlak J., 1968], так
как основные работы по изучению этой группы бактерий посвя-
щены изучению их биохимических свойств. R. Sakazaki, Н. Na-
mioka при изучении 170 штаммов Е. cloacae установили 53
197
Таблица 82. Ферментативные отличия видов Enterobacter от Е. coli ч
Тест или субстрат Е. cloacae Е. aerogenes Е. coli
Цитрат Симонса + + —
Малопат +. - + —
Мочевина (по Преусу или Кристен-
сену) (+) — ——
Индол — — . +, —
Инозит .— -1- —. -I-
Адопи г X -1- —. -1-
Желатин (+) (-I-) —
KCN + + —
Реакция с метиловым красным — — +
Реакция Фогеса — Проскауэра + + —
О-антигена и по их сочетанию — 79 сероваров. Кроме того, они
наблюдали фазовые вариации по Н-антигену, мозаичную струк-
туру О-антигена. Культуры были в основном инагглютинабель-
ны в О-сыворотках, т. е. обладали К-антигенами, которые авто-
ры сочли возможным отнести к слизистому М-антигену.
Сведения о серологической идентификации Е. aerogenes в
литературе отсутствуют, равно как и данные о биоварах, фаго-
варах, колициногеноварах, антибиотикограмме обоих видов
Enterobacter, о наличии у них плазмид, иммунохимии антигенов
и т. п. Поэтому на сегодняшний день идентификация этих бак-
терий возможна на основании результатов изучения фермента-
тивной активности.
РОД HAFNIA
Определение рода Hafnia и его наименование (происходящее
от старого названия города Копенгаген) было дано V. Moller
(1954). Первые исследования бактерий с такими свойствами
проведены С. Stuart и R. Rustigian (1943), зарегистрировавши-
ми их как бактерии Paracoli биотип 32011. Род Hafnia был
включен в семейство Enterobacteriaceae в 1958 г. В литературе
прежних лет и некоторых современных руководствах они упо-
минаются под разными названиями: биотип 32011, группа Haf-
nia, Enterobacter alvei, В. asiaticus, Enterobacter hafniae (Ed-
wards P., Ewing W„ 1972; Cowan S., 1974).
Классификация и номенклатура. Согласно классификации,
приведенной в «Определителе бактерий Берги» (1974) род Haf-
nia в составе трибы Klebsielleae входит в семейство Enterobacte-
riaceae. Единственным и типовым видом рода Hafnia является
вид Hafnia alvei. В составе ДНК представителей рода Hafnia
обнаруживают 52—57 моль% G+C (гуанина-l-цитозина), что
совпадает в значительной степени с соответствующими показа-
телями для других родов той же трибы Klebsielleae. Изучение
198
последовательности нуклеотидов в ДПК гафний показало, что
у разных штаммов вида Hafnia alvei гомология выражается по-
казателями 55—100%, что свидетельствует об известной гетеро-
генности установленного вида. Сопоставление в опытах реассо-
циации особенностей ДНК Hafnia и Enlerobacler, а также дру-
гих родов семейства Enlerobacteriaceae выявило показатели го-
мологии порядка 11—24%, подтверждающие обоснованность-
объединения бактерий Hafnia в рамках самостоятельного рода
[Colwell 1?. el al., 19741. Согласно классификации энтеробакте-
рий, представленной W. Ewing [Edwards I’., Ewing W., 1972],
гафнии относились к виду Enlerobacler hafniae рода Enlcro-
bacler. • l
Бактерий рода Hafnia (Enterobacter hafniae) нередко обна-
руживают у млекопитающих, включая человека, в различных
продуктах животною происхождения, в частности молочных,
а также в таких объектах окружающей среды, как вода откры-
тых водоемов, сточные воды, на различных овощах. Особый ин-
терес для медицинских микробиологов представляют сравни-
тельные данные о выявлении Hafnia в материалах от больных и
здоровых людей. По свидетельству отечественных и зарубеж-
ных авторов обнаружение бактерий рода Hafnia в выделениях
кишечного тракта людей при острых кишечных заболеваниях,
в моче при поражениях мочевыводящей системы и др. наблюда-
ется чаще, чем в соответствующих материалах от здоровых лю-
дей. Так, по данным Г. К. Калашниковой и др. (1974, 1975),
частота выявлений бактерий Hafnia в фекалиях здоровых детей
и взрослых составляла соответственно 0,3 и 0,9%, у больных
с клиническими диагнозами гастроэнтерита, энтероколита у де-
тей (до 3 лет) 8,3%, а у взрослых — 3%. Совпадающие данные
приводит В. Г. Фини (1980). В большой коллекции культур, вы-
деленных во Франции в 1969—1975 гг., преобладали копрокуль-
туры от людей (283 нз 400), причем 92% из них cotтавили по-
лученные из кишечного тракта больных г диареей; 79 культур
были выделены от млекопитающих животных и птиц или из
пищевых продуктов животного происхождения [Richard С.,
Alonso J., I976|. S. Stuart и R. Rustigian (1943), с именами ко-
торых S. Т. Cowan (1974) связывает первое описание бактерий
группы Hafnia, сообщали о вспышке гастроэнтеритов у больных
в стационаре, а также у здоровых людей, употреблявших одно
и то же молоко, из которого, как и от пострадавших, были вы-
делены бактерии группы Hafnia (обозначенные тогда как био-
тип 32011).
Биологические характеристики. Бактерии рода Hafnia пред-
ставляют собой, как правило, подвижные (лучше ври +22°C),
не образующие капсул палочки, соответствующие общим харак-
теристикам энтеробактерий.
На пластинчатых средах, используемых для выделения энте-
робактерий (Нлоскнрева, Эндо, ЭМС-агар) Hafnia растут в ви-
де полупрозрачных мутноватых колоний, бесцветных или имею-
199
щих оттенок цвета среды культивирования (розоватый или се-
роватый), напоминая по виду и размерам колонии некоторых
лактозоотрицательных энтеробактерий, в частности шигелл. На
комбинированных средах для выделения и первичной идентифи-
кации чистых культур (среды Ресселя, Клиглера, Олькеницкого
и др.) при отсутствии выраженного газообразования (что воз-
можно при температуре 37 °C) и реакции на сероводород не-
обходима дифференциальная диагностика гафний и шигелл, а в
ряде случаев и других энтеробактерий.
При изучении ферментативной активности бактерий рода
Hafnia обращает на себя внимание изменение ее в зависимости
от температуры культивирования. Эта особенность используется
с целью дифференциальной диагностики Hafnia от сходных
культур при постановке реакции с метиловым красным, Фоге-
са — Проскауэра, при учете ферментации глюкозы (наличие га-
зообразования), утилизации цитрата в среде Симонса, а также
в ряде случаев при определении подвижности. Бактерии рода
Hafnia ферментируют глюкозу обычно с образованием газа,
маннит, арабинозу, глицерин, ксилозу, мальтозу, рамнозу, тре-
галозу; не ферментируют адонит, дульцит, инозит, сорбит, рафи-
нозу и эскулин. Вариабельные реакции проявляют в отно-
шении сахарозы, салицина, целлобиозы, утилизации цитрата
в среде Симонса и малоната, а также в тестах с метиловым
красным и Фогеса — Проскауэра. Гафнии не образуют индол
и сероводород, не разжижают желатин и не гидролизуют моче-
Таблица 83. Биохимические свойства бактерий рода Hafnia
Тест или субстрат Реакции Тест или субстрат Реакции
Лактоза (+) Реакция Фогеса — Прос-
Глюкоза (газ) + , ~ кауэра (37 °C) +> —
Маннит + Реакция Фогеса — Про-
Сахароза X скауэра (22 °C) +
Лдонит —— Индол —
Арабиноза + Сероводород —
Глицерин + Мочевина (гидролиз) —.
Дульцит — Желатин (22 °C) —
Инозит —. Фенилалаииндезаминаза —-
Ксилоза Лизиндекарбоксилаза +
Мальтоза + Аргиннндегидролаза —
Рамноза + Ориитиндекарбоксилаза +
Рафиноза — Цитрат Симонса (37 °C) (+). —
Салицин X Цитрат Симонса (22 °C) 4*
Сорбит — Ацетат (+)
Трегалоза Малонат +. -
Целлобиоза X Мукат
Эскулин — D-Тартрат —
Реакция с метиловым крас- KCN +
ным (37 °C) + Подвижность (37 °C) +. -
Реакция с метиловым крас- Подвижность (22 °C) +
ным (22’С) Р-Галактозидаза +
200
вину, не обладают фепилалапиндезаминазой и аргининдегидро-
лэзой, по декарбоксилируют лизин и орнитин. Биохимические
реакции бактерий рода Hafnia приведены в табл. 83. Следует
помнить, что в таблице приведены реакции типичных представи-
телей рода Hafnia, выявленные у 90% (или более) изученных
культур, в практической работе нельзя исключить и случаи вы-
деления культур с атипичными реакциями, при изучении кото-
рых особое значение приобретают расширение набора изучае-
мых признаков и унификация методов, условий определения
(см. общую часть). В качестве дополнительного теста при диф-
ференциации гафний от шигелл и клебсиелл может быть исполь-
зована реакция на наличие фермента каталазы с 1% раствором
перекиси водорода. При растирании суточной агаровой культу-
ры в капле перекиси водорода па предметном стекле культуры
Hafnia дают бурное газообразование, более интенсивное, чем
другие энтеробактерии, в частности клебсиеллы и шигеллы.
Опыт работы по идентификации бактерий рода Hafnia, в том
числе и штаммов отечественного происхождения, отражен в ра-
боте А. П. Батуро (1977) и др. Для подтверждения родовой при-
надлежности культур к роду Hafnia первоочередное значение
наряду с реакциями, учитываемыми на комбинированных средах
типа Ресселя, Клиглера, Олькепиикого, имеют реакции с мети-
ловым красным и Фогеса — Проскауэра, воспроизведенные пос-
ле инкубации посевов при 37 °C и 22 СС, а также тест на нали-
чие лизппдекарбоксилазы (табл. 84).
Таблица 84. Основные биохимические свойства, дифференцирующие бак-
терии рода Hafnia от рода Shigella
Тест или субс!гчт
Hafnia Shigella
Реакция с метиловым красным (37 °C)
Реакции с метиловым красным (22 °C) J
Реакция Фогеея — Проскауэра (37 °C)
Реакция Фогеса — Проскауэра (22 °C).,
Подвижность (37 "С)
Цитрат Симонса (22 °C)
Малоил г
Лизиндекарбоксилаза
Подвижность (37 °О
1 Шдвижность (22 °C)
4-
Необходимость в дифференциальной диагностике гафний от
шигелл возникает, видимо, нередко, однако у гафний могут на-
блюдаться сходные биохимические реакции и с представителями
других родов трибы Klebsielleae, требующие для правильной
идентификации некоторые дополнительные тесты. Соответствую-
щие рекомендации представлены в табл. 85.
Антигенная структура и серологическая идентификация. Пер-
вые сведения об антигенной структуре гафний приведены в ра-
201
Таблица 85. Дифференциация видов Klebsiella, Enterobacter, Hafnia, Ser-
ratia
Тест или субстрат Klebsiella pneumo - niae Enterobacter Hafnia alvei Srrratla
cloacae aerogenes liqne* faciens marces- cens
Глюкоза (газ) + + + +. - + 4-. -
Адонит (газ) +. - 4- 4- — — —
Глицерин (газ) + — + -1- X —
Инозит (газ) + —— + -—- X —
Целлобиоза (газ) + + + X X —-
Арабиноза + + + + 4- —
Рафиноза + + + — X —-
Рамноза + + + + —-
Сорбит 4- + — .4- .
Реакция с мети-
ловым красным
(37 °C) —. + v—* 4- + 4-
Реакция с мети- '—'
ловым красным
(22 °C) — 4- —
Реакция Фогеса —
Проскауэра
(37 °C) 4- 4- 4- 4- 4-
Реакция Фогеса —
Проскауэра (22 °C) + 4-.- . 4-
Мочевина (+) (+). - — X X
Желатин (22 °C) (+) (+). - —
Лнзпндекарбокси-
лаза 4- — + 4- 4-, — 4-
Аргинин дегидро-
лаза — + —— ~~ •—
Ориитиндекарбо-
«силаза . + + 4- 4- 4-
Малонат -F +. - 4-. - 4-, - — —
Мукат + 4-. — + — — —
Подвижность — +. - + 4-. - 4- +
боте C. Stuart, R. Rustigian (1943), сообщавших, что 85% изу-
ченных ими культур биотипа 32011 (Hafnia alvei) были отнесе-
ны к восьми из обнаруженных ими сероваров, причем больше
'/з штаммов принадлежали к одному серовару.
Наиболее полное изучение антигенов и антигенных связей
Hafnia было проведено японскими исследователями [Sakaza-
ki R., 1961; Matsumoto H., 1963, 1964]. В совокупности указан-
ные авторы установили у бактерий рода Hafnia 68 серологиче-
ских О-групп и 34 Н-антигена, различные сочетания которых
позволили установить 192 серовара при исследовании 651 штам-
ма. Этими же авторами были выявлены межродовые антиген-
ные связи с родами Enterobacter и Escherichia. С. Richard,
Y. Alonso (1976) отмечали существование связи О-аитигенов
представителей рода Hafnia с родом Salmonella (по парциаль-
ным антигенам 01, Об, 010, 013, 015, 022 и 038 Salmonella),
а также с некоторыми штаммами Yersinia enterocolitica.
202
Отсутствие у исследователей других стран коллекции тест-
штаммов R. Sakazaki лишило их возможности приготовления
идентичных диагностических агглютинирующих О- и Н-сыворо-
ток и проведения сравнительных исследований. В начале 70-х
годов у нас в стране совместно со специалистами ГДР (Ю. Ки-
зевальтер) была разработана временная диагностическая схе-
ма дифференциации бактерий рода Hafnia по О-антигену [Ба-
туро А. I I.. Рагинская В. П., Кизевальтер Ю., 1974]. С помощью
экспериментальных сывороток авторы исследовали 64 свежевы-
дсленных штамма Hafnia. 2/з этих штаммов агглютинировались
этими сыворотками и были дифференцированы на 9 серологиче-
ских О-групп, из которых чаще других оказались представлен-
ными Об, 04 и 037. В дальнейшем [Батуро А. П., Рагин-
ская В. И., 1976] была разработана схема дифференциации бак-
терий рода Hafnia по Н-антигену, в которую вошло 36 разно-
видностей Н-антигенов, часть которых содержала по 2 антиген-
ных фактора, отражая существование внутриродовых связей по
Н-антигену. Используя разработанную схему, А. П. Батуро и
В. П. Рагинская определили Н-аптигеиы у тест-штаммов 34 се-
рологических О-групп. Антигенно-диагностическая схема бакте-
рий рода Hafnia (табл. 86) создала основу для разработки тех-
нологии изготовления агглютинирующих сывороток для сероло-
Таблица 86. Антигенно-диагностическая схема бактерий рода Hafnia*
[Батуро А. П., Рагинская В. II., 1976]
О-группа О-антмген Н-антиген О-групп а О-антиген Н-антмген
1 1 1 19 19а,'.19b 17, 7
2 2 2 19а. 19с 16
3 За, ЗЬ 3, 5 20 20 26, 13
За. Зс 4, 5 21 21 —-
4 4 а, 4Ь 6, 7 22 22 27, 19
4 а, 4с II 23 23 28, 7
5 5а, 5Ь 8, 9 24 21 29, 21
5а, 5с 11 25 2Г>
6 6 12, 13 26 26 17, 7
7 7 — 27 27 30
8 Я, 16с 14, 13 28 28 31
«) 9 15 29 29 28, 7
10 10а, 10b 16 30 30 20, 21
И На, 111) 12з, 12b 17, 7 31 31 32, 21
12 —. 32 32 33
12а, |-2с 18, 19 33 33 34
13 13, 10Ъ 20, 21 34 34, 14а 1, 35
14 14а, 14b 22 35 35а 1, 19
15 15, 12b 15 35а, 35b —
16 16а, 16b 23 36 36а, 36b 9, 10
12а, 16с — 37 37 —
17 17, 36b 1, 24 38 38 —
18 18, 1-1Ь 25, 13 39 39 36
• Коммерческих сывороток нет.
203
гической характеристики гафний. Первые шаги по ее апробации
свидетельствуют о возможности получения неплохих результа-
тов при изучении гафний, выделенных при спорадических слу-
чаях гастроэнтеритов и вспышке токсикоинфекций. Авторами
была показана принадлежность к одному серовару(О6 : Н12,
13) штаммов, выделенных при вспышке.
Определение эпидемиологических маркеров. Как указывалось
выше, род Hafnia представлен одним видом Hafnia alvei, в то
же время накопление данных о выделении гафний из различ-
ных клинических материалов, от больных с различными патоло-
гическими процессами стимулирует поиск методов их более тон-
кой дифференциации. Разработка антигенно-диагностической
схемы для бактерий рода Hafnia создает предпосылки для изу-
чения серологических характеристик гафний и определения их
сероваров. Целью такого изучения является выяснение этиоло-
гической значимости выделяемых гафний и определение эпиде-
миологических маркеров для проведения эпидемиологического
анализа. Для использования в качестве эпидемиологических
маркеров биоваров в работе с гафниями предприняты пока
только первые шаги, не позволяющие еще делать какие-либо вы-
воды. Так, Ю. Кизевальтер, В. П. Рагинская и др. (1970) сооб-
щают о попытках использовать с этой целью отношение гаф-
ний к салицину, рамнозе, целлобиозе и малонату. В работе Тус
(1965) [цит. по: С. Richard и J. Alonso, 1976] использова-
ние этих субстратов привело к дифференциации исследован-
ных культур Hafnia на 9 биоваров, а сами С. Richard и J. Alon-
so, дополнив этот дифференцирующий ряд арабинозой и тестом
на тетратионат редуктазу, выявили средн 400 культур Н. alvei
16 биоваров. Изучение бактериоциногенности Н. alvei показало,
что к синтезу бактериоцинов (альвеицинов) оказались способ-
ны 30% изученных штаммов [Hamon Y., Peron Y., 1963]. При
испытании чувствительности бактерий Hafnia к ряду анти-
биотиков (ампициллину, карбенициллину, цефалотину, стрепто-
мицину, канамицину, гентамицину, тетрациклину, миноциклину,
хлорамфениколу, рифампицину, колистину), сульфамидным пре-
паратам, триметапрнм-сульфаметоксазолу и налидиксовой кис-
лоте S. Richard и J. Alonso установили, что подавляющее боль-
шинство штаммов были в основном чувствительны к перечислен-
ным препаратам, исключение составил цефалотин, к которому
были чувствительны лишь 3 из 50 изученных штаммов.
РОД SERRATIA
Определение рода было дано В. R. Davis и W. Ewing (1957)
и принято Подкомитетом по Enterobacteriaceae Между-
народного таксономического комитета. Название рода связыва-
ют с именем итальянского физика XVII! века Serafino Serratl.
Классификация и номенклатура микроорганизмов, включае-
мых в род Serratia, не получили однозначного выражения. Со-
204
гласно «Определителю бактерий Берги» [1974], род Serratia
входит в трибу Klebsielleae и представлен одним ви-
дом Serratia niarcesceiis. Обоснованием для включения рода
Serratia в трибу Klebsielleae послужили данные изучения после-
довательности нуклеотидов в ДНК, свидетельствующие о нали-
чии гомологии на уровне 35% (или менее) между родами Kleb-
siella, Enterobacter и Serratia [Brenner D., 1973]. Аналогичное
исследование родственных связей между штаммами Serratia по-
казало выраженную гомологию (50—60%).
Нельзя, однако, обой in молчанием, что достаточно широкое
признание и отражение в литературе находит п предложение
W. Ewing (1973) о разделении рода Serratia на 3 вида: Serra-
tia niarcesceiis, Serratia liquefaciens и Serratia riibidaeae. Serra-
tia liquefaciens ранее именовались Enterobacter liquefaciens и
были перемешены из соответствующего рода в род Serratia на
основании углубленного изучения их характеристик, включая
особенности ДНК.
Содержание гуанина и цитозина (G±C) в ДНК изученных
серраций составляет 53—59 моль %.
Серраций обнаруживают в воде, почве, пищевых продуктах,
а в последние полтора — два десятилетия с возрастающей час-
тотой и в различных клинических материалах от больных и
здоровых людей (моча, кровь, фекалии, слизь из носоглотки,
мокрота, гной из абсцессов и др.). Полагают, что с серрациями
могут быть связаны и внутрибольничные инфекции. При срав-
нении частоты выявления серраций в фекалиях больных остры-
ми кишечными инфекциями и здоровых людей было показано,
что у больных они обнаруживаются чаще: 13,1±1,2с/о и 2,1±
±0,8% соответственно |Фннн В. Г., 1980].
Согласно материалам центра национального контроля за
внутрибольничными инфекциями в США (1970—1973), в этио-
логической структуре внутрибольничных инфекций мочевыводя-
щих и дыхательных путей на долю Serratia marcescens прихо-
дился 1,1%.
Биологические характеристики. Род Serratia объединяет по-
движные энтеробактерии, соответствующие по своим свойствам
общей характеристике энтеробактерий. Отдельные штаммы сер-
раций могут образовывать капсулу. Широко известна способ-
ность многих культур серраций продуцировать розовый, крас-
ный или фуксинового цвета пигмент, однако образование пиг-
мента (продигнозина) присуще не всем представителям этого
рода, оно может варьировать и в зависимости от условий куль-
тивирования, в частности от состава питательных сред. Беспиг-
ментные варианты серраций встречаются с большей или мень-
шей частотой и в клинических материалах и, конечно, будучи
лишенными такого манифестного признака, представляют ббль-
шую сложность при дифференциальной диагностике, Пигмент,
образуемый серрациями, не диффундирует в питательную среду,
растворяется в иетролейном эфире.
205
Таблица 87. Биохимические свойства бактерий рода Serratia
Тест или субстрат Реакция Тест или субстрат Реакция
Лактоза + Реакция Фогеса — Про-
Глюкоза (газ) скауэра
Сахароза -1- Индол —
Адопиг X Сероводород —
Арабиноза — Мочевина (гидролиз) X
Глицерин -1- Желатин (22 °C) +. (+>
Дульцит — Фенилаланиндезаминаза ——
Инозит X Лизиндекарбоксилаза +
Ксилоза X Аргпниндегидролаза —
А\альтоза + Орнитиндекарбокси.таза +
Маннит + Цитрат Симонса +
Рамноза — Цитрат Кристенсена +
Рафиноза — Ацетат +
Салицин + Малонат —
Сорбит + Мукат —
Трегалоза + D-Тартрат
Целлобиоза X KCN +
Эскулин + Подвижность +
РТалактозпдаза + Пигмент (розовый или
Реакция с метиловым красный) +. -
красным +
Биохимическая характеристика рода Serratia приведена в
табл. 87. Серрации ферментируют глюкозу без газообразования
или с образованием небольшого количества газа (около 10%
объема «поплавка» или менее), большинство штаммов лактозо-
отрицательны или ферментируют лактозу слабо и замедленно
(через 5—21 день). Маннит, сахарозу, мальтозу, салицин, сор-
бит, глицерин, трегалозу серрапии ферментируют постоянно, а
адонит, инозит, ксилозу и целлобиозу — вариабельно. Серрации
обычно дают отрицательную реакцию с метиловым красным и
положительную реакцию Фогеса — Проскауэра, растут на цит-
ратных средах Симонса, Кристенсена, а также на ацетатной
среде, не утилизируют малонат и мукат, непостоянно, слабо и за-
медленно гидролизуют мочевину. Серрациям обычно свойствен-
ны быстрое разжижение желатина, способность декарбоксили-
ровать лизин и орнитин, но неспособность дезаминировать фе-
нилаланин. Они не обладают дегпдролазой аргинина.
По свидетельству W. Ewing [1973[, выделяемая им в само-
стоятельный вид Serratia liquefaciens (Enterobacter liquefaciens)
проявляет более выраженные биохимические реакции при инку-
бации в условиях 22—25 °C в сравнении с 35—37 °C. Для
S. marcescens различия в температуре инкубации не имеют та-
кого значения. Упоминаемый в литературе S. marcescens подвид
kiliensis характеризует положительная реакция с метиловым
красным и отрицательная Фогеса — Проскауэра. Не образую^
щие пигмента культуры серрации дифференцируются от клеб-
сиелл по наличию орнитиндекарбоксилазы (кроме S. rubiclaea),
206
подвижности, быстрому разжижению желатина, слабому газо-
образованию в среде с глюкозой, отрицательной реакции с ма-
ловатом (кроме S. rubidaea); от Enterobacter cloacae —по нали-
чию лизиндекарбоксилазы и отсутствию аргининдегидролазы, по
отношению к рамнозе и рафинозе.
Ли по енная структура и серологическая идентификация. Ис-
следованиями 13. R. Davis с соавт., W. И. Ewing и др. в 50-е го-
ды у S. marcescens были установлены 15 различных О-антпгс-
иов и 13 11-ант ин нов. С помощью соответствующих специфиче-
ских кроличьих О- и 11-сывороток удалось определить 46 серова-
ров среди 95% изученных клинических штаммов S. marcescens
разного географического происхождения, выделенных из различ-
ных клинических материалов. Позже W. Traub и J. Kleber
(1977) было описано еще 3 новых Н-антигена. По данным
Р. Edwards, W. Ewing [1972], перекрестные реакции между ан-
тигенами серрации наблюдались между О-группами 02 и 03;
ОС и 07; 08, 09 и ОК), а также 012 и 014. Нет сведений об ан-
тигенных связях серрации с другими энтеробактериями. Изуче-
ние антигенной структуры серраций еще не привело к созданию
антигенно-диагностической схемы.
Возможность внутри родовой дифференциации серраций дает
разделение рода Serratia по VV. Ewing [1973] на 3 вида, харак-
теристики которых приведены в табл. 88.
Таблица 88. Виутриродовая дифференциация бактерий Serratia
Тест или субстрат Serratia tnaitescens Serratia liquefaciens Serratia rubidaea
Глюкоза (газ) -i- +. - X
Лактоза — X +
Л дон пт X + + +. (+)
Арабиноза — +
Сорбит 1- + —
Цитрат Симонса -1- -1- +. -
Малонат — — + x~
Л изиндекарбокенла га + X
Орнитин.декарбоксилаза Пигмент (розовый нли + + —
красный) -I-. - —•’ +. -
По данным W. Ewing (1973), основная масса исследован-
ных им культур серраций (1955—1970) относилась к виду Serra-
tia marcescens (89,9%), S. liquefaciens составили 7%. a S. rubi-
daea лишь 3,1% от общего числа.
Возрастающая частота выделения представителей рода Ser-
ratia из клинических материалов, изучение их этиологической
значимости и эпидемиологических закономерностей при этих ин-
фекциях объясняют интерес к поискам надежных эпидемиологи-
ческих маркеров. Для получения таких маркеров использовали
207
метод определения сероваров [Edwards Р., Ewing W., 1972
и др.]. Эти авторы положительно оценивали полученные данные,
однако отсутствие общепринятой антигенно-диагностической схе-
мы и производственного выпуска агглютинирующих сывороток
ограничивает возможность распространения метода.
Определение эпидемиологических маркеров. В работах
W. Traub и W. Traub с соавт. (1971—1974) представлены дан-
ные по применению в качестве эпидемиологических маркеров
образования серрацнями бактериоцинов и чувствительности их
к действию бактериоцинов. В том же плане проводили исследо-
вания J. Farmer (1972) и В. Anderhub с соавт. (1977). Послед-
ний считает, что наибольшие возможности для маркировки
штаммов серраций дает сочетание определения их О-серогруп-
повой принадлежности с чувствительностью к бактериоцинам.
Данные по определению фаговаров у серраций очень скудны.
РОД PROTEUS
История большой и многообразной группы бактерий, входя-
щих в род Proteus, началась с описания Hauser (1885) необыч-
ных микроорганизмов, выделенных им из гниющего мяса. Спо-
собность их менять внешние проявления роста на агаровых пла-
стинчатых средах послужила основанием для наименования Pro-
teus (бог, способный менять свой облик). После первого сооб-
щения последовала серия работ других авторов с описанием
сходных по свойствам микроорганизмов, известных в литерату-
ре под различными названиями [Morgan Н., 1906, 1907; Oila-
Jensen S., 1908, 1909; Retiger L., 1912, 1913; Stuart S. et al..
1945, 194G, и др.]. И в настоящее время все эти своеобразные
бактерии составляют предмет многочисленных дискуссии таксо-
номистов, причем некоторые из них считают протеев лишь отда-
ленно связанными с семейством Enterobacteriaceae «каемкой»
(fringe — англ.) этого семейства [Brenner D. et al., 1978].
Классификация и номенклатура микроорганизмов, именуе-
мых протеями, не нашли общепризнанного таксономического ре-
шения. Признав целесообразным придерживаться на данном
этапе классификации но «Определителю бактерий Берги»
[1974], напомним, что согласно этому руководству род Proteus
входит в трибу Proteeae, а в пределах рода различают сле-
дующие виды: Proteus vulgaris (являющийся типовым видом
рода), Proteus mirabilis, Proteus morganii, Preteus rettgeri и
Proteus inconstans (с подгруппами А и В) [Lautrop H., 1974].
Наряду с этим в литературе достаточно широкое отражение
нашла и классификация Ewing [Edwards Р., Ewing W., 1972],
по которой в трибу Proteeae включены 2 рода: Proteus и Provi-
dencia. 13 роду Proteus представлены те же виды, что в упомя-
нутой ранее классификации, за исключением Р. inconstans, вы-
деленного в самостоятелльный род Providencia с двумя видами:
Providencia alcalifaciens (соответствует биохимической под-
208
группе Л) и Providencia stuartii (соответствует подгруппе В).
Направление, характеризующееся еще большим «расщеплением»
протеев (по выражению S. Cowan — «splitting»), отразилось в
ряде предложений рассматривать в трибе Proteeae 4 рода: Pro-
teus, Morganella, Rctlgerella, Providencia [Kauffmann F. 1953,
1959; Ewing W., 1958; Rauss K., Voros S., 1959; Rauss K-, 1962].
В 70-е годы для решения существующих разногласий к ана-
лизу материалов развернутой биохимической и серологической
характеристики изучаемых бактерий привлекли данные молеку-
лярно-биологических и генетических исследований. Было уста-
новлено, что по содержанию гуанина и цитозина (G-ГС) в ДНК
среди протеев выделяется Р. morganii— (G I С) 50±0,7 моль%>
что сходно с содержанием (G |-С) в ДНК эшерихий и сальмо-
нелл. ДНК Р. vulgaris, Р. mirabilis. Р. rettgeri, и Р. inconstans
содержат соответственно 39,3±1,2; 39,3±1,4; 39,0±1,5 и 41,5±
±0,6 моль % G-1-C. Эти показатели оказались существенно ни-
же, чем у других родов энтеробактерий. Широкие исследования
во изучению последовательности нуклеотидов методом гибриди-
зации (реассоциации) ДНК сравниваемых видов протеев и дру-
гих энтеробактерий проведены D. Brenner (1974) и D. Brenner
с соавт. (1978). Были установлены довольно значительные раз-
личия в последовательности иуклеоищов ДНК в пределах не-
которых видов протеев п между видами. Штаммы Р. mirabilis
проявили высокую степень родства (гомологии) ДНК, штаммы
Р. vulgaris гетерогенпы но этому показателю: у части штаммов
выявлено 90% (и более) гомологии, у других — от 65 до 75%,
но у всех штаммов Р. vulgaris отмечена большая степень гомо-
логии в пределах своего вида, чем с видом Р. mirabilis. Изучен-
ные штаммы Р. morganii проявили родство с другими протеями
на уровне 20%, ио высокую i leneiu. гомологии в пределах вида
(~90%), чю, по мнению D. Brenner, свидетельствует о гомоген-
ности вида и обоснованности установления самостоятельного ро-
да Morganella с видом М. morganii. Гетерогенным ио последо-
вательности нуклеотидов в ДНК оказался Р. rettgeri, в составе
которого установлены группы штаммов, более родственных Р. in-
conslans (Providencia), чем другим протеям, а одна из групп
по характеристике ДНК (последовательности нуклеотидов) не-
отличима or Proteus inconstans подгруппы В (Providencia stuar-
tii). Родственные связи проюев (кроме Proteus inorgamii) с
другими энтеробактериями ио данным реассоциации их ДНК
находятся па уровне 5—15% гомологии. На основе анализа
биохимических, серологических к морфологических данных, а
также материалов по гибридизации ДПК различных видов рода
Proteus (включая Р. inconstans) D. Brenner с соавт. 11978] счи-
тают обоснованным предложение о разделении трибы Proteeae
на 3 рола: Proteus, Morganella и Providencia, подчеркивая, что
благодаря методам геносистематики получены дополнительные
обоснования ранее выдвигавшихся концепций. Proteus rettgeri,
оказавшийся гетерогенной группой микроорганизмов но данным
14—8)7
209
изучения ДНК в опытах гибридизации, предлагается включить
в род Providencia в ранге самостоятельного вида Providencia ,
rettgeri, другую же его часть, имеющую последовательность нук-
леотидов в ДНК, соответствующую Р. stuartii— в вид Р. stuar-
iii. Таким образом, достижения смежных наук, появление новых
методических возможностей создают обоснованные предпосылки ,
для ревизии некоторых старых представлений в области таксо-
номии протеев.
Бактерии рода Proteus обнаруживаются в испражнениях
многих видов животных, а также в испражнениях и моче боль- 1
ных и здоровых людей, в сточных водах и почве, особенно в бо-
гатой гниющими органическими субстратами. Различных пред-
ставителей рода характеризует некоторое экологическое своеоб-
разие. Так, в объектах окружающей среды, загрязненных орга-
ническими отбросами, выявляют как Р. vulgaris, так и Р. mira- 1
biris, но по многочисленным данным [Калина Т.П., 1974], в объ-
ектах, загрязненных выделениями человека, чаще присутствует
Р. mirabilis. Сведения о присутствии протеев в кишечнике чело-
века варьируют в больших пределах, что, вероятно, связано и
с различиями в методах исследований и применяемых питатель-
ных сред. При исследовании испражнений и других клинических
материалов от людей преобладают находки Р. mirabilis, причем, j
по данным Д. Д. Меньшикова и Г. Я. Янискер (1980) , у травма-
тологических больных (при гнойно-воспалительных процессах)
Р. mirabilis выделяется значительно чаще, чем другие энтеро-
бактерии, а при соответствующих осложнениях у хирургических
больных его находят реже, чем Escherichia coli. Наряду с этим
А. Е. Каплан (1980) сообщает, что при внутрибольничных ин- ’
фекциях в урологических отделениях среди прочих протеев пре-
валирует как этиологический агент. Р. vulgaris. Proteus rettgeri !
обнаруживали в различных клинических материалах от людей.
По данным Л. Е. Каплан (1973), этот микроорганизм нередко
выделяли при хронических инфекциях мочевыводящего тракта
у больных с травмами спинного мозга. В то же время отмечают,
что доля Р. rettgeri в сумме всех выявляемых протеев лежит в I
пределах 0,4—5,0%. Proteus morganii находят в испражнениях
людей как здоровых, так и при патологии кишечного тракта,
в моче при инфекциях мочевых путей, а также при раневых ин-
фекциях и воспалительных процессах в желчевыводящей свете- |
ме. В целом Р. vulgaris, Р. morganii и Р. rettgeri составляют (,
лишь '/ю часть от числа культур различных видов протеев, вы-
деляемых из мочи и фекалий человека. Proteus inconstans (Pro-
videncia) выявляют в фекалиях людей при дисфункциях кишеч-
ного тракта, в том числе и связанных с нишевым фактором
[Авдеева Т. А. и др., 1970], в моче урологических больных; его
рассматривают как одну из возможных причин внутрибольнич-
ных инфекций мочевого тракта, ожоговых ран и др.
Биологические характеристики. Все представители многооб-
разного рода протеев имеют форму палочек размером, в сред-
210
нем аналогичны таковому у других энтеробактерий (длина 1,0—
3,0 мкм, поперечный размер 6,4—0,6 мкм). Однако протеям в
большей мере присущи проявление полиморфизма, обнаружение
при микроскопии мазков кокковидных и неправильных очерта-
ний инволюционных форм, при некоторых условиях возможно
образование сферонластов.
Электронно-микроскопическими исследованиями у некоторых
штаммов Р. morganii и Р. mirabilis были обнаружены фимбрии
[Lautrop II., 19741. Протеи не образуют капсул, как правило,
они подвижны, причем более выраженная подвижность имеет
место при температуре 20—22 °C, им не свойственно образова-
ние пигмента. Протеи обладают свойствами, характеризующими
семейство Enterobacteriaceae в целом. Они способны расти на
простых по состав}' питательных средах в широком диапазоне
температур (от 10 до 43°С), причем их рост сопровождается не-
приятным гнилостным запахом.
Характерной особенностью Р. vulgaris и Р. mirabilis явля-
ется роение, образование вуалеобразного налета на плотных пи-
тательных средах., Другие виды рода Proteus не проявляют
спонтанной способности к роению, но это свойство может быть
у многих из них индуцировано посевом па пластинчатые среды
с пониженными концентрациями агара п культивированием при
20—25 °C. Со способностью Р. vulgaris и Р. mirabilis к роению
связан феномен Dienes (1946), выражающийся в том, что по-
сеянные на разных участках пита тельного агара в чашках Пет-
ри штаммы протея с идентичным II антигеном дают слияние
зон роения, а у штаммов, различающихся по 11-антигену, между
зонами роения образуется разграничительная демаркационная
полоса шириной 0,5—2 мм. Известно, что этот феномен исполь-
зуют с прикладными целями. При выделении чистых культур
микроорганизмов с чашек с пластинчатыми средами возникают
затруднения, если в микробной ассоциации присутствует протей,
способный к роению. При наличии в составе питательных сред
солеи желчных кислот (среда Плоскирева, висмут-сульфит
агар, SS-arap, агар Мак Конки и др.) происходит подавление
роения (рост протея в О-форме). Известны и другие рекоменда-
ции для подавления феномена роения (добавление карболовой
кислоты, мочевины, высоких концентраций NaCI и др.). Однако,
как справедливо отмечает S. Т. Cowan (1971). лучшим спосо-
бом является воздействие солей желчных кислот, поскольку ос-
тальные ингибиторы могут иногда превратить питательные сре-
ды в непригодные для роста искомых микроорганизмов.
Для получения чистых культур протея используют посев по
Шукевичу (в конденсационную жидкость скошенного питатель-
ного агара). На среде Плоскирева прогеи образуют крупные
(D 2—3 мм), полупрозрачные изолированные колонии правиль-
ных очертаний, слегка выпуклые с желтовато розоватым (пер-
ламутровым) оттенком; среда в зоне роста колоний подщелачи-
вается и приобретает желтизну. Па висмут-сульфит агаре через
14*
211
48 ч культивирования колонии протея имеют грязно-коричневый
цвет, а после их снятия на среде остается темно-коричневая ре-
дукционная зона. Рост Р. inconstans (Providencia) на среде
Эндо напоминает рост шигелл — колонии бывают некрупными,
нежными, бесцветными.
Среди биохимических реакций протеев особенно характер-
ной, отличающей трибу и род протеев от энтеробактерий других
родов, является дезаминирование фенилаланина. Наличие у
протеев фенилаланиндезаминазы служит существенным диффе-
ренциально-диагностическим признаком. Общими свойствами
представителей рода Proteus являются способность к росту в
присутствии KCN, положительная реакция с метиловым крас-
ным и отрицательная реакция Фогеса — Проскауэра (за редки-
ми исключениями у отдельных штаммов Р. mirabilis).. Протеи
не ферментируют лактозу, арабинозу, дульцит, не обладают де-
карбоксилазой лизина и дегидролазой аргинина, не утилизируют
малонат. Выраженная гетерогенность протеев проявляется в ва-
риабельности их по отношению к ряду субстратов, в частности
манниту, сахарозе, адониту, глицерину, инозиту, мальтозе, са-
лицину, мочевине, желатину, орнитину, утилизации цитрата в
среде Симонса. Эти свойства имеют значение обычно для внут-
риродовой и внутривидовой дифференциации протеев. Учитывая
существование у отдельных видов ряда характерных признаков
целесообразно уделить этому внимание.
Наибольшая близость биохимических реакций характерна
для Proteus vulgaris и Р. mirabilis, хотя Г. П. Калина (1974)
подчеркивает их различия в экологическом плане. Оба эти вида
могут иногда (часть штаммов) проявлять на кровяном агаре
.способность к гемолизу а также давать положительную реакцию
Фогеса — Проскауэра при снижении температуры культивирова-
ния до 22 °C. В работе А. Е. Каплан (1980) обращено внимание
на малую.устойчивость протея при высыхании, что, возможно,
.сказывается на результатах поисков его в некоторых объектах
окружающей среды. -Знакомство с совокупностью биохимических
реакций, присущих типичным культурам Р. vulgaris и Р. mirabi-
lis (табл. 89), делает очевидным, что дифференциация Р. vulga-
ris и Р. mirabilis базируется в основном на способности Proteus
vulgaris ферментировать мальтозу, продуцировать индолЭТ не-
способности декарбоксилировать орнитин; небольшие различия,
выявляемые в некоторых других тестах, носят скорее количест-
венный характер (газообразование в среде с глюкозой, фермен-
тация сахарозы, глицерина, ксилозы) и используются' лишь в
качестве дополнительных.
Proteus morganii (Morganella morganii), описанный N. Mor-
gan (1906) как организм № 1, был впоследствии назван его
именем. Не Только Фенотипические характеристики Р. morganii.
обеспечивающие четкую дифференциацию его в пределах рода
Proteus, обратили на себя внимание. Результаты серологических,
молекулярно-биологических и генетических исследований, свн-
212 '
Таблица 89. Биохимические свойства Proteus vulgaris, Р. mirabilis
Тест или субстрат Proteus Tecr или субстрат Proteus
vulgaris mliab ills vulgaris mirabilis
Лактоза — 41 идол T5 4 —
ljUOKOaa, (газ) -|-. — •I- < ,epoBo тород |- 4 x
JUaxapuaJp -1- X Мочевина (гидро- лиз) 4 4, (4)
Лдон и I — ,'Келагип (22 ”С) t- 4
ШшцедутР - I-, (+) г Фен и л а л ан и и деза - миназа 4 4
Дульцит З-йтозиг — — Лизин декарбокси- лаза
Ксилоза Мальтоза -1- А рппшндегил ре- лиза .—
Рамноза Рафиноза •— — Орнигиндекарбо- ксилззз
"Салицин X X Цитра г Симонса X 4. (4)
•Сорби । — — Цитрат Крисчен- г
Трегалоза X -1- сена 4 4
Целлобиоза (-1). - X АцетэГ) X X
Эскулин X — 1 - 'ПаЛЛИя г —
Реакция с метило- вым красным (37’С) 4 4 Мука г D-Тартрат KCN 4 4
Реакция Фогеса — Проскауэра (37 °C) — 1 J 1 + . Подвижность 4 4
детельствуя о своебразнн Р. morganii, привел» к предложениям
<о ревизии его таксономического положения [Lautrop Н., 1974],
В дополнение к данным таблицы биохимических реакций
(табл. 90) следует указать, чго характерная для рода Proteus
реакция дезаминирования фенилаланина проявляется у Р. mor-
ganii менее интенсивно (слабое зеленое окрашивание), чем у
других видов. Эти наблюдения сочетаются с данными о сероло-
гических отличиях феннлаланпидезаминазы и уреазы Р. morga-
nii от соответствующих ферментов других видов протеев. По
своему поведению иа комбинированных средах для первичной
идентификации, не содержащих мочевины, выделенные, как
«подозрительные» культуры, Р. morganii могут симулировать
принадлежность к патогенным энтеробактериям ((нигеллам и
сальмонеллам).
Proteus rettgeri (назван но имени американского бактериоло-
га L. Reltger, выделившего его в 1904 г.) В отличие от других
представителей рода Proteus большинство штаммов Р. rettgeri
ферментируют маннит, ядовит и, как правило, инозит. Некото-
рые штаммы Р. rctigeri ифоявляют значительное сходство био-
химических реакций с Р. lncoiislans (особенно подгруппы В), в
таких случаях дифференциально-диагностическим является тест
на гидролиз мочевины положительный у Р. rettgeri и четко от-
213
Таблица 90. Биохимические свойства Proteus morganii, Proteus rettgeri, Proteus inconstance (Providencia)
214
рицательный у Р. inconsta.ns. В качестве дополнительных тестов
могут быть использованы реакции на ферментацию маннита и
рамнозы, в большинстве случаев положительные у Р. rettgeri
(см. табл. 90).
Proteus inconstans (Providencia) назван так из-за непостоян-
ства, отклонения его свойств от присущих другим видам этого
рода. Так, у Р. inconstans отсутствует фермент уреаза и свя-
занная с этим неспособность к гидролизу мочевины. Р. incons-
taiis не проявляет активности в отношении лизина, аргинина,
орпптниа, нередко не дает газообразования в среде с глюкозой,
вариабельно реагирует па присутствие в питательных средах
адониса и инозита, что используют для дифференциации в пре-
делах вида. Для облегчения дифференциальной диагностики
различных видов рода Proteus в табл. 91 приведен ряд основ-
ных дифференциальных тестов.
j Таблица 91. Дифференциация видов рода Proteus
Тест или субстрат Виды
Р. vulga- ris Р. 1ГНЧ- hilis Р. пчн - ganii Р. rettgeri Р. incons- tans
Индол 4- 4- 4- 4-
Сероводород 4- 4- —- — —
Мочевина •г 4-. (4 1 + 4- —.
.Желатин (22 °C) 4- -ь .—. —
Орню ин декарбоксилаза — + 4,' —, —.
Мальтоза 4- — —
Антигенная структура и серологическая идентификация. Ан-
тигенная структура бактерий рода Proteus сходна в принципе с
таковой у других членов семейства Enterobacteriaceae, она фор-
мируется из соматических О-антигенов и жгутиковых Н-антиге-
нов, в некоторых случаях у протеев обнаруживали н поверхност-
ные соматические К-антигены. О-антигены термостабильны,
представляют собой линополисахарндио-белковые комплексы;
11-антигены термолабильны, имеют белковую природу. В соро-
ковые — пятидесятые годы была изучена антигенная структура
двух наиболее близких по биохимическим реакциям видов про-
теев (Р. vulgaris, Р. mirabilis), В результате исследований
В. Perch (1948, 1955), F. Kauffmann, В. Perch, (1950) была соз
дана общая антигенно-диагностическая схема (см. .табл. 92).
В ней представлены 49 серологических О-групп и ч9 Н-анти-
генов. Авторы установили, что как О-, так и II антигены могут
иметь мозаичное строение. В нашей стране осуществляется про-
изводственный выпуск специфических агглютинирующих О- и
Н-сывороток, технология изготовления которых разработана
В. 11. Распиской и Э. Е. Романенко (1969—1971). Изучение ан-
тигенной структуры Proteus morganii (Morganella), проведенное
К. Rauss и S. Vol os (1959, 1967), привело к созданию антигенно-
215
Таблица 92. Сокращенная антигенно-диагностическая схема Proteus vul-
garis, Proteus mirabilis
О-антиген Н-антиген Установлено О-антиген Н-антиген Установлено
(О-группа) сероваров (О-грунпа) сероваров
1 [ 2 26 2, 3,6 3
2 1 1 27 2, 3 2
3 1, 2 3 28 1. з 2
4 1.8, 16 3 29 13 1
5 1, з 2 30 1, 2, 4, 13, 6
6 1, 2, 3 3 15
7 1, 3, 4 3 31 1. 2 2
8 1 1 32 1, 3, 5 3
9 1. 2 2 33 3 1
10 1, 2, 3, 4, 5 34 6 1
5 35 2 1
11 1. 2, 3, 6 5 36 3, 7 2
12 1. 2 2 37 17 1
13 1, 2, 3, 4 4 38 1, 2 2
14 1, з, 2 39 18 1
15 1. 7 2 40 4 1
16 1, 9, 14 3 41 1, 2 2
17 1, ю 2 42 1 1
18 1 1 43 2 1
19 1, з, И 4 44 11, 19 2
20 1, 2 2 45 11 . 1
21 1 1 46 17 1
22 1 1 47 1 1
23 1, 2, 3, 12 5 48 1 1
24 1, 2, 3, 13 4 49 2 2
25 1 1
диагностической схемы для этого вида протеев. В схему вошли
32 серологические О-группы и 25 Н-антигенов, отмечена мо-
заичность строения антигена 01 группы, в связи с чем она под-
разделена на 3 подгруппы. У отдельных штаммов Р. morganii
были выявлены термолабильные К-антигены. Производственно-
го выпуска сывороток Р. morganii нет. S. Namioka, R. Sakazaki
(1958) разработали временную антигенно-диагностическую схе-
му Р. rettgeri, в которую вошло 34 серологические О-группы и
26 Н-антигенов, в одной из О-групп (017) ими был выявлен
К-антиген новой формы. В 1974 г. J. Penner с соавт. предложили
новую антигенно-диагностическую схему Р. rettgeri, в которой
представлены 72 различных О-антигена. Производственный вы-
пуск агглютинирующих сывороток к Р. rettgeri в нашей стране
отсутствует. В 1954 г. W. Ewing, К. Tanner и D. Dennard сооб-
щили о разработке ими антигенно-диагностической схемы для
Proteus inconstans (Providencia), впоследствии она была допол-
нена и в настоящее время включает 62 О-группы и 32-Н-анти-
гена. У некоторых штаммов Р. inconstans при изучении их ан-
тигенной структуры были выявлены поверхностные К-антигены,
один из них оказался идентичным а-антигену, описанному ранее
216
M. A. Stamp, D. М. Slone (1944), а другой — р-антнгену, выяв-
ленному ранее у других энтеробактерий и изученному R. Muchin
(1949).
Сведения об антигенных связях в пределах видов, относя-
щихся к роду Pioleus (между сероварами), между видами (в
пределах рода Proteus), а также об антигенных связях с други-
ми родами семейства Enterobacteriaceae носят отрывочный ха-
рактер. Согласно Р. Edwards, W. Ewing (1972), у ряда культур
Р. morganii выявлены реципрокные связи О- и Н-антигенов с
О- и Н-антигенами Р. inconstans (Providencia); у Р. morganii
08 с. Р. rettgeri 010; у Р. inconstans выявлены связи по парци-
альным О-антигенам с Р. vulgaris и Р mirabilis. Общеизвестно
антигенное родство Proteus Х19, Х2, ХК с риккетсиями. Меж-
родовые связи О антигена между предоавителями родов Salmo-
nella и Proteus описаны F. Kauffmann и В. Perch (1950), S. Na-
mioka и R. Sakazaki (1958); ио данным 11. Н. Улиско и Е. В. Хо-
лодковой (1967). подобные связи имеют место между протеями
и шигеллами. По данным К. Rauss (1957, 1958) и др, упоми-
навшиеся выше поверхностные антигены Proteus morganii (KI
и К2) идентичны или близкородственны соответственно К66 и
К58 антигенам Е. coli. Констатируя отсутствие систематических
исследований антигенных связей протеев, Р. Edwards и
W. Ewing (1972) подчеркивают необходимость соответствующе-
го широкого изучения и глубокого анализа материалов, что в
результате могло бы, возможно, привести к созданию единой
антигенно-диагностической схемы рода Proteus.
Идентификация видов, входящих в состав рода Pioleus, осу-
ществляется с помощью ряда биохимических тестов, приведенных
в табл. 89, 90. дифференциальную диагностику между видами
облегчает применение тестов, представленных в табл. 91. Полу-
чение серологических характеристик, определение сероваров осу-
ществляют у Р. vulgaris и Р. mirabilis с использованием диаг-
ностических О- и Н-сыворогок производственного изготовления.
Разработка антигенно-диагностической схемы Р. inconstans
(Providencia) (табл. 93) и технологии производства соответст-
вующих агглютинирующих сывороток создает перспективы в бо-
лее широком изучении серологических характеристик и у этого
вида протеев [Холодкова Е. В., 1977].
Накопление данных о выделении представителей рода Pro-
teus из клинических материалов при патологических процессах
в кишечном тракте, моче- и желчевыводящей системах, при ра-
невых осложнениях и т. и. сопряжено с необходимостью оценки
их этиологического значения, с потребностью осуществления
контроля за их возможным распространением в первую очередь
н лечебных учреждениях и разработкой обоснованных мер про-
филактики внутрибольничных инфекций. С этой целью опреде-
ляют у выделяемых культур протеев своего рода «метки», помо-
гающие установлению их связи с патологическим процессом, и
эпидемиологические связи.
217
Таблица 93. Антигенно-диагностическая схема Proteus inconstans (Provl-
dencia) '
О-антнген Н-антнген | О-антнген Н-антиген О-антнген Н-антиген
1 1, 3.4, 11,— 19 2 41 18
2 2 20 4, — 42 15
3 2, 3, 11, 2) 4, И, 23 43 4, 8, 28
18, 22, — 22 1, 2, 3 44 4
4 4, 14, — 23 1, 3, 4, 13, 45 Н, 21, 22.
5 1, 4, 5, 16 20, — 25. 26, —
6 6, 18 24 4, 8, 15 46' 1, 18
7 7 25* 4 47 4
8 4, 17, 19, 26 1, И, 28 48 25
23, 27 27 8, 17 49 1, 4
9 1, 8, 11, 28 9, 18 50 3
16, 21, 25 29 2, 3, 17, — 51 15, 25
10 9, 28, — 30 3, 8, 19 52 4
11 10, 16 31 3, 7, 11, 17, 53 2
12 3, 15 18, 23, — 54 4, —
13 11, 18, 6 32 з, и 55 4, II, 20
14' 4, 12, 16, — 33 1, 23 56 4
15' — 34 18, — 57 29
16 з, 4, 17, 35 18 58 9
24, 25 36 1, 18, 19,— 59 18
17 3, 7, 11, 37 1, 4, 25 60 24
15, 23 38 1, 8, 22, — 61 14
18 14 39 18, 25 62 ?
• 40 23
♦ Наличие L-антнгеиа; • наличие а-антигеиа; — неподвижный вариант.
Определение эпидемиологических маркеров. В качестве ос-
новы для их определения используют антигенную структуру,
биохимические характеристики и др. Так, у Р. vulgaris и Р. tni-
rabilis с этой целью можно провести определение серогруппо-
вой О-принадлежности, а с помощью Н-сывороток и определе-
ние сероваров в пределах О-групп. Для дифференциации штам-
мов по Н-антигенам может быть использован и упоминавшийся
ранее феномен Dienes. По отечественным данным, при кишеч-
ных заболеваниях установленной и неустановленной этиологии
наиболее часто удавалось обнаруживать ОЗ, 010, 028, 026, 030
и некоторые другие серологические О-группы протеев (Р. vulga-
ris и Р. mirabilis), а в пределах каждой О-серогруппы по 2—3
серовара, например, 03: Н2; ОЗ:Н1; 03: ИЗ или 010:1146;
ОЮ:Н41; ОЮ:Н42 и др.
Р. А. Агаева (1979) указывает, что наряду с наиболее час-
тым выявлением при патологии кишечного тракта штаммов ука-
занных 5 серологических 0-групп таковые преобладали и у здо-
ровых людей в той же географической зоне. Протеи серогруппы
03, доминирующие при кишечных инфекциях, обнаруживались
и в продуктах питания, воде, других объектах окружающей сре-
ды, в кишечнике грызунов и др. Несмотря на относительно мень-
шую частоту выделения из клинических материалов Р. morganii
218
«i P. rettgeri могут возникнуть показания к определению О-се-
porpymi (нли сероваров) и у этих видов. В литературе приведе-
ны отдельные сообщения о такого рода исследованиях, прове-
денных с экспериментальными сыворотками. Изучение Р. mor-
ganii, выделенных от больных с кишечными дисфункциями и от
здоровых, ие выявило разницы в принадлежности штаммов к
О-серогрупнам. От больных и здоровых, ио свидетельству
В. Lanyi (195G), выделяли культуры, относящиеся к О1-, O19-,
ОЗ- и O4-cepoi руинам, однако существенно то, что культуры,
выделенные от больных из одного очага, принадлежали к одной
серогруппе. S. Naniioka и R. Sakazaki (1958) приводили данные
о связи инфекций мочевыводящих путей с выделением Р. rettge-
ri серологической групп'ы О1. G. Whiteley, J. Penner и др.
(1977) сообщили, что при нозокомиальной мочевой инфекции,
•охватившей 49 больных из 2 палат, были показаны эпидемио-
логические связи и установлена этиологическая роль Р. incons-
lans В (Providencia stuartii) серологической группы 055, а в
другом описании, принадлежащем тем же авторам, этиологи-
ческим агентом оказался Р. inconstans В (Providencia stuar-
tii) серогруппы 049. При отсутствии производственного выпус-
ка соответствующих агглютинирующих сывороток более доступ-
ным является определение в качестве эпидемиологических мар-
керов особенностей биохимических реакций, варьирующих в пре-
делах видов, т. е. определение биоваров. Так, К. Ranss (1959)
описал возможность выявления 12 биоваров у Р. morganii,
однако откликов в литературе об использовании его схемы не
обнаружено. Для дифференциации на биовары Р. rettgeri
S. Naniioka и R. Sakazaki (1958) рекомендовали шиользовать
отношение этих бакюрий к рамнозе и салицину, дающее воз-
можность выявления 4 биоваров (табл. 91).
Таблица 94. Дифференциация Proteus rettgeri на биовары
Вновары
Субстрат 1 2 3 4
Рамноза — 1- + —
Салицин -1 + —
Э. Б. Романенко (1977) использовала эти рекомендации при
изучении 119 штаммов Р. rettgeri, выделенных из патологиче-
ского материала, из сточных вод и эталонных штаммов. Она
установила, что в сточных водах преобладал 1-й биовар, а
штаммы, выделенные от хирургических, урологических больных
и при кишечных дисфункциях, в основном принадлежали к 4-му
биовару.
Представители вида Р. inconstans, как это указывалось вы-
ше, могут быть дифференцированы на 2 подгруппы: A (Provi-
dencia alcalifaciens) и В (Providencia stuartii), в пределах на-
219
Таблица 95. Дифференциация Proteus inconstans на биовары
Субстрат Proteus inconstans Л (Providencia alcalitaciens) Proteus inconstans В (Providencia stuar- tii)
биовары биовары
> 2 3 4 5 6
Глюкоза (газ) + — + -— — —
Адонит 4- + — —• — +
Инозит — — — — + +
званных подгрупгг возможно деление на биовары с учетом газо-
образования в среде с глюкозой, ферментации адонита и инози-
та (табл. 95).
Вирулентные и умеренные фаги известны для всех видов
протея, отмечают наличие выраженного перекрестного лизиса п
пределах рода у всех протейных фагов, кроме фага Р. morganii
[Lautrop Н., 1974], однако апробированных рекомендаций для
определения фаговаров протеев не существует. Многими иссле-
дователями была описана продукция бактериоцинов разными
видами протея (кроме Р. rettgeri); указывалось, что чувстви-
тельность к бактериоцинам обычно ограничена штаммами того
же вида (лишь Р. vulgaris и Р. mirabilis проявляют перекрест-
ную чувствительность), однако прикладного значения эти на-
блюдения пока не приобрели.
Протеи обладают природной устойчивостью к большинству
широко применяемых антибиотиков. Р. mirabilis в отличие от
других видов может быть чувствителен к ампициллину и цефа-
лоспорину; ряд штаммов Р. morganii проявляет чувствитель-
ность к тетрациклинам и препаратам нитрофуранового ряда.
Р. inconstans в сравнении с другими видами Proteus характери-
зуется устойчивостью к большему числу антибиотиков, однако
обычно он оказывается чувствительным к канамицину и гента-
мицину.
РОД YERSINIA
Классификация и номенклатура. Род Yersinia в соответст-
вии с «Определителем бактерий Берги» (1974) входит в семей-
ство энтеробактерий. Ранее возбудители чумы и псевдотуберку-
леаа относили к роду Pasteurella и именовали Pasteurelln pestis
и Pasteurelle pseudotubcrcuiosis. J. van Loghem (1946) предло-
жил выделить вышеуказанных бактерий в новый род — Yersinia,
назвав его так в честь французского исследователя Иерсепа
(A. Yersin), впервые выделившего возбудителя чумы.
В 1954 г. Н. Mollaret, Е. Thai предложили включить род Yer-
sinia в семейство Enterobacteriaceae. В дальнейшем в род Yersi-
nia был включен возбудитель иерсиниоза—Y. enterocolitica
220
(Pasteurella X), В соответствии с упомянутым «Определителем
бактерий Берги» род Yersinia состоит из 3 видов — Yersinia
pestis (Pasteurella pestis), Yersinia psendotuberculosis (Pasteu-
rella psendotuberculosis), Yersinia enterocolilira (Pasteurella X).
В последнее время вид Y. enterocolitica был дифференциро-
ван на 5 самостоятельных видов (Y. inlcnnedia, Y. kristensenii,
У. frideriksenii, XI, Х2), которые отличаются от Y. enterocolitica
ио отношению к сахарозе и рамнозе [Bercovier Н. et al., 1980].
В связи с тем что роль последних видов иерсиний в гтатологии
человека еще не установлена, дальнейшее изложение будет по-
священо в основном Y. enterocolitica, вызывающим заболевание
человека. В данном руководстве не будет рассматриваться
Y. pestis — возбудитель чумы, так как его научением занимает-
ся специальная сеть научных и практических' учреждений. Кро-
ме того, с помощью методики, применяемой для выделения ки-
шечных нерсиний от людей, выделить Y. pestis практически не-
возможно, так как этот микроорганизм не растет на средах в
тех условиях культивирования, при которых выделяются
Y. psendotuberculosis и Y. enterocolitica. Необходимость диффе-
ренциации возбудителя чумы, особенно от возбудителя псевдо-
туберкулеза, может возникнуть при исследовании материала от
грызунов, когда посев органов производится сразу на плотные
питательные среды.
Возбудитель нсевдотуберкулеза впервые был выделен в
1883 г. L. Malasses и W. Vignal. Несколько позже С. Eberth
(1886), выделив культуру и изучив ее па лабораторных живот-
ных как спонтанно болеющих, так и зараженных в эксперимен-
те, отметил сходство патологоанатомических изменений внутрен-
них органов погибших животных с таковыми при туберкулезной
инфекции и назвал изучаемый микроорганизм «псевдотуберку-
лезным». В 1889 г. Л. Pfeiffer детально описал этот микроорга-
низм и назвал его Bacillus pseudotuberculosis rodentium. Было
установлено широкое распространение псевдотуберкулезных
бактерий среди диких и домашних животных, у которых они вы-
зывают заболевание. Возбудитель псевдотуберкулеза по своим
свойствам сходен с возбудителем чумы. У человека этот микро-
организм вызывает заболевание, сопровождающееся энтеритами,
энтероколитами и тяжелой генерализованной инфекцией с мно-
жественными поражениями отдельных органов и систем.
В 1963 г. в Европе появились сообщения о выделении от
больных люден и животных возбудителей, которых сначала от-
несли к роду pasteurella. обо.знвчий их как Pasteurella X. Ретро-
спективно было установлено, что подобные микроорганизмы
были выделены в 40-х годах в США, но их классифицировали
как атипичных возбудителей нсевдотуберкулеза. В последую-
щем бактерии, выделенные в Европе и США, идентифицировали
как единый микроорганизм и на основании ряда таксономиче-
ских признаков включили в род Yersinia. Yersinia enterocolitica
широко распространены в природе. Выделены они от грызунов
22Г
как диких, так и синантропных, от домашних животных (коров,
•свиней, собак, кошек), у которых регистрируется заболевание,
иногда протекающее как тяжелая смертельная инфекция.
У человека У. enterocolitica вызывают острую кишечную ин-
фекцию, генерализованную инфекцию и сепсис.
Биологические характеристики. Y. pseudotuberculosis и
У. enterocolitica — палочки с закругленными концами от 0,8 до
1,2 мкм в длину и от 0,5 до 0,8 мкм в ширину. Размеры палочек
колеблются в зависимости от возраста культуры, температуры и
среды выращивания. С повышением температуры выращивания
(37 °C и выше) микроорганизмы чаще имеют форму палочек,
•однотипных по размерам. В мазках из старых культур палочки
различны по величине и форме. Иногда имеют форму нитей.
В мазках из жидких питательных сред Р. pseudotuberculosis
могут располагаться цепочками, что не наблюдается у У. entero-
colitica. Микроорганизмы окрашиваются всеми анилиновыми
красителями. Выделенные из жидких сред и организма живот-
ных могут окрашиваться биполярно (чаще У. pseudotuberculo-
sis). Бактерии подвижны при температуре 18—20 иС. Подвиж-
ность У. enterocolitica хорошо выражена и ею обладают все
штаммы, тогда как подвижность У. pseudotuberculosis выраже-
на умеренно и не у всех штаммов, особенно в первой генера-
ции.
При более высокой температуре (28—37СС) культивирова-
ния У. pseudotuberculosis и У. enterocolitica всегда неподвижны.
У. pseudotuberculosis имеет 3—5 жгутиков, расположенных пе-
ритрихиально или полярно. У. enterocolitica имеет много пери-
трихиально расположенных жгутиков. Отдельные штаммы
У. enterocolitica имеют фимбрии. Иерсинии — факультативные
аэробы, в условиях строгого анаэробиоза не растут. Не имеют
спор. Некоторые штаммы У. pseudotuberculosis при специальном
культивировании продуцируют слизистое вещество, которое ок-
ружает бактерии в виде капсулы. Есть сообщения о наличии
капсульной субстанции у возбудителен нерсиниоза.
Бактерии неприхотливы и не требовательны к питательным
веществам. Растут на обычных питательных средах (МПА, ага-
ры Хоттингера и Мартена, Эндо, ЭМС). У. pseudotuberculosis
не растут на среде Плоскирева и лишь в некоторых случаях от-
мечается слабый рост на 7—10-й день. У. enterocolitica разви-
ваются на этой питательной среде в виде очень мелких колоний
на 2—3-й день обычно в начале штриха. Оба микроорганизма
дают хороший рост на дезоксихолатцитратном агаре. Па вис-
мут-сульфит агаре не растут при 37 °C и очень слабо— при 22—
28 °C. У. pseudotuberculosis растут при содержании в среде до
4,0% NaCI, а У. enterocolitica и при более высокой концентрации
(4,5—5,0%). В бульоне с тетратионатом отмечено переживание,
но не размножение; в селенитовой среде — умеренное увеличе-
ние числа микробных клеток. В магниевой среде и глицериновом
консерванте оба возбудителя плохо выживают.
222
Оптимальной для роста является pl I среды 7,2—7,4, но воз-
будители могут расти при pH от 5,2 до 9,0. Наиболее благо-
приятна для роста температура 22—28 °C, ио они могут расти
при температуре 37—40 °C, выше 40 °C рост прекращается. Оба
вида бактерий обладают способностью расти при температуре
от 4-4 до Т 14 °C. Через сутки инкубации в термостате при тем-
пературе 22—28°C на агаре Эндо вырастают мелкие (росинки),
круглые, выпуклые, бесцветные, блестящие колонии. На 2-е сут-
ки колонии увеличиваются в диаметре и у Y. enterocolitica при-
обретаю!' розоватый оттенок. На слабощелочных средах (МПА,
Хоттингера, Мартена) вырастают колонии размером от 0,1—
0,2 до 0,5 мм, круглые, сферически выпуклые, с ровным или
волнистым краем, бесцветные, блестящие, полупрозрачные, мяг-
кой консистенции. Колонии Y. enterocolitica более прозрачны и
имеют голубоватый оттенок в проходящем свете, тогда как коло-
нии Y. pseudotuberculosis с более беловато-желтоватым оттен-
ком и менее прозрачны. Часто в посеве Y. pseudotuberculosis
можно отметить полиморфизм колоний по размеру, форме, цве-
ту, особенно при культивировании при 37°C. В этом случае на-
ряду с вышеописанными гладкими колониями вырастают вы-
пуклые, бугристые с фестончатой зоной или без нее, коричнева-
того цвета колонии или колонии более крупные с волнистым
краем, со сферически выпуклым гладким центром. В некоторых
случаях Y. pseudotuberculosis растут в виде колоний с выпук-
лым, бугристым, коричневатым центром и топкой прозрачной
«кружевной» периферической зоной (R-форма), имеющих сход-
ство с колониями Y. peslis. Полиморфизм колоний Y. enterocoli-
tica менее выражен. В условиях культивирования Y. enterocoli-
tica при 37 °C колонии непрозрачны, имеют неровный фестонча-
тый край, выпуклый, сферический, иногда бугристый пли исчер-
ченный центр. Колоний, сходных но строению с R-формами
Y. pestis, нс наблюдается.
При старении колонии увеличиваю гея в размере, приобрета-
ют желто-коричневый оттенок и становятся непрозрачными.
У возбудителя нерсиниоза часто отмечается сливной рост
(табл 96).
В жидкой питательной среде диссоциированные куль-
туры растут в виде хлопьевидного осадка па дне, оставляя
бульон прозрачным, а гладкие равномерно мутят среду. Такой
рост характерен больше для псевдотуберкулезного микроба.
При росте Y. enterocolitica бульон не бывает прозрачным.
Y. pseudotuberculosis и Y. enterocolitica выделяют аммиак,
обладают способностью восстанавливать нитраты в нитриты,
не обладают фибринолитическими, нлазмокоагулирующими и
протеолитическими свойствами. Вызывают гемолиз эритроцитов-
кролика. У возбудителя псевдотуберкулеза выявлена также ак-
тивность в отношении эритроцитов морской свинки, лошади,
барана и ие отмечена по отношению к эритроцитам человека,
собаки, крысы.
223
Таблица 96. Характер колоний иерсиний на различных питательных срезах
I Питательные среды | слабощелочной агар о с | 2-е сутки Диаметр 0.5—1.0 мм. полнмопсЬны ПП ЯА- СЙ <U О ° ° й ч cJ — 3 х со и £ о 3 4*££ о а ± о - о си S с о ф J Ф Ь tr gg?*g sggs e-3°„ gg£« So 5ось чаи i;x u Re и о с неровным фестон- чатым краем. Часто сливной рост
X е j D Диаметр 0,2—0,5 мм, выпуклые исчерчен- ные или бугристые. У части колоний ок- ружающая центр зо- на плотная илн тон- к о w,- о • • к . я а в* 2 о * 2 О' СХ а S3.E ' 45 gg; 2 « з § «? £5е » о, = ga 1е«£« а * х о ”3 Э х2 « . х о w — о га ЧК£ок оСа я 5 9 « ь Р ф 3 . о к з- ч «5 я w Ь\2 ф т и О о 7 S О ~ ЗхЕЯЙ Et&ggS
| 22 “С | 2-е сутки Диаметр 0,2—0,5 мм, круглые, сферически выпуклые с ровным или волнистым кра- ем, с исчерченным или бугристым цент- ром, полупрозрачные Диаметр от 0,3— 0,5 мм и более, вы- пуклые с ровным кплрм. пппзпачные. имеется тенденция к сливному росту
й J Э £ 5 3 зю * ф 32 о. s ~ , * ?; ж S >, « „ Е S.O ¥ X <U С ° ь X ₽«s §°ё
агар Эидо при 22 ®С 2-е сутки Колонии диаметром Л.1—Л9 мм. vnvnnwe. выпуклые, блестящие с ровными краями, бесцветные Колонии подобны Y. psendotuberculosis. но имеют розоватый nTYPWMf
1-е сутки Целкие колонии- росники, круглые, выпуклые, блестя- щие, неокрашен- ные То же
Вид микро- организма Y. pseudotu- berculosis 1 f. enterocoll- Яса
224
Возбудители псевдотуберкулеза и иерснниоза содержат ток-
сичные вещества — эндотоксины. Некоторые, штаммы Р,- pseudo-
tuberculosis и Y. enterocolitica продуцируют вещества, которые
по своим свойствам соответствуют экзотоксинам.
Вирулентность Y. psendotuberculosis колеблется в широких
пределах. Наряду со штаммами, обладающими высокой виру-
лентностью для белых мышей (LDS0— 12,0), в природе цирку-
лируют штаммы низкой вирулентности (LDS0— 31400 000).
В большинстве случаев штаммы, выделенные от человека, ма-
ловнрулентны для белых мышей (Ющенко Г. В., 19671. Отмече-
но также, что один и тот же штамм может быть неодинаково
вирулентным для разных видов лабораторных животных (белые
крысы и мыши, морские свинки, кролики). Практически все
штаммы высоковирулентны для кроликов.
Вирулентность Y. enterocolitica недостаточно изучена, так
как до настоящего времени нет модели для ее изучения. Зара-
жение мышей, морских свинок, кроликов различными способами
(внутривенно, подкожно, впутрижелудочно) практически не
увенчалось успехом. Смертельную инфекцию у лабораторных
животных удавалось получить только после применения различ-
ных способов снижения резистентности (облучения, введения
иммунодепрессантов и др.). В сообщении .1. Alonso с соавт.
(1975) указано, что при изучении большого числа штаммов
Y. enterocolitica были выявлены культуры, естественно патоген-
ные для белых мышей.
Возбудители псевдотуберкулеза и иерснниоза неустойчивы к
высокой температуре. При нагревании до 60—80иС микроорга-
низмы погибают через 15—30 мин; при кипячении при 100°C —
в течение нескольких секунд. Более устойчивы к нагреванию
Y. enterocolitica. К холоду устойчивы, хорошо переносят темпе-
ратуру от —15 до —20 °C и в этих условиях могут длительно
существовать. При температуре от +4 до + 14 °C не только со-
храняются, но и размножаются.
Солнечные лучи действуют губительно. Установлено, что они
в течение 30 мин погибают на прямом солнечном свету и через
6—8 ч при рассеянном. Быстро погибают при высыхании.
Растворы дезинфицирующих веществ (сулема, хлорамин,
карболовая кислота и алкоголь) в обычных прописях убивают
микроорганизмы в течение нескольких минут. Бактерии могут
длительно сохраняться, п при определенных условиях и размно-
жаться в различных субстратах окружающей среды, в том чис-
ле и продуктах — овощах, молоке, мясе и воде.
Основные биохимические свойства Y- enterocolitica и Y. pseu-
dotuberculosis достаточно изучены [Туманский В. М., 1958; Ду-
наев В. II., Ющенко Г. В., 1977; Nilehn R., 1969; Winblad S.,
1978; Bercovier H. el al.4 1980]. Биохимические реакции бакте-
рий рода Yersinia представлены в табл. 97.
Как видно, Y. enterocolitica и Y. psendotuberculosis дают
всегда ..положительную реакцию в следующих тестах: арбутин,
15—817
225
Таблица 97. Биохимические свойства бактерий рода Yersinia
Тест или субстрат Реакция Тест или субстрат Реакция
Адонит X Сероводород —
Амигдалин +. - Мочевина (гидролиз) 4-
L-Арабиноза + Желатин (22 °C) —
D-Арабиноза — Каталаза 4-
Арабитол — Амилаза •—
Арбутин -f- Аргининдегидролаза —
Галактоза -1- ₽-Галактозидаза 4-
ТлпцершД 1 1 Дезоксирибонуклеаза _|_
Гликоген Лецитиназа +. —
Глюкоза (газ) г Лизин декарбоксилаза —
Декстрин X Липаза (твнн-80) +, -
Дульцит — Орнитиндекарбоксилаза +, -
Инозит -i- Фенилаланиндезаминаза —
Инулин — Тетратнонатредуктаза +. —
D-Ксилоза 4-- Триптофан дезаминаза —
L-Ксилоза Цитрат Симонса —
Лактоза — Цитрат Кристенсена — > 4-
Мальтоза -Г- Ацетат 4-
'Маншп>> 4- Малонат
Манноза + KCN —
Мелицитоза —. Мукат —
Мелибноза + a-Meni.i-D-глюкозид —
Рамноза +, - а-Метил-ксилозид —
Рафиноза а-Метил-В-вганиозид —
Рибоза 4- Р-Ксилозидаза (PNPX) — -
Салицин +, - N - Ацети л-глюкоза мин 4-
„Сахароза/ +, - Подвижность (37 °C)
Сорбоза +, - Подвижность (18—20 °C) 4-
Сорбит у + Реакция с метиловым
Трегалоза +, - красным 4-
Фруктоза + Реакция Фогеса — Про-
Целлобиоза +. - скатэра (37 °C) —
Эскулин +. - Реакция Фогеса — Про-
Эритрит — скауэра (22—28 °C) 4-, -
'Индол! +, -
L-арабиноза, галактоза, глицерин, глюкоза, L-ксилоза, маннит,
манноза, мальтоза, рибоза, фруктоза, каталаза, р-галактозидаза;
всегда отрицательна реакция в следующих тестах: адонит, ара-
битол, D-арабиноза, декстрин, дульцит, инулин, D-ксплоза, лак-
тоза, мелицитоза, рафиноза, эритрит, желатин, оксидаза, арги-
ниндегидролаза, фенилаланиндезаминаза, лизиндекарбоксилаза,
триптофандезаминаза, амилаза, KCN. Возбудители иерсиниоза
и псевдотуберкулеза не продуцируют сероводород. В отдельных
сообщениях [Тимофеева Л. А. и др., 1962] отмечено, что на спе-
циальных средах (бульон Хоттингера pH 7,2, 150 мл % аминно-
го азота) возбудитель псевдотуберкулеза может его продуциро-
вать. Как Y. enterocolitica, так и Y. pseudotuberculosis утилизи-
руют мочевину, но это свойство более выражено у возбудителя
псевдотуберкулеза, который ферментирует ее в 1-е сутки (иног-
226
да в течение G—8 ч). Y. enterocolitica ферментирует мочевину
полностью только на 2-е сутки (при культивировании при 22—
28 СС). Y. enterocolitica и Y. pseudo!nberculosis ферментируют
спирты и углеводы, расщепляя их с образованием кислоты .без
•газа. Несмотря на то, что оба вида иерсиний подвижны при ком:
натной температуре, характер подвижности различен для каж-
дого. Так, при посеве уколом в полужидкий агар (0,3%) через
18—24 ч возбудители псевдотуберкулеза вызывают помутнение
вокруг укола нли только на отдельных участках, тогда как при
посеве возбудителей иерспииоза зона помутнения значительно
шире, особенно в верхних слоях, но весь столбик агара никогда
не бывает мутным.
Реакция Фогеса — Проскауэра при 37 °C отрицательна у обо-
их возбудителен, а при 22—28°C она положительна только у
Y. enterocolitica. Оба возбудителя не утилизируют цитрат Симон-
са при 37 °C и 22—28°C. Различно относятся эти возбудители
к ацетату: Y. enterocolitica серовара 09 растут на нем, тогда как
Y. pseudotuberculosis и Y. enterocolitica других сероваров не рас-
тут. По отношению к амигдалину, D-ксилозе, мелибиозе, рам-
нозе, салицину, сахарозе, сорбиту, сорбозе, трегалозе, целлобио-
зе, эскулину, индолу, тестам на дезоксирибонуклеазу, липазу,
орнптпндекарбоксилазу, редукцию нитратов имеются различия
как между Y. pseudotuberculosis и Y. enterocolitica, так и у от-
дельных био- и сероваров Y. enterocolitica. В табл. 98 представ-
лены различия ферментативных свойств Y. pseudotuberculosis и
Y. enterocolitica.
Как видно из данных таблицы, дифференциальными тестами
являются использование амигдалина, мелнбиозы, рамнозы, са-
Таблица 98. Биохимические свойства иерсиний
Тест или субстрат Реакция Тест или субстрат Реакция
У. p-etido- tubcr- ciilosis Y. entero- colitica У. pseudo- tuber- culosis У. entero- colitica
Амигдалин — 4- Дезоксирпбону-
D-Ксплоза I +. - клеаза + —
Мелибноза -I- - Деци г и н аза — • 4-
Рамноза 4- Липаза (твнн-80) — +. -
Салицин 4- -h. - Орнигнндекар-
Сахароза — + боксплата +. -
Сорбит — 4- Тетрагионатредук-
Сорбоза — — + таза 4-
Трегалоза 4- 4-. - Ацетат 1 4-
Целлобиоза — + Реакция Фогеса —
Эскулин 4- + , - Проскауэра
Индол .— . +, - (18-55 "С) —- 4-
0-Ксилозидаза Ннтратредуктаза — 4-. -
(PNPX при 37 °C) 4- —
1.5*
227
харозы, сорбозы, сорбита, целлобиозы, тесты на орнитпндекар-
боксплазу, дезоксирибонуклеазу, реакция Фогеса — Проскауэра
(при 18—25 °C).
Таким образом Y. pseudotuberculosis и Y. enterocolitica диф-
ференцируют по тестам, указанным в табл. 99.
“г Таблица 99. Биохимические свойства, дифферен-
цирующие Y. pseudotuberculosis и Y. enterocolitica
Реакция
Тест или субстрат
Y. pseudotu-
berculosis
Y. enteroco-
litica
Амигдалин
Мелибпоза
' Рамноза
’• Сахароза
v Сорбит
Сорбоза
Целлобиоза
РКсилозндаза (PNPX
при 37 °C)
Дезоксирибонуклеаза
Тетратионатредуктаза
'/Реакция Фогеса — Про-
скауэра (18—25 °C)
Отношение к рамнозе и сахарозе является важным призна-
ком, учитываемым при дифференциации Y. pseudotuberculosis и
Y. enterocolitica, выделенных от человека. Дополнительными
тестами могут быть более активная подвижность Y. enterocoliti-
са в 1-е сутки и быстрый и полный гидролиз мочевины возбу-
дителем псевдотуберкулеза в 1-е сутки.
Разделения на внутривидовые категории по биохимическим
свойствам у штаммов Y. pseudotuberculosis, выделенных от лю-
дей, животных и из окружающей среды, нет. Все штаммы неза-
висимо от диссоциации, температуры и среды выращивания од-
нотипно реагируют в биохимических тестах. Отмечена более
поздняя реакция (через 72 ч и более) в тестах с арбутином, са-
лицином, на дезоксирибонуклеазу, с малонатом, а также в от-
ношении ферментации рафинозы у 10% штаммов.
Другой представитель рода Yersinia — Y. enterocolitica име-
ет 5 биоваров. Существует несколько схем разделения на био-
вары. В ранее предложенных схемах [Nilehn В., 1969; Wau-
ters G., 1970] имеется несоответствие био- и сероваров, пато-
генных для человека. В соответствии со схемой Nilehn серовар
09 Y. enterocolitica включен в 3-й биовар, а 08 — во 2-й биовар.
По схеме Wauters серовар 09 относится ко 2-му биовару, а
08 — к 1-му.
В последнее время предложена другая схема типирования
этих микробов [Bercovier Н. et al., 1980]. Тесты, по которым
проводится типирование, представлены в табл. 100.
228
Таблица 100. Биохимические свойства, дифференцирующие бновары [ио
II. Bercovier el al., 1980|
Тест или субстрат 1 2 Еповар 3 4 Б
Липаза (тпии-80) Индол D-Ксилоза Сахароза Tpei алоза Ншратрелуктаза Серовары, имеющие клини- ческое значение " +4-4-4-4-Ч- S 09 11++++ uj" о 4- ф 03 1 1 1 +1 1 1
T а блица 101. Биохимические свойства, дифференцирующие Y. enterocolitica
и другие виды иерснннй
Тест или субстрат Y. enteroco- litica 2 02 Е и С «У •л <и XI Y. knstensenii Yersinia

!—•! биовар 1 i 5 биовар X X 4’
Я
О

во

X о
Мальтоза + + h + 4- 4" 4-
Мслибиоза —- - — —- —— +
Рамноза .— — - - - — —. 4- 4-
Рафиноза •— —- - .—, — — 4-
Сорбит 4- —. - - - - ч- —— 4- —
Сорбоза V - 4- — — —
Сахароза Ч- V • —— — -—
Т регалоза -1- — - 4- 4- 4- 4-
Целлобиоза + -1- 4- + — —
Цнграт Симонса (22—28 °C) ч к (V) 4-
Реакция Фогеса — Проскауэра (22— 28 X) + + ч - + __ 4-
Р-Ксилозидаза (PNPX при 37 ’С) — — (V) — — — 4-
Ори итин декарбокси- лаза (V) ч ч - 4- г , 4- —
Пн лол V - - - - (V) —- — —
о-МетилП-глюкознд —-’ —• - - —• —• — —
Нитрат редуктаза 4- — - Ч ч 4- 4- 4" 4-
Примечание. (V) — 10% штаммов дают положительную реакцию через 72 ч.
Так как многие тесты в указанных схемах биотипирования
однотипны, а также для удобства работы в условиях обычных
лабораторий для типирования штаммов, связанных с патологией
человека, предложена сокращенная схема [Ющенко Г. В., Ду-
наев В. И., 1980], которая будет представлена в табл. 106.
229
Таблица 102, Биохимические свойства, дифференцирующие биовары
Y. intermedia
чально отнесенные к виду Y. enterocolitica, разделены на 5 ви-
дов. Более изученными являются Y. intermedia, Y. frideriksenii
и Y. kristensenii и менее — Х2 и XI.
Роль этих видов в патологии человека еще недостаточно ус-
тановлена. Они широко распространены в природе. Их выделя-
ли из воды, рыб, устриц, креветок, почвы, животных и овощей.
У человека описаны единичные находки при острых кишечных
заболеваниях, а также у здоровых людей. Считают, что эти бак-
терии могут быть причиной внутрибольничных заболеваний.
Y. intermedia, Y. frideriksenii, Y. kristensenii имеют много обще-
го с Y. enterocolitica.
В табл. 101 представлены наиболее важные тесты и реакции,
помогающие дифференцировать иерсинии всех видов, в том чис-
ле XI и Х2. Вид Y. intermedia по биохимическим свойствам раз-
деляется на 8 биоваров по отношению к рамнозе, а-метил-глю-
козиду, рафинозе и цитрату Симонса (табл. 102).
Таблица 103. Биохимические свойства, дифференцирующие представителей
рода Yersinia, включая Y. pestis
Тест пли субстрат Y. pestis Y. pseudotuber- culosis Y. enterocoll- tica
Декстрин — —
Мелябпоза —— + —
Мочевина — + +
Подвижность (18—20 °C) — + +
Плазмокоагуляция + —
Теллуритредуктаза —. +
Фибринолиз + -—
Эскулин + —»
При необходимости дифференциации Y. pseudotuberculosis и
Y. pestis учитывают свойства, указанные в табл. 103.
Таким образом наиболее ценными для дифференциации яв-
ляются следующие тесты: отношение к мочевине, подвижность
при 18—20 °C, фибринолиз и плазмокоагуляция. Имеются и до-
230
пюлнительные тесты, в частности наличие фракции I у Y. pestis,
выявляемой в гемагглютинации. При дифференциальном диагно-
зе следует учитывать также неприхотливость к питательным сре-
дам Y. pseurlotuberculosis и Y. enterocolitica и отсутствие в по-
севе полиморфизма колоний Y. pestis.
Обычно Y. pestis растет на специальных средах, причем ко-
лонии вырастают при 28 °C па 2 с сутки и только в R-форме.
В случае подозрения на выделение Y. pestis дальнейшую иден-
тификацию проводят в специализированных учреждениях.
Возбудитель псевдотуберкулеза не имеет различий по чувст-
вительности к фагам внутри вида. Почти все шгаммы Y. pseudo-
tuberculosis лизируются чумным фагом. У Y. enterocolitica за-
регистрированы различные фаговары, к настоящему времени —
десять фаговаров, ио которым и проводят дифференциацию вы-
деленных бактерий.
Чувствительность Y. pseudotuberculosis и Y. enterocolitica к
антибиотикам имеет много общего. Но данным литературы, бак-
терии обладают выраженной чувствительностью к стрептомици-
ну, неомицину, мономицину, тетрациклинам, левомицетину, ка-
нампцпну, колицнну; умеренно чувствительны к полпмиксину-М,
гентамицину; устойчивы к новобпоиину, метициллину, олеаидо-
мицину, карбенициллину, цсфалоридину.
В отношении пенициллина, ампициллина, эритромицина дан-
ные разноречивы. Изучение большой коллекции штаммов Y. еп-
terocolilica и Y. pseudotuberculosis разных био- и сероваров, вы-
деленных от людей с различными клиническими проявлениями
заболеваниями на разных территориях, позволило выявить не-
которые особенности чувствительности указанных иерсинии к
различным антибиотикам.
В частности, установлено, что имеются различия в чувстви-
тельности не только между Y. pseudotuberculosis и ¥. enterocoli-
tica, но и между различными сероварамн этих бактерий. Так,
штаммы Y. enterocolitica всех сероваров чувствительны к лево-
мицетину, стрептомицину, канамиципу, неомицину, мономицину,
иолимнкснну-М, тетрациклинам, рифампицину. К эритромицину
чувствительны штаммы Y. enterocolitica сероваров 09 и 03, тог-
да как 05,27 и 08—устойчивы. К пенициллину чувствительны
около 4% штаммов Y. cub rocolitica сероваров 09 и 05,27 и
устойчивы — 03 и 08. В небольшом проценте случаев (4—10)
штаммы Y. enterocolitica серовара 09 чувствительны к ампицил-
лину, цефалорилнпу, линкомнцину, фузидину и ристомицину.
Y. enterocolitica сероваров 03, 05,27 и 08 устойчивы к этим
антибиотикам. Все штаммы устойчивы к новобпоиину и олеандо-
мпципу. Подобно Y. enterocolitica возбудители псевдотуберкуле-
за сероваров In III чувствительны к левомицетину, стрептоми-
цину, канамиципу, неомицину, мономицину, рифампицину и по-
лимиксину М; устойчивы — к линкомнцину, фузидину, новобно-
шшу, олсапдомицнну. Более воловины штаммов этих сероваров
устойчивы к пенициллину. Чувствительность остальных выра-
2.31
жена слабо. В небольшом проценте (до 10) Y. pseudotuberculo-
sis умеренно чувствительны к эритромицину, ампициллину, це-
фалоридину, ристомицину.
Отмечено различие в чувствительности штаммов, выделенных
на разных территориях. Как правило, при тяжелых генерализо-
ванных или септических формах выделяются штаммы с мно-
жественной устойчивостью.
В последние годы выявлено нарастание устойчивости к тет-
рациклинам и левомицетину.
Антигенная структура и серологическая идентификация.
Y. pseudotuberculosis имеет 3 антигена: жгутиковый (II) и два
соматических (О), один из которых «гладкий» (S), другой «ше-
роховатый» (R). R-антиген является общим не только для всех
псевдотуберкулезных бактерий, но и для Y. pestis. Н-антиген
связан со жгутиковой субстанцией, образуется он при темпера-
туре 18—20 °C, термолабилен. Этот антиген не имеет существен-
ного значения для характеристики микроорганизма. Но S-сома-
тичсскому антигену штаммы Y. pscudotuberculosis разделяют
на 5 сероваров—1, II, HI, IV, V [Thai Е., 1955]. Установлено
также, что типы 1,11 и IV разделяются на подтипы [Knapp W.,
Steuer W., 1956]. В последние годы японские исследователи со-
общили о сероваре VI [Tsubokura М. et al., 1971].
Свежевыделенные штаммы возбудителя исевдотуберкулеза
имеют антигены вирулентности Vi и W, которые теряются При
хранении в условиях лаборатории. Большая часть штаммов, вы-
деленных от человека, животных и из объектов окружающей
среды во всем мире и па территории СССР, принадлежит к сс-
ровару I (около 85—90%). На втором месте по частоте выде-
ления стоят штаммы серовара III (около 8—9%), значительно
меньше (около 1—1,5%) выделяется штаммов серовара IV.
Штаммы Y. pseudotuberculosis серовара II единичны, очень ред-
ки штаммы серовара V. Сообщений о выделении от больных
людей штаммов Y. pseudotuberculosis серовара VI в литературе
пока кет.
Антигенное строение возбудителей иерсиниоза еще недоста-
точно изучено. Бактерии имеют О-антиген полисахаридной при-
роды и жгутиковый термолабильный Н-антиген, разрушающийся
при кипячении [Wauters С., 1970]. Все штаммы Y. enterocoliti-
ca имеют поверхностный антиген энтеробактерий, общий с ря-
дом представителей семейства (Salmonella, Citrobacter, Esche-
richia, Shigella, Klebsiella, Enterobacter, Serratia, Providencia,
Edwardsiella).
У отдельных штаммов Y. enterocolitica, в частности принад-
лежащих к серовару 010, имеется антиген К1, связанный с фим-
бриями. Этот антиген разрушается только автоклавированием
при 120 °C в течение 1 ч. Термостабильный О-антиген Y. entero-
colitica неоднозначен, с учетом его особенностей штаммы делят
на серовары. S. Winblad (1967) разделил изученные нм штаммы
на 9 сероваров. В дальнейшем S. Winblad (1967, 1973), Q. Wau-
232
fcrs с соавт. (1972) установили 34 О-аптнгена и 20 Н-антигенов.
В их работе антигены О обозначены арабскими цифрами от I
до 34, серовары дифференцируют по О-антнгену (О1—026).
Часть сероваров имеет разделение на субсеровары, обозначае-
мые буквами а, 1> и т. л. Существует другая классификация
Knapp, Tahl (1973), где для обозначения сероваров применяют
римские цифры. Классификация Knapp применяется редко.
Принятой во всем мире считается классификация Wauters—
Winblad. Как уже было сказано выше, Y. pseudotuberculosis и
Y. enterocolitica имеют общий с энтеробактериями антиген, за
счет которого могут быть положительные реакции с сыворотка-
ми к отдельным представителям семейства кишечных. Так, у
представителей Y. pseudotiiherculosis отмечены антигенные свя-
зи с сальмонеллами групп В и D, шигеллами и эшерихиямн
| Ющенко Г. В., Дунаев В. II., 1978; Toucas М., Girard С., Mi-
nor L., 1956, н др |. Y. enterocolitica имеет общие антигены с
сальмонеллами, протеями, ссррациями [Ющенко Г» В., Дуна-
ев В. И., 1978; Alivunen Р., 1972; Diaz R., 1973]. Отмечены не-
которые различия антигенных связей с представителями семей-
ства кишечных в зависимости от принадлежности к О-антигеи-
иым группам | Ющенко Г. В., Дунаев В. И., 1979].
В табл. 104 представлены данные об антигенных связях иер-
снннй различных сероваров. наиболее часто выделяемых от лю-
дей, с некоторыми представителями семейства кишечных.
Т а б л и а а 104. Антигенные святи иерсиний с представителями энтеробактерий
Yersinia Сыворотки к бактериям рода
вид В гз е о Salmonella i Shigella Escherichia Proteus Klebsiella Halnia Enterobacter Citrobacter
Y. pseudotu- berculosis То же Y enleroe.o- lilica I III 03 09 1- р r- (S. dyseii teriac 3—7. S sonnei. S. flexneri) | (019,020) +(025,0126, 0127, 020, «408», «9») + + + (P. rellge- ri) — — + —•
Условные обозначения: f имеется связь; — не имеется связи.
Антигенные связи между Y. enterocolitica и- Y. pseudotuber-
culosis очень слабые и не всегда выявляются обычными метода-
ми. Нет связей н между отдельными сероварами этих бактерий.
Отмечаемая в некоторых случаях положительная реакция аг-
глютинации в низких титрах (1 : 20 — 1 : 40) зависит от наличия
233
у всех представителей иерсинии общего энтеробактериального
антигена и антител, вырабатываемых к этому антигену. Что ка-
сается родства с Y. pestis, то возбудитель всевдотуберкулеза
имеет настолько близкие с ним связи, что всегда отмечают по-
ложительные результаты реакций штаммов Y. pseudotuberculosis
е чумными сыворотками, а также псевдотуберкулезных сыворо-
ток со штаммами Y, pestis.
Y. enterocolitica не имеют антигенных связей с Y. pestis или
©ни выражены слабо и выявляются только при специальном ис-
следовании. Y. enterocolitica серовара 09 имеет антигенное род-
ство с представителями рода Brucella [Ющенко Г. В., Дуна-
ев В. И., 1977; Ahvonen Р., Jansson Е., 1968]. Антитела в высо-
ких титрах к возбудителю нерсиниоза обнаруживаются как у
животных, экспериментально и естественно зараженных бруцел-
лезом, так и у людей, больных бруцеллезом, вызванном бруцел-
лами всех типов. Выявлены антитела к бруцеллам и у людей,
больных иерсиниозом [Ющенко Г. В., Дунаев В. И., 1980]. От-
мечено антигенное родство Y. enterocolitica с холерным вибрио-
ном (Barua D., Watanoba Y., 1972) и возбудителем туляремии.
Подавляющее большинство штаммов, выделенных от челове-
ка’при заболевании иерсиниозом, относится к сероварам 03 и
09, несколько реже зарегистрированы серовары 08; 05,27 и
06,30. Изучение принадлежности к разным О-антигенным’груп-
пам 2000 штаммов Y. enterocolitica, выделенных в СССР от лю-
дей и животных, показало, что удельный вес штаммов серова-
ров, связанных с патологией человека, следующий: 09 — 66%;
©3 — 30,5%; 05,27 — 3%; 08 — 0,5%.
В последнее время у больных стали выявляться штаммы се-
ровара 06,30. В единичных случаях от человека выделены
штаммы ceporpynn 01, 04, 07, 010, Oil, 013, 014, 015, 016,
©17, 018 [Vandepitte J., Wauters G., Isebaert A., 1973; Caprio-
li T., Drapeau A., Kasattiya S., 1978; и др]. Некоторые из из-
вестных сероваров выделяют только от диких животных или из
окружающей среды, они не патогенны для человека. В то же
время известны серовары, которые выделяются от животных,
человека и из объектов окружающей среды. В большинстве слу-
чаев штаммы этих сероваров имеют значение в патологии че-
ловека (табл. 105).
Y. enterocolitica серовара 03 распространены на всех конти-
нентах. В северных странах Европы преобладают штаммы серо-
вара 09, в США — 08. В европейской части СССР циркулиру-
ют штаммы сероваров 09 и 03. Выявлено также распро-
странение сероваров 05.27; 08 и 06.30. В северных районах
европейской части страны преобладают штаммы, относящиеся
к серовару 03, в центральной — к 09, а в восточной (Дальний
Восток) — к серовару 06. Другие виды иерсиний в соответствии
с характеристикой О- и Н-антигенов по схеме Wauters распре-
деляются в основном по серогруппам, не патогенным для чело-
века.
234
Таблица 105. Выделение штаммов Y. enterocolitica разных ceporpynn от
человека, животных и ил объектов окружающей среды
Серовар Выделен от
03 02а, О2Ь 01, 04а 05.27 ОН, 012 09 08 05.27; 06.30; 07; О10; 013; 014; Человека, свиньи, коровы, обезьяны, обыкновенных полевок, овощей, мо- локе, мяса Зайцев, шиншилл, человека Шиншилл Шиншилл, человека, собаки, овощей, мяса Животных, человека, воды, почвы, овощей, из объектов окружающей среды Человека, коровы, свиньи, серой кры- сы, обыкновенной полевки, овощей, молока, мяса Человека, обыкновенных полевок, из объектов окружающей среды
015; 018; 019; 020; 021; 022; О4Ь 06 Животных, воды, почвы Человека, животных, воды
016, 023, 024, 025, 026 017 Человека, воды, почвы Человека, рыб, моллюсков, диких грызунов, воды, земли, молока, мяса ЖИВОТНЫХ
Небольшая часть штаммов Y. intermedia относится к серо-
вару 04 (14%) и 017 (8%) и единичные к 25 различным серо-
группам. Остальные нс типируются. Штаммы Y. frideriksenii
распределяются следующим образом: 24% — к 016; 6% —к 01
и 02; 4%—к ОЮ-серогруппам. Часть штаммов относится к
16 разным серогрунпам и часть не нитруется. Штаммы Y. kris-
tensenii в 50% случаев укладываются в серогруппы 012 (26%),
028 (12%) и ОН (12%). К серогрунпам 01 и О2а относится
15% и к 016 — 7%, остальным серогрунпам — единичные штам-
мы ((*10—0,8%; 020- 0,8%; 05 -1,6%). По 11-антигену штам-
мы дифференцируются от Y. enterocolitica.
Определение эпидемиологических маркеров. Y. pseudotuber-
ctilosis, как было сказано выше, внутри вида не имеет разделе-
ния по биохимическим признакам. Все штаммы независимо от
объекта и места выделения однотипны и имеют биохимические
стабильные признаки, ие меняющиеся в зависимости от темпе-
ратуры, типа среды и других условий. °"
Y. enterocolitica имеет значительные колебания биохимиче-
ских свойств и по этим признакам делится па 5 биоваров, роль
которых в патологии человека неоднозначна. В связи с этим оп-
ределение бповара имеет существенное значение в ходе иденти-
фикации выделенных штаммов и изучении эпидемиологии этой
инфекции. .1
235
Многолетнее изучение большой коллекции штаммов, выде-
ленных при заболеваниях человека, привело к предложению ис-
пользовать для типирования следующие тесты: трегалозу,
D-ксилозу, индол, лецитиназу, салицин или эскулин [Г. В. Ющен-
ко, В, И. Дунаев, 1981], что позволило дифференцировать Y. en-
terocolitica, причастных к патологии человека.
В табл. 106 представлено отношение к этим тестам Y. ente-
rocolitica разных биоваров.
Таблица 106. Биохимические свойства, дифференцирующие биовары
Y. enterocolitica
Бновар Тест или субстрат
трегалоза Оксилоза нндол лецитиназа салицин или эскулин
1 + + + + +
2 + + + + —
3 + + .— — —
4 + — — — —
5 —— — — —
При заболеваниях людей выделяются иерсииии, принадлежа-
щие в основном к 3-му и 4-му биоварам и реже ко 2-му и
1-му биоварам. Сообщения о выделении от человека иерсииии,
относящихся к 5-му биовару, пока единичны. Большое значение
яри идентификации Y. pseudotuberculosis и Y. enterocolitica име-
ет определение принадлежности их к определенным О-группам,
в первую очередь к вызывающим заболевания человека. Серо-
типирование проводят в реакции агглютинации на стекле или
в пробирках с кроличьими сыворотками, содержащими в высо-
ком титре антитела к иерсиниям соответствующих сероваров.
Как было сказано выше, Y. pseudotuberculosis делятся на
шесть О-групп, но наиболее часто регистрируемыми являются
серовары I и затем III и IV. В связи с этим в первую очередь
используют сыворотку к Y. pseudotuberculosis серовара I. При
отрицательном результате выделенные культуры испытывают с
сыворотками против сероваров III и IV и затем II, V и VI этих
микроорганизмов.
Серологическая идентификация Y. enterocolitica, так же как
и Y. pseudotuberculosis, начинается с постановки реакции с сы-
воротками к наиболее распространенным сероварам ОЗ и 09,
затем — 05,27; 08; 06,30 и других, которые могут встретиться
у человека.
В табл. 107 представлены биовары и серовары Y. enterocoli-
tica, имеющие и не имеющие значения при заболевании чело-
века.
Таким образом, по принадлежности к тому или иному серо-
вару возможно предположить биовар штамма. Все штаммы
236
Таблица <07. Киовары и серовары V. enterocolitka, патогенные для чел<>-
века .... . *. ....
-___;______________________________________________________________________1_________
- - Серовары . J • •
Бноввры регистрируемые при заболевании , человека ‘ 1 нс регистрируемые
постоянно часто редко 1
л Об, 30 ОЮ, 013, 1а, О4а, О4зс, О4Ь, 05а,
08 014, 017, 016 07, 07/13, 013. 015 018, 019, 020, 022, 023, 024, 025, 026
2 09* .—
3 05, 27 — ОН 01, 04а, 012 -
4 03 — .—
5 — — — 02
* 09 серовар Y. enterocolitica по схеме биотшшрлпания Nilehn отнесен к 3-му бноаа-»
ру, по схеме Vauters — ко 2-му.
Y. enterocolitica серовара 03 относятся к 4-му биовару; 08 и
06,30 — к I-му и 09—-ко 2-му. Штаммы серовара 05,27 отно-
сятся к 3-му биовару.
Фаготипирование возбудителей псевдотуберкулеза не прово-
дят в связи с тем, что этот микроорганизм, кик было сказано
выше, не имеет различий по чувствительности к фагу. Для диф-
ференциации Y. psendotuberculosis от Y.' pestis ставится проба
с разведенными до 1 : 10 и 1 : 100 фагам. '
Фаготипирование Y. enterocolitica возможно, так как среди
этих микробов циркулирую! различные фаговары. В настоящее
время существуют две схемы фаготипировання, предложенные
Р. Nicolle н В. Nilehn (1967), Р. Nicolle, Н. Mollaret, Y. Hamon
с соавт. (1967); В. Nilelin, С. Ericson (1969). Из этих двух схем
следует отдать предпочтение первой. Р. Nicolle вначале разде-
лил культуры на 10 фаговаров, которые обозначил арабскими
цифрами от 1 до 10, а затем им же была предложена римская
нумерация фаготипов и буквенная от а- до i-фагов. Схема была
расширена дополнительно изученными тремя разновидностями
типов культур (а, Ь, с) в группе IX фаговара.
Схема эта представлена в табл. 108. Эталонные штаммы раз-
ных фаговаров для этой основной схемы были получены из
штаммов, выделенных от различных животных и людей. Груп-
па X включала нетиггнруемые штаммы. Для типирования куль-
тур, вошедших в группу X, была предложена другая схема фа-
говаров (табл. 109).
Группа XI основной схемы включает штаммы, не типируемые
фагами двух вышеуказанных схем. Фаготипирование производят
при температуре 25 °C по принятой методике [Anderson Е. S. и
Williams R. Е., 1956].
Вышеуказанные схемы фаготипировання включают штаммы
Y. enterocolitica, выделенные от людей, животных и из объектов
237
Таблица 108. Схема фаготипирования (по Р. Nicolle et at, 1973)
Фаги
вары а ь с d e I • e h i 1 । 1 k 1 1
I zk ± CL i ± CL CL — CL
II ± ± CL CL ± CL ± CL — CL
III CL CL CL CL CL ± CL
IV CL .—. CL CL CL — CL CL — CL
V CL — CL —- CL — — CL — —-
VI — — — -—. — ——J— — -—
VII CL —. CL — CL CL CL CL - CL
VIII CL CL CL CL CL CL CL .—- CL CL CL —
1Ха CL CL CL CL CL CL CL CL CL CL CL CL
IXb CL CL CL CL CL CL CL CL CL CL — CL
1Хс — CL CL CL CL CL — CL CL CL — CL
X*
XI**
* Группа штаммов, типирование которых возможно по дополнительной схеме.
• * Группа метилируемых штаммов.
Условные обозначения: CL — сливной лизис-. +++ единичные резистентные
колонии; — нет лизиса.
Таблица 109. Схема фаготипирования штаммов, не типируемых по основ-
ной схеме (по Р. Nicolle et al., 1973)
Под-
группы
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
Условные обозначения: см. табл. 108.
окружающей среды, в том числе и те, которые в последнее
время выделены в отдельные виды (Y. frideriksenii и Y. kristcn
senii). Штаммы, вызывающие заболевания людей, относятся в
основном к двум фаговарам — VIII и IX, штаммы серовара 09-
относятся к 3-й группе дополнительной схемы. Часто на отдель-
ных территориях отмечают циркуляцию штаммов только одного
фаговара. Все другие штаммы, в том числе выделенные от раз-
личных животных, из объектов окружающей среды, принадле-
жат к различным фаговарам.
Установлено, что все штаммы, выделенные от человека, от-
носятся к VIII, IX и X фаговарам (по схеме Nicolle). К этим же
фаговарам относятся штаммы, выделенные от свиней (VIII, IX,
238
X), обезьян, коров (VIII и IX). Штаммы, изолированные от
шиншилл и зайцев, относятся ко II н XI фаговарам, а выделен-
ные из почвы, воды и других объектов, принадлежат к несколь-
ким фаговарам и типнруются в пределах схемы, но в большин-
стве случаев эти фаговары не совпадают с выделенными от че-
ловека. Штаммы, выделенные из нищи и окружающей среды,
относятся к фаговару X. Имеют место не чипируемые фагами
штаммы, выделенные как от люден и животных, так и из окру-
жающей среды.
РОД EDWARDSIELLA
Род Edwardsiella начал свое существование в 1965 г., когда
W. Ewing, Л. McWhorter с соавт. (1965, 1967) дали его описа-
ние, как нового рода семейства Enterobacleriaceae, принятое
Международным комитетом систематической бактериологии.
1ктзвапие рода происходит от фамилии известного американ-
ского бактериолога R. Edwards. В род Edwardsiella вошли мик-
роорганизмы, обнаруженные и описанные в конце 50—60-х годов
многими исследователями: W. Ewing с соавг. — биотип 1483-59;
R. Sakazaki—Asakusa-группа; В. King, D. Adler—Bartholo-
(iicw-грушга. Представленные упомянутыми авторами характе-
ристики оказались совпадающими и в то же время при сравне-
нии с другими родами энтеробактерий отличающимися своеоб-
разием, обосновывающим выделение этих микроорганизмов в
самостоятельный род. (Ewing W. et al., 1965|.
Классификация и номенклатура. Единственным видом рода
Edwardsiella является вид Edwardsiella tarda. Правомерность
видового эпитета «tarda» оспаривается R. Sakazaki и К- Tamura
(1975), настаивающими на приоритете эпитета «anguillimortife-
iuin» (возбудитель смерит угрей). Международный номенкла-
турный комитет выступил в пользу их предложения, однако до
настоящего времени в литературе принято видовое название
Edwardsiella tarda.
Проведенное D. Brenner с соавт. (1974) изучение гомологии
в последовательности нуклеотидов ДНК 20 штаммов Е. tarda
(полученных из разных источников и разных географических
зон) показа то высокую степень родственных связей (порядка
88%), а при сопоставлении с другими родами энтеробактерий
(из триб Escherichieae, Salmonelleae и Klebsielleae) гомология
выражалась показателями 20- 29%. Таким образом, была по-
казана обоснованность признания Е. tarda как единственного
вида рода Edwardsiella и самостоятельного положения рода сре-
ди других энтеробактерий.
Эдвардсисллы обнаруживают у животных (особенно часто у
рептилий) и людей, больных и здоровых, а также в объектах
окружающей среды, главным образом в воде открытых водое-
мов, однако частота этих находок весьма вариабельна, особенно
239
при сопоставлении данных по разным континентам и странам.
Географическое распространение эдвардсиелл, а также разнооб-
разие их хозяев приводят к аналогиям с сальмонеллами как в
отношении экологии, так и в отношении биологических свойств
[Калина Г. П., 1980]. Сводные данные о географическом рас-
пространении, а также источниках и объектах выделения пред-
ставлены в обзоре Г. П. Калины (1980). Предполагают, что бо-
лее частое выявление эдвардсиелл у людей, проживающих в
тропических экваториальных странах, связано с большим рас-
пространением там змей и других холоднокровных животных.
Данные о частоте носительства эдвардсиелл в кишечном тракте
здоровых люден довольно разноречивы; выявление их коррели-
рует с санитарно-гигиеническими условиями жизни, с распрост-
ранением рептилии в данной местности, однако, несомненно, что
при исследовании фекалий эдвардснеллы находят у здоровых
людей значительно реже, чем у больных острыми кишечными
инфекциями. Поданным В. Г. Финна (197G), выявление эдвард-
сиелл у больных составило 5,2±0,8%, а у здоровых — 0,68 ±
±0,45% (1 = 4,56). Известны примеры обнаружения эдвардсиелл
и в инфицированных ранах, в моче при поражениях мочевыво-
дящей системы, в спинномозговой жидкости при менингосепти-
цемии.
Биологические характеристики. Edwardsiella tarda являются
подвижными, не образующими капсул бактериями, соответст-
вующими определению семейства Enterobacteriaceae. На плот-
ных питательных средах, используемых в работе с энтеробакте-
риями (Плоскирева, Эндо, ЭМС-агар), они растут в виде бес-
цветных полупрозрачных колоний, сходных с колониями пато-
генных энтеробактерий. При росте на висмут-сульфит агаре ме-
таллический блеск у колоний отсутствует, не отмечают и почер-
нения среды под колонией. В средах обогащения (селенитовой,
магниевой, тетратионатной) не размножаются, но и не отмира-
ют. Культурам эдвардсиелл не присущ какой-либо характерный
специфический запах.
По некоторым биохимическим реакциям эдвардснеллы про-
являют поверхностное сходство с эшерихиями, однако в опытах
реассоциации их ДНК было установлено, что эдвардснеллы
дальше от эшерихий, чем шигеллы, сальмонеллы, нитробактеры
и клебсиеллы. Степень родства Е. tarda с Е. coli соответствует
таковой у S. marcescens, Н. alvei, Y. morganii. Биохимическим
реакциям эдвардсиелл свойственна хорошо выраженная ста-
бильность. Они довольно быстро ферментируют глюкозу и маль-
тозу с образованием (за очень редким исключением) газа. Фер-
ментация глицерина большинством штаммов осуществляется
медленно; лактозу, маннит, сахарозу и другие углеводы Е. tarda
не ферментируют. Обращает на себя внимание интенсивная
продукция сероводорода (лишь отдельные биовары характери-
зуются более слабой реакцией на сероводород). Эдвардснеллы
дают положительную реакцию на индол, положительную реак-
240’
Таблица ПО. Биохимические свойства бактерий рода Edwardsiella
Тест или субстрат
Реакция
Тест или субстрат
Реакция
Кск.ина
ЛУаЛТЩна
(MaiuipLj •
Рамно <а
Рафшккш
Салицин
Сорбит
Тpel алоза
Целлобиоза
Эскулни
Реакция с
красным
метиловым
Реакция Фогеса — Про-
скауэра
чЦпдгур
Сероводород
Мочевина (гидролиз)
Желатин (22 °C)
Фенилаланиндезаминаза
Лизиидекарбоксилаза
Api ипнндегидролаза
Орнизиндекарбокснлаза
Цитрат Симонса
Лизрдт Кристенсена
1 кДцст ар
Малонат
Мукат
D-Тартрат
KCN
Подвижность
0-Галактозидаза
+
+
+
+
-I-
X
+
цию с метиловым красным, отрицательную реакцию Фогеса —
Проскауэра, не гидролизуют мочевины, не разжижают желатин,
не утилизируют цитрат в среде Симонса, малонат и мукат. Они
обладают декарбоксилазами лизина и орнитина, но не имеют
феиилаланиндезамнназы. Биохимические реакции бактерий рода
Edwardsiella приведены в табл. НО. При оценке результатов по-
сева подозрительных колоний на те или иные комбинированные
среды для первичной идентификации реакции эдвардсиелл мо-
гут проявлять сходство с реакциями лактозоогрицательных эше-
рнхип, цнтробакгерои, сальмонелл, Р. vulgaris и Р. mirabilis.
Дифференциальная диагностика в подобных случаях не состав-
ляет особых затруднении при использовании ряда доступных
тестов минимального дифференцирующего ряда. Протеи, кроме
того, выдают себя и по характерному запаху. Рекомендуемые
тесты приведены в табл 111.
Антигенная структура и серологическая идентификация.
Антигены эдвардсиелл и антигенные связи их с другими энтеро-
бактериями исследовали Л. McWhorter, W. Ewing и R. Sakazaki
(1967), они же на основе выявленных 49 О-антигепов и 37 Н-ан-
тигенов создали провизорную антигенно-диагностическую схему
эдвардсиелл.
При серологическом изучении коллекции из 394 культур
Е. tarda (поступивших из разных источников) авторам удалось
определить 148 сероваров среди 296 штаммов эдвардсиелл, что
составило 75% от общего числа, подвергшихся исследованию.
По свидетельству Р, Edwards и W. Ewing (1972), для достиже-
|Г» Я17
241
Таблица 1М. Основные биохимические свойства, днфференцнрукицне
эдвардсиеллы, эшерихии, сальмонеллы, цитробактеры и прелей
Тест или субстрат Edwardsiella S Escherichia Salmonella s Citrobacter Proteus
firuncln dl versus* n V) "o E
Сероводород + — 4-. - +. - ' — + 4-
Индол + + . — — — > + + 4- —
Мочевина — — .—. X Г. — 4- 4 (+)
Цитрат Симонса — — X 4- 4- X 4 (+)
Фенилаланин дезаминаза —. — — -— — 4- -1-
Мании 1 — 4- 4- 4- 4- — —
Желатин (22 °C) — (+) — — -1- -1-
• Бновар С. iiitennedius.
ния необходимого уровня определения сероварон (90% и более)
требуется дальнейшая работа но получению дополнительных О-
и 11-сывороток. Таким образом, предложенная провизорная схе-
ма в настоящее время не может быть признана достаточно
полной. Данные об антигенных связях эдвардсиелл с другими
родами энтеробактерий в литературе отсутствуют.
Идентификация внутривидовых категорий у эдвардсиелл
еще не разработана. Р. Edwards и W. Ewing (1972) упоминают
о наличии некоторых указаний о возможной связи ряда серова-
ров с кишечными заболеваниями, но убедительность этих дан-
ных подвергается сомнению. При внекишечной локализации ин-
фекционного процесса подобные сведения заслуживают боль-
шего внимания и доверия. Эдвардсиеллы проявляют чувстви-
тельность к большинству антибиотиков, за исключением коли-
стина, и устойчивость к сульфаниламидным препаратам.
РОД ERWINIA
Первые упоминания о роде Erwinia, входящем в трибу Erwi-
nieae, относятся к 1917—1920 гг., когда по предложению ряда
американских бактериологов был создан новый род, объединив-
ший патогенные для растений бактерии. Род был назван Erwi-
nia в честь известного специалиста в области патологии расте-
ний Erwin F. Smith, который, однако, не считал обоснованным
объединение в одном роду многообразных бактерий лишь по
признаку нх патогенности для растений. Типовым видом рода
Erwinia стал Erwinia amylovora, возбудитель бактериального
ожога груши. На протяжении последующих десятилетий было
описано множество так называемых новых видов, именуемых в
большинстве случаев по имени растения-хозяина или источни-
ков, из которых их выделяли. Таким образом, возникло положе-
ние, при котором сходные микроорганизмы получили различные
242
видовые наименования и, наоборот, разные микроорганизмы
оказались объединенными.
Классификации и номенклатура этой весьма гетерогенной
группы бактерий представляют чрезвычайные сложности, что-
связано с приведенными выше и некоторыми другими обстоя-
тельствами. В то же время значимость их усиливается тем, что
эти микроорганизмы вошли в сферу интересов и медицинских
бактерполотои, поскольку в последние годы появились данные, что-
подобиые бактерии выделяют не только из растений (в качестве
сапрофитов и эпифитов), по и от млекопитающих, включая че-
ловека, в качестве условно-патогенных, оппортунистических
микробов |Slarr М., 19811.
Для разрешения таксономических трудностей были привле-
чены методы геноснстематики: изучение состава ДНК и сход-
ства в последовательности нуклеотидов при гибридизации ДНК
сравниваемых микроорганизмов [Brenner I)., Fanning G., Stei-
gerwalt А., 1974]. Авторы пришли к выводу, что эрвинии прояв-
ляют значительные родственные связи с родом Pectobacteriuni
и другими энтеробактериями. В упомянутой работе D. Вгенпег
с corp, и некоторых других были установлены наличие выражен-
ных внутривидовых связей (по крайней мере 80% гомологии
ДНК) и выраженная дивергенция между видами (от 15 до 55%
связей) у эрвиний.
Хотя полученные данные и привели к ревизии некоторых по-
ложений, однако и в настоящее время приходится констатиро-
вать запутанность, порой противоречивость, в области таксоно-
мии эрвиний. Так, по «Определителю бактерий Берги» (1974) в
трибу Erwinieae входит один род Erwinia, включающий 3 груп-
пы: Amylovora, Herbkola, Carotovora, каждая из которых объ-
единяет но нескольку видов. D. Brenner ссоавт. (1974) рассмат-
ривают в той же трибе 2 рода: Erwinia и Pectobacteriuni, а
W. Ewing и М. File (1971) считают, что род Erwinia, как он
представлен в VII издании «Определигеля бактерий Берги»
(1957), состоит по крайней мере из 4 категорий или групп бак-
। терпи, часть которых не является даже собственно энтеробакте-
! риямн.
Констатируя неудовлетворительное положение с классифика-
цией и идентификацией фитоиатогенных эрвиний, S. Cowan ВО'
1 втором издании монографии [Cowan S., I974J допускает па дан-
ном этапе объединение в роду Erwinia сходных бактерий, выде-
ленных из растений и животных источников, включая человека.
При исследований клинических материалов, а также мате-
риалов от животных, по данным разных авторов [Starr М.,
19811, обычно выделяют эрвинии из группы 1 lerbicola (спнони-
• мы Bacterium typhiflavuin. Erwinia herbicola, бактерии группы
Herbicola-Latliyri). W. Ewing и M. File (1971) классифицируют
' эти бактерии как новый вид рода Enlerobacler — Enterobacter
agglomerans, характеризующийся выраженной вариабельностью
биохимических проявлений, в частности в отношении газообра-
16* 243
яования в средах с глюкозой. Позже W. Ewing (1974) согласил-
ся с отнесением их к эрвиниям.
Бактерии рода Erwinia обнаруживаются у растений (и как
сапрофиты, и как фитопатогенные), их находят и в семенах рас-
тений, и во фруктах, в травах, почве и воде. Начиная с
60-х годов участились сообщения о выделении эрвиний из раз-
личных материалов от животных, а также от здоровых и боль-
ных людей (из мочи, желчи, испражнений, крови, спинномозго-
вой жидкости, отделяемого ран; гноя, мокроты и других кли-
нических образцов) и при внутрибольничных инфекциях.
Биологические характеристики. Эрвинии — это подвижные,
не образующие капсулы бактерии, по размерам и форме соот-
ветствующие характеристикам энтеробактерий. Оптимальной
температурой для их роста является 25—27°С, п'ри 37°С они
могут не расти или давать скудный, замедленный рост. Некото-
.рые представители рода (Erwinia herbicola) обладают способ-
ностью образовывать желтый пигмент, подобный каротиноид-
ному; по культуральным характеристикам их сравнивают с ко-
лиформными энтеробактериями. Как указывалось выше, с па-
тологией человека связано чаще всего выделение Erwinia herbi-
.xola, биохимическая характеристика которых приведена в
табл. 112.
Таблица 112. Биохимические свойства Erwinia herbicola
Тест или субстрат Реакции Тест или субстрат Реакции
.Лактоза X Реакция Фогеса — Про-
Глюкоза (газ) — скауэра X
.Маннит 4- Индол —
•Сахароза 4- Сероводород 4- -
Адонит — Мочевина (гидролиз)
Арабиноза + Желатин (22 °C) 4-
Глицерин X Фенилаланиидезамииаза X
Дульцит — Лизиндекарбоксилаза —-
Инозит X Аргпниндегидролаза —
Ксилоза 4- Орнитиндекарбоксилаза ——
Мальтоза + Цитрат Симонса +
Рамноза 4- Ацетат X
•Салицин X Малонат X
•Сорбит X Мукат •
Трегалоза 4- D-Тартрат
Целлобиоза KCN X
Эскулин X Подвижность 4-. Г-
,р-Галактозндаза Пигмент 4*. —
Реакция с метиловым
красным —
Е. herbicola ферментируют глюкозу, чаще без образования
газа; постоянно ферментируют маннит, мальтозу, сахарозу, ара-
бинозу, рамнозу, ксилозу; вариабельно относятся к лактозе.
244
инозиту, салицилу и глицерину. Опп отрицательны в реакции с
метиловым красным, вариабельны в реакции Фогеса — Про-
скауэра н при утилизации малоната, не образуют индол и серо-
водород, не гидролизуют мочевину, разжижают желатин, обыч-
но растут на цитратной среде Симонса.
Заслуживает особого внимания пх поведение в тестах с ами-
нокислотами. Erwinia herbicola ведут себя вариабельно в тесте
на фснилалапикдезаминазу, но отрицательно в тестах на лизин-
и орнитиндекарбоксилазы и аргннпндегидролазу, что в сово-
купности помогает дифференциации их от ряда родов энтеробак-
терий. Отдельные расхождения в биохимических характеристи-
ках, приводимых в руководствах Р. Edwards, W. Ewing (1972) и
S. Cowan (1974) могут быть связаны как с гетерогенностью
группы Herbicola, так и, возможно, с некоторыми различиями
в питательных средах и других условиях культивирования.
Антигены и антигенные связи эрвиний, очевидно, изучены
недостаточно, так как соответствующие сведения в доступной
литературе отсутствуют.
Глава 4
УСКОРЕННЫЕ И УПРОЩЕННЫЕ МЕТОДЫ
БАКТЕРИОЛОГИЧЕСКОГО ИССЛЕДОВАНИЯ
За последнее десятилетие в мировой практике предложено
значительное число ускоренных и упрощенных методов иденти-
фикации энтеробактерий. Эти методы основаны на выборе наи-
более важных дифференцирующих признаков, для определения
принадлежности бактерий к семейству и роду, а иногда виду.
Выбор наиболее существенных тестов, продуманное увеличение
их числа, оптимальная для данных условий рецептура сред и
удобство оформления наборов создают надежность и эффектив-
ность тех или иных идентифицирующих систем.
Такие системы, в основе которых лежит единый принцип —
рациональный набор дифференцирующих субстратов, сконструи-
рованы различно. Это могут быть комбинированные среды в
пробирках, наборы микроконтейнеров, содержащих отдельные
субстраты, диски, полоски бумаги или бумажные поплавки, про-
питанные определенными ингредиентами, индикаторные каран-
даши. Одни из них предназначены для полной идентификации,
другие — для ускорения и упрощения отдельных этапов ана-
лиза.
К числу комбинированных или комплексных сред, в которых
возможно определение нескольких основных признаков, относят
такие широко известные среды, как среды Клиглера, Олькеииц-
кого, трехсахарный агар с солями железа (TSI), среду Ресселя,
агар с лизином и солями железа (LIA) и им подобные, выпус-
каемые в сухом виде или изготовляемые непосредственно в ла-
бораториях.
В последние годы были описаны многочисленные комбиниро-
ванные среды и в нашей стране. Так, Г. П. Калина предложи.!
ряд комбинированных сред, в частности в 1978 г. двухслойную
универсальную комплексную среду — ДУКС, предназначенную
для сигнальной идентификации энтеробактерий и сходных с ни-
ми грамотрицательных микробов. С помошью ДУКС можно оп-
ределить в одной пробирке образование сероводорода, фермен-
тацию глюкозы, лактозы или сахарозы, наличие уреазы. Пре-
имущество ДУКС перед средой Олькеницкого заключается в
таком расположении мочевины в пробирке, при котором ее рас-
щепление не мешает учету ферментации углеводов. Г. Д. Серон
в 1977 г. рекомендовал полужидкую среду, приготавливаемую
на основе среды Кларка, где в одной пробирке можно опреде-
лить реакции с метилозым красным и Фогеса—Проскауэра. по-
движгпсть, образование газа в глюкозе Введение в первичный
дифференцирующий ряд этой среды даст несомненные преимх-
246
щества во времени, так как учет реакции производят через
18—24 ч.
Как уже было указано, помимо комбинированных сред для
разных этапов бактериоло!нческого анализа, разработаны ком-
мерческие мультисистемы для полной идентификации энтеробак-
терий.
За рубежом некоторые из них получили широкое распростра-
нение: «Гп(его1иЬе>, API20E, Pathotec, R/B, Aficro-ID и другие.
Анализ результатов их применения выявил достоинства и не-
достатки. Оказалось, что <возраст> и концентрация инокулята
могут существенно изменять результаты исследования. Вместе с
тем не исключены выделение смешанных культур, особенно в си-
стеме «Enterotube>, нлн опасность заражения персонала при ра-
боте с Al’I-снстемой, а также другие моменты [Mac E'addin J.,
1981].
В качестве примера коммерческих пробирочных систем назо-
вем известную R/B-систему, наименование которой происходит
от фамилий авторов (Rollender — Beckford). Первоначально она
состояла из двух пробирок: в первой из них определяли фермен-
тацию лактозы и глюкозы, образование сероводорода, фенила-
лаииндезамнназу и лизиндекарбоксилазу, а во второй — под-
вижность, образование индола и орнитиндекэрбоксилазу. Позд-
нее система была дополнена еще двумя пробирками (первая с
цитратом и рамнозой, вторая с рафинозой, сорбитом, арабинозой
и субстратом для цпределения ДНК-азы). Названные дополни-
тельные тесты позволили с высокой точностью дифференциро-
вать все родовые труппы энтеробактерий [Hayek L., Willis G.,
1977].
Заслуживает большого внимания известная система <Entero-
inbo, представляющая собой пластиковою трубку, разделенную
на 8 камер, содержащих готовые для посева питательные среды
с индикаторами. В пей можно определить 9 существенных для
идентификации признаков (сбраживание глюкозы, лактозы и
дульцита, образование сероводорода и индола, утилизация цит-
рата, мочевины, фенилаланина, декарбоксилирование лизина).
Удобство работы с системой <Entcrotnbe» обеспечивает специ-
альная вмонтированная в трубку проволочная петля, которой
снимают изолированную колонию с чашки первичного посева.
Через отверстия в перегородках камер петлю протягивают через
все камеры, заражая каждую из них. Совпадение результатов
идентификации при сопоставлении с классическим методом для
большинства энтеробактерий достигало 96,4%. О некоторых не-
достатках системы уже упоминалось. Ложные реакции, отрица-
тельные при недостаточной посевной дозе и положительные при
избыточной наблюдались в основном на средах с фенилалани-
ном, цитратом, мочевиной, а также при образовании газа из
глюкозы [Mac I-nddlti .Ц 1’1Я|], Hi.ui.io признание сочетание ИС*
Польяойлппя системы «Enlerofube» с компьютерной обработкой
результатов |I/ard D. cl а!., 1977]. Это так называемые
247
ENCISE I — схема 1-й генерации, идентифицирующая до рода, и
ENC1SE II—схема 2-й генерации, идентифицирующая до вида.
Применение этих схем позволило установить недостатки систе-
мы и предложить пути их устранения.
Широкое признание за рубежом получила система API 20Е,
сконструированная в виде пластиковой полосы с 20 микрокон-
тейнерами, содержащими набор сухих питательных сред с раз-
личными субстратами или реактивами. В их числе дифференци-
рующие аминокислоты, углеводы, желатин, мочевина, реактивы
на сероводород, индол, ацетоин, р-галактозндазу и др. В каж-
дый микроконтейнср пастеровской пипеткой вносят необходимое
количество микробной взвеси. Пластину помещают в специаль-
ный футляр и выдерживают при 37 °C в течение 18—24 ч.
API 20Е-система позволяет с достаточной точностью иденти-
фицировать до 96,4% энтеробактерий. Недостатками системы
считают возможность высыхания сред в лунках в течение инку-
бации, появление ложноположительных реакций в среде с лизи-
ном при выращивании протеев и др.
Положительную оценку получил и сравнительно новый набор
Micro-ID-система, включающая 15 основных дифференцирующих
биохимических тестов. Это набор бумажных индикаторных дис-
ков, размещенных в лунках пластикового лотка. Существен-
ным является то, что максимальный срок учета результатов со-
ставляет 4 ч. По сравнению с общепринятым методом Micro! D-
система дает 1,5% ошибок, тогда как API 20Е— 4,7% по дан-
ным S. Edberg с соавт. (1979). Сравнительную идентификацию
авторы осуществляли с помощью компьютера.
Практическое применение нашли и системы тестов для уско-
ренной диагностики, оформленные в виде наборов бумажек, про
питанных дифференцирующими реагентами. Из них наиболее
известен коммерческий набор PathoTec [Mac Faddin J., 1981J,
представляющий собой бумажные полоски, снабженные инди-
каторными поясками и предназначенные для выявления фермен-
тов или конечных продуктов обмена веществ. Система позволяет
определять до 10 признаков. Учет реакции в большинстве тестов
через 1—4 ч. По данным Н. А. Хоменко (1977), тесты на цито-
хромоксидазу, нитратредуктазу, фенилаланиндезаминазу, обра-
зование индола и ацетоина обеспечивали надежные результаты
для всех испытанных родов энтеробактерий. Для шигелл с конт-
рольными совпадали также результаты, полученные в средах с
лизином, цитратом и мочевиной.
Сравнительное изучение наиболее популярных мульти-систем
(♦Enterotube, API 10Е, API 20E, PathoTec и др.) в сопоставле-
нии с классическим методом бактериологической идентифика-
ции привело большинство исследователей к выводам, совпадаю-
щим с данным A. Courtieu и F. Goudard (1978) о том, что си-
стема PathoTec обеспечивает совпадение результатов с традици-
онным методом в 91,8%, «Enterotubo — в 84,7%, API 10Е —
в 96,9%, a API 20Е — в 99,6% случаев.
248
В нашей стране В. М. Никитиным и С. В. Плугару в 1972—
1974 гг. были разработаны углеполные бумажные диски (УВД),
пропитанные углеводами с индикаторами и покрытые защитной
пленкой. Реагенты совмещали с культурами, выращенными в
агаровой или в жидких средах | Никитин В. М., Плугару С. В.,
1979|.
Тем же коллективом (кафедра микробиологии Кишиневского
медицине кого института) созданы также индикаторные угле-
водно-бумажные поплавки (УБП), позволяющие определять
ферментативную активность бактерий в жидких средах (в пеп-
тонной воде, слабощелочных бульонах, стерильной водопровод-
ной поде пли изотоническом растворе натрия хлорида), помещая
их в пробирки или лунки (мастиковых панелей [Никитин В. М.,
Плугару С. В., 1979]. Набор углеводных сред пополнен также
средами с. солями органических кислот (ацетат, тартрат, мало-
нат, цитрат), что значительно расширяет возможности диффе-
ренциации [Никитин В. AI и др., 1978].
Особый интерес представляют разработанные упомянутыми
авторами и другие тест-сипемы. Так, на бумажной карте разме-
щены в шахматном порядке 20 углеводных субстратов (различ-
ных или одноименных в зависимости от цели исследования). На
эти субстраты истлей наносят испытуемую культуру и после
кратковременной инкубации при 37 ъ (от 15 мин до 2—5 ч)
учитывают результат. Предложен также оригинальный набор
«фермент-карандашей», содержащих ферментируемый субстрат
и индикатор pH в жировосковой основе, которые позволяют не-
медленно опредетять отношение микроорганизмов к субстратам,
нанесенным в виде каран taunioro штриха на обычное стекло
|Ннкигнн В. М., Плугару С. В., 1979]. Кроме того, предложены
новые разновидноеin устройств для ускоренного определения
биохимической активности бактерий нолисубегратная тест-сис-
тема (II ГС) в виде диска с тест-субстрата ми, помещаемого в
чашку Ikipn. и энзимо-индикаторная лента (ЭЛ) [Георги-
на Ф.‘ II., |Ч81|.
Большая работа по созданию и апробации новых бумажных
тестов (на уреазу, лизин- и орнитиндекарбоксилазу, аргининде-
гидролазу, иптохромоксидазу, индотообразованне) проведена в
Горьковском HI III эпп (смпологин и микробиологии И. Н. Бло-
хиной, В. М Лавровской, I’. III. А Отман и др. (1977, 1978).
В пашей стране осуществляется производственный выпуск
систем, именуемых СНБ (системы индикаторные бумажные)
для ускоренной идентификации энтеробактерий и вибрионов.
Они представляют собой пропитанные тем или иным субстратом
(углеводом, аминокислотой и др.) н индикатором диски (диа-
метром 0,9—1,0 см) или полоски (длиной 8—10 см и шириной
до 1 см) хроматографической бумаги, стабилизированные поли-
мерным покрытием (водным растворим поливинилового спирта).
Желатиназу определяют с помощью диска из засвеченной и
проявленной фотопленки.
249
Названные системы выпускает Горьковский НИИ эпидемио-
логии и микробиологии в виде нескольких наборов (№ 1, № 2«А»,
№ 2«Б» и № 3) разного целевого назначения [Андреева 3. М.
и др., 1983].
Набор № 1, включающий 13 наименований, предназначен
для идентификации вибрионов.
Набор № 2«А» — малый, включающий 9 наименований, пред-
назначен для межродовой дифференциации энтеробактерий. Он
позволяет определять следующие тесты: ферментацию лактозы,
р-галактозидазу, утилизацию цитрата и малоната, гидролиз мо-
чевины, дезаминирование фенилаланина, декарбоксилирование
лизина, образоване индола и сероводорода.
Набор № 2«Б» — расширенный, включающий 25 наименова-
ний, предусматривает возможность видовой идентификации эн-
теробактерий по отношению к глюкозе, лактозе, сахарозе, ара-
бинозе, манниту, инозиту, рамнозе, ксилозе, мальтозе, сорбиту,
адониту, салицину, дульциту, лизину, орнитину, фенилаланину,
утилизации малоната и цитрата, образованию индола и серово-
дорода, выявлению оксидазы, р-галактозндазы, уреазы, желати-
назы.
Набор № 3, предназначенный для ускоренного определения
обсемененностп воды кишечной палочкой, состоит из 2 компо-
нентов, обеспечивающих определение ферментации глюкозы и
теста на оксидазу.
Срок годности наборов для идентификации энтеробактерий
(№ 2«А» и № 2«Б») один год.
Для воспроизведения аминокислотных тестов и определения
утилизации цитрата и малоната к наборам прилагают забуфе-
реиный изотонический раствор натрия хлорида pH 5,4—5,6.
Работа с СПБ требует наличия чистой 18—24-часовой ага-
ровой культуры испытуемого микроба. Для воспроизведения
тестов на ферментацию углеводов можно использовать как ма-
териал, взятый бактериологической петлей, так и капли мик-
робной взвеси в растворе натрия хлорида или бульоне.
Для определения цитохромоксидазы суточную агаровую
культуру растирают петлей на соответствующей индикаторной
бумажке, помещенной в чашку Петри. Оксидазоположительные
культуры (не энтеробактерии) дают при этом синее окрашива-
ние, появляющееся в течение 30—СО сек; а оксидазоотрпцатель-
ные не изменяют окраски индикаторной бумажки. Па одной бу-
мажке можно испытать не более 10—15 культур.
Образование индола определяют в пробирках с 0,2—0,3 мл
изотонического раствора натрия хлорида pH 7,2—7,4, в котором
суспендируют полную бактериологическую петлю суточной ага-
ровой культуры, а затем стерильным пинцетом опускают в про-
бирку сложенную вдвое «индольную» бумажку так, чтобы ко-
роткий конец (имеющий желтовато-серую окраску) находился
над поверхностью суспензии Инкубацию посевов проводят
при 37°С в течение 2 ч, однако, как правпло, положительный
250
результат — красно-малиновое окрашивание короткою конца
бумажки — выявляют уже через 30—40 мин
Для определения гидролиза мочевины в пробирки с приго-
товленной описанным путем суспензией культуры помещают ин-
дикаторный диск, инкубируют при 37 °C 2 ч. Положительная
реакция в виде розово-малинового окрашивания обычно прояв-
ляется через 30—10 мин.
Способность дезаминирован, фенилаланин определяют в
суспензии культуры, погружая в нее диск с фенилаланином.
После одного часа инкубации при 37 °C в чту же пробирку по-
гружают другой диск — с хлорным железом. При положитель-
ном результате через 10—15 сек появляется зеленое окрашива-
ние.
Наличие у культуры 0-галамозилазы выявляют, помещая в
суспензию культуры соответствующий диск с последующей ин-
кубацией при 37 °C в течение 4—5 ч. Предварительный учет
возможен через 1 ч. При положительной реакции диск стано-
вится желтым.
Образование сероводорода определяют при выращивании
культур в чашках Петри на слабощелочном агаре или в про-
бирках с полужидким питательным агаром (0,4—0,6%),
pl 1 7,2—7.1. Посев испытуемых агаровых суточных культур на
поверхпосп, агара в чашке Петри делают петлей в виде площа-
док (около 0,.г> см’), поверх которых помешают индикаторные
диски, затем чашку ставят в термостат на 18—21 ч ври 37 °C.
Предвариюльпый учет возможен через 5 ч. Положительная
реакция проявляется в виде почернения диска или среды под
ним При пробирочном методе диск помет шот на поверхность
полужидко! о шара, предварительно засеянного сколом (суточ-
ной агаровой культурой). Инкубация и учет аналогичны ука-
занным выше. В пробирке с полужидким агаром можно одно-
временно определять подвижность бактерии
(>прсд<*ленпе желатиназной акшнностн проводя г в суспен-
зии суточной шаровой культуры испытуемо!<» пнамма (в 0,2—
0.3 мл пзоюнпческого раствора натрия хлорида. pH 7,2—7,4),
помещая в нее диск засвеченной и проявленной фотопленки, с
шк-ледующей инкубацией при 37 С 18—21 ч Предварительный
учет возможен через 4—Г» ч. Положительный результат выра-
жаеюя в просветлении диска фотопленки п выпадении черного
осадка восстановленного серебра.
При определении отношения к аминокислотам, а также ути-
лизации цитра।а и малоната полную бактериологическую пет-
лю суточной шаровой культуры испытуемою штамма необхо-
димо суспендировать в 0.2 0,3 мл забуф< р<иного раствора нат-
рия хлорита pH 5.1—5,6. после чего в пробирки стерильным
ииннетом помещают сооттчствующнс тосту индикаторные дис-
ки и выдерживают при 37 I . 18 21 ч. Содержимое пробирок,
н которые помещены «аминокислотные» лиски, заливают сте-
рильным вазелиновым маслом (0,1 0,2 мл). В тестах на утили-
251
зацию цитрата и малоната возможен предварительный учет че-
рез 5 ч. Положительный результат в этих тестах проявляется
малиново-красным окрашиванием, в тестах с аминокислота-
ми — синим или интенсивно зеленым.
Ферментацию углеводов можно определять на плотной ага-
ровой среде в чашках Петри (10—12 мл питательного агара,
pH 7,2—7,4) или в пробирках, содержащих по 0,2—0,3 мл изо-
тонического раствора натрия хлорида пли 1 % пептонной воды,
pH 7,2—7,4. При применении чашечного метода посевы культу-
ры делают петлей в виде площадок пли наносят на поверхность
агара капли смыва культуры, на которые накладывают флам-
бированным пинцетом «углеводные» диски. На одной чашке ис-
пытывают не более 6—7 культур. Для определения газообразо-
вания из глюкозы на диски с глюкозой наносят 4—5 капель
расплавленного и охлажденного до 45 °C полужидкого (0,6—
0,8%) агара. При пробирочном методе культуру вносят петлей
в 0,2—0,3 мл указанной жидкости, после чего в каждую про-
бирку погружают стерильным пинцетом диск с углеводом.
Чашки или пробирки инкубируют в термостате при 37 °C
5 ч. Диски, помещенные на чашки с агаром, при ферментации
углевода изменяют свой цвет из красного в желтый (иногда
изменяется и окраска среды вокруг диска). При испытании в
пробирках через тот же срок при положительном результате
среда приобретает желтую окраску различных оттенков.
В более поздние сроки учет ферментации углеводов на ага-
ровых чашках может быть затруднен в результате подщелачи-
вания среды за счет протеолиза белков (возможно восстановле-
ние красного окрашивания дисков). Тесты, воспроизведенные
в пробирках, можно учитывать и через 18—24 ч, но для оценки
газообразования при этом необходимо помещать в среду при
посеве маленькие кусочки стерильной гигроскопической ваты.
К числу недостатков, которые могут иметь место при СИВ,
следует отнести нечеткость получаемых результатов, что может
быть связано с недостаточной концентрацией микробных клеток
в опытной пробирке, несоблюдением режима pH (погрешности
в обработке посуды при использовании моющих средств), рабо-
той со смешанной культурой или некоторыми другими обстоя-
тельствами.
Несмотря на всю перспективность указанных способов уско-
ренной и упрощенной идентификации бактерий, их преимуще-
ства при массовых исследованиях (экономии времени, питатель-
ных сред, посуды, труда и других затрат), эти методы не долж-
ны в обычных условиях противопоставляться общепринятому
классическому методу идентификации бактерий.
О некоторых недостатках и ограниченных возможностях
упомянутых систем уже было сказано. Кроме того, известно,
что каждый анализ должен быть завершен выделением чистой
культуры для ее дальнейшей идентификации (определение
антигенной формулы, фаговара и т. д.), что возможно не при
252
всех мульти-системах. Помимо этого, для идентификации пред-
ставителен такого сложного семейства, как Enterobacteriaceae,
обладающих разнообразной ферментативной активностью и
значительными отклонениями от обычных признаков, требуется
особенно высокая квалификация бактериологов, способных вне-
сти должные коррективы при применении ускоренных методов
и дополнить их рядом обычных тестов. В противном случае
диагностические ошибки будут неизбежны Аналогичные сооб-
ражения высказаны и авторами ведущих зарубежных руко-
водств [Ewing W., Martin W., 1974; Cowan S., l'»74; Mac Fad-
din, 1981].
МЕТОД ФЛУОРЕСЦИРУЮЩИХ АНТИТЕЛ
Метод флуоресценции (ИФ) пли флуоресцирующих (люми-
несцирующих) антител имеет значительное развитие и приме-
няется для ускоренного выявления, реже идентификации, чис-
тых культур возбудителей многих инфекционных заболеваний.
Однако следует подчеркнуть, что метод ПФ оказывается во
много раз надежнее при выявлении бактерий с большей анти-
генной обособленностью.
Сущность метода заключается в том, что по известному ан-
тителу, меченному флуорохромом (изоцианат флуоресцеина, ра-
домин и др.), определяют неизвестный антиген. В этом случае
реакция антиген — антитело ограничена первой фазой (специ-
фической), без второй — коагуляции комплексов, что имеет из-
вестные преимущества перед другими серореакцпями.
Одним из условий успешного применения метода иммуно-
флуоресценции является иолучение антител высокой специфич-
ности (аффинности). Этому могут способствовать различные
способы обработки иммунных сывороток до их метки флуоро-
хромом. Широко используют специфическую микробную ад-
сорбцию, аффинную хроматографию. Значительной специфич-
ности сывороток достигают их фракционированием химически-
ми веществами: сульфатом аммония, солями легких металлов,
в последние голы риванолом. Однако более эффективным мето-
дом фракционирования признана ионообменная хроматография
с использованном ДЭАЭ-целлюлоз, ионообменных сефадексов
в ионообмепников на основе отечественных гелей ЭД [Аксено-
ва М. ГЕ, 1975; Голшмнд В. К., 1975; Cherry W , 1974]. Возмож-
ны успешные сочетания методов, например микробной адсорб-
ции с ионообменной хроматографией [Голдшмид В. К., Ланд-
сман II. М., 1979].
Серологическая специфичность сыворотки в основном связа-
на с фракцией IgG. Дальнейшая обработка этой фракции про-
теолитическими ферментами дает возможность получать еще
более высоко специфические фракции, такие, как Fab-фрагмен-
ты. Меченные флуорохромом Fab-фрагменты иммуноглобулина
253;
ле вызывают, кроме того, неспецифической флуоресценции гете-
;роструктурнь>х биологических объектов. Это свойство имеет
практическое значение, делая излишним применение контрасти-
рования [Барбан П. С., 1980; Барбан П. С., Пантюхина А. Н.,
1984; Storch W., 1979]. Предложен и иной подход к получению
.антител высокой специфичности, а именно: иммунизация живот-
ных синтезированными антигенами Последние представляют
•собой антигенные детерминанты S-специфических цепей липо-
полисахарида О-антигенов, связываемых далее с бычьим аль-
бумином. Такие сыворотки были п-риготовлены для идентифи-
кации сальмонелл cepoipynn В и D. При использовании этих
сывороток специфичность их была подтверждена в 99% случаев
[Strange R., 1977].
Методом иммунофлуоресценции можно обнаружить энтеро-
бактерии в крови, фекалиях, рвотных массах и другом матерка
ле от больных или из объектов окружающей среды. Преимуще-
ствами метода являются относительная быстрота выполнения,
высокая чувствительность и достаточная специфичность. ПФ
позволяет выявлять бактерии возбудителя в материалах, содер-
жащих любое число сопутствующих микробов, если они не
имеют выраженного антигенного родства с искомым этиологи-
ческим агентом.
Препараты для исследования готовят либо прямым нанесе-
нием материала на предметное стекло (если предполагается
массивное обсеменение), либо с его предварительным подращи-
ванием на соответствующих питательных средах (в жидких
•средах накопления или на плотных селективно-дифференциаль-
ных). При прямом исследовании делают тонкий мазок из жид-
кого материала или из осадка суспензии, сделанной из более
плотных образцов (оформленного стула, пищевых продуктов
и др.). При подращивании посевы в жидких средах выдержи-
вают при 37 °C в течение 16—18 ч, а на плотных — 4 ч. После
этого готовят мазки и отпечатки. Лучшие результаты получают
при сочетании исследования прямых мазков и препаратов посте
подращивания.
Для просмотра мазков используют люминесцентные микро-
•скопы, в том числе МЛД-1, предназначенный для работы в но-
левых условиях. Для создания флуоресценции применяют спе-
циальные осветители и светофильтры.
Существуют прямой и непрямой методы иммунофлуоресцен-
ции При прямом методе происходит непосредственная реакция
антигена с соответствующими флуоресцирующими антителами
результаты которой учитывают с помощью люминесцентной
микроскопии. Для этого метод, мазки исследуемого материала
подсушивают на воздухе, а затем фиксируют трехкратным про-
ведением через пламя горелки нли 96е спиртом, можно смесью
Никифорова Фиксированные препараты помещают вс влажную
камеру (чашки Петри, кюветы, эксикаторы с увлажненной ва-
той или фильтровальной бумагой), наносят на них по капле
25»
люминесцирующей сыворотки (в рабочем разведении), через*
15- 20 мин промывают и просушивают на воздухе Прн работе
с малоизученным оборудованием может понадобиться уточне-
ние рабочего ра {ведения Для этой цели окрашивают заведомо
известный штамм люминесцентной сывороткой, взятой в не-
скольких разведеньях. 'Го максимальное разведение, которое
обеспечивает яркое специфическое свечение бактерии, является
красящим титром. В качестве рабочего разведения принимают
удвоенный красящий титр. Мазки исследуют в темной комнате,,
применяя нефлуоресцирующее иммерсионное масло пли хими-
чески чистый ли метилф галат. Резу-п тэты считают достоверны-
ми после просмотра 25—30 полей зрения. Свечение окрашенных
люмннесцирукипсй сывороткой бактерий считают специфиче-
ским при наличии яркого свечения только периферии клетки
(тело клетки не светится). Для оценки интенсивности специфи-
ческого свечения используют четырехкрестную систему.
Сущность непрямого метода заключается в том, что реакция
проходит в два этапа: соединение антигена с соответствующей
немеченной диагностической сывороткой и затем присоединение
к этой смеси вндоспецифического флуоресцирующего гло-
булина. Непрямой метод чаше применяют для определения не-
известных антигенов, имея возможность использовать более
широкий набор диагностических препаратов, обычных немече-
ных агглютинирующих моноспецифнческпх сывороток, соответ-
ствующих видовой специфичности меченою глобулина.
Дпя непрямого метода на препараты, содержащие антиген»
наносят каплю дна! носгнческой немеченой сыворотки и остав-
ляют при комнатной температуре во влажной камере на 20 мин,
затем тщательно промывают 0,15 М раствором натрия хлорида
(pH 7,2—7,4) для удаления несвязагшихся антител и подсуши-
вают на воздухе. После этого на 10 -20 мин каплями наносят
на мазки люмннесцирующую антивидовую сыворотку против-
глобулинов того вида животного, oi которого была получена
примененная агглютинирующая сыворотка (например, кроли-
ка). Мазки загм промывают, подсушивают и просматривают,
как уже было указано. Для непрямого метода, помимо обыч-
ных контролей, обязателен контроль изучаемого антигена, об-
работанного ашнглобулиновой люминесцирующей сывороткой.
При ПФ прямая микроскопия мазка из нативного материа-
ла от больных при высокой концентрации возбудителя
(5U0 000— 1 00UU00 клеток в 1 г) позволяет дать положитель-
ный или ориентировочный ответ через 45—60 мин. При незначи-
тельной концентрации возбудителя (тысячи—десятки тысяч
клеток) для получения должного >ффекта необходимо приме-
нить метод накопления. Соответственно результаты могут быть
получены через 5 и 20 ч
На основе нммунофлуореспентного метода В. М Никитиным
н Г. П. Постолаки (1976) предложен новый метод — реакция
целлюлозофлуоресцируклцих антипт (РЦФА). Меченные флуо-
255
рохромом антитела насаждают на нитроцеллюлозу, окрашен-
ную бриллиантовым зеленым. Полученные комплексы смеши-
вают на стекле с испытуемым материалом. Результаты учитыва-
ют визуально через 2—3 мин или, при отрицательной реакции,
через 20—30 мин, иногда больше после выдерживания в термо-
стате (во влажной камере). При положительной реакции на
фоне тусклой оранжево-кирпичной флуоресценции частиц цел-
люлозы наблюдают очень ярко светящиеся края микробных
клеток (специфическая реакция + + + +). При этом методе
наблюдается феномен гашения фоновой неспецифической флуо-
ресценции. Метод РЦФА испытан с положительными результа-
тами на материале, содержащем шигеллы, эшерихии и сальмо-
неллы.
В нашей стране выпускают коммерческие сухие люминесии-
рующие сыворотки к антигенам некоторых шигелл, сальмонелл
и эшерихий для прямого метода ИФ, а также сухие люминеспи-
'Рующне аитивидовые сыворотки против иммуноглобулинов ря-
да животных. Подробные указания для их использования име-
ются в наставлениях по применению.
Иммунофлуоресцентный метод, как и другие ускоренные ме-
тоды выявления и идентификации возбудителей из числа энте-
робактерий, может в основном рассматриваться, как ориентиро-
вочный метод, особенно при исследовании фекалий, где безус-
ловно могут присутствовать антигенно-родственные бактерии.
РЕАКЦИЯ КОАГГЛЮТИНАЦИИ (КОД)
Одним из современных методов серологической идентифика-
ции и выявления микроорганизмов и их антигенов может слу-
жить реакция коагглютинации [Kronvall G. et. al., 1970; Kron-
vall G., 1973]. В эту реакцию, помимо обычных агглютинирую-
щих реагентов (антитела и антигены), введен еще один — бе-
лок A. Staphylococcus aureus (штамм Cowan 1). Этот белок
расположен на поверхности клеточной стенки и обладает спо-
собностью выборочно реагировать с Fc-фрагментом иммуногло-
булина G человека, кролика и ряда других млекопитающих.
Связывая лишь Fc-фрагмент, протеин А оставляет свободными
Fab-фрагменты антител IgG, которые могут реагировать с гомо-
генными антигенами. Кроме того, одновременно с Fc-фрагмен-
том из сыворотки удаляются и IgM-антитела, обычно реагирую-
щие с гетерологичными антигенами и обусловливающие пере-
крестные реакции.
Таким образом, диагностическая сыворотка, обработанная
специально подготовленной взвесью S. aureus штамма Cowan 1,
становится высокоспецифичной и в ряде случаев не нуждается
во фракционировании или микробной адсорбции [Хазен-
сон С. Л., 1983].
КОА была предложена для серологического типирования
пневмококков. В дальнейшем установлено, что с ее помощью
256
могут быть обнаружены различные- вирусы, растворимые анти-
гены, токсины. В этих случаях специфический иммуноглобулин,
посаженный на стафилококковые к.егкп. следует рассматри-
вать как ашотельный диагностикам высокой специфичности.
F. Edwards и R. Hilderbrand (1‘»76) показали возможность
выявления ппнелл и сальмонелл ускоренным методом, непо-
средственно oai глютннируя материал колоний в чашках со
средой Мак конки.
В вашей (гране испытание КОА для серологической иден-
тификации и обнаружения шигелл, а также разработка соот-
ветствующих препаратов были предприняты в Ленинградском
НПИЭ нм, Пастера. К настоящему времени разработан и вы-
пускайся производством лиофилизированный стафилококковый
реагент, содержащий белок А. Помимо этого, разработана тех-
нология получения коагглютинирующих реагентов к S. dysente-
liae, S. boydii n S sonnei (без предварительной адсорбции) и
к S flexneri. где предварительная адсорбция сывороток все же
необходима |Хазепсон С. Л. и др., 1982; Хазенсон С. Л., 1983].
С целью серологической птентификации шигелл коагглюти-
пация ставится как обычная реакция агглютинации на стекле.
При этом реакция наступает значительно быстрее вследствие
более высокого содержания антител в реагенте по сравнению с
обычной адсорбированной сывороткой и большей его авидно-
стыо. зависящей от благоприятной для соединения антиген —
антитело ориентации Fab-фрагментов иммуноглобулина на ста-
филококковой клетке (Хазенсон С. Л. и др., 1982, 1983].
Показана и принципиальная возможность обнаружения рас-
творимых антигенов шигелл с помощью КОД. Приготовлены
в лиофилизированном виде КОА-реаи-нты и разработана ра-
и'ид система для обнаружения антигенов некоторых шигелл и
сальмонелл в материале от больных (Нелая 10 А., Белая О. Ф.,
1982].
В связи с достаточной специфичностью и несомненной рен-
таб<льностыо производства реагентов для реакции коагглюти-
нанпи можно считать этот новый способ перспективным как
для сероло! оческой идентификации шигелл, так и для выявле-
ния их растворимых антигенов.
В дальнейшем не исключено привлечение метода КОА и для
работы с другими энтеробактериями.
Приведенными выше методами не исчерпываются возможно-
сти ускорения идентификации выделенных культур или выявле-
ния антигенов искомых бактерий в исследуемых материалах.
Так, известны, рекомендации по выявлению антигенов энте-
робактерий в испражнениях людей и объектах окружающей
среды с применением реакции нейтрализации антител (РНАт).
Успехи в развитии различных иммунологических методов в пер-
спективе позволят использовать в лабораториях иммунофер-
ментный, радвоиммупологический методы, иммуноэлектрофорез
и другие новейшие методики.
17- -817
257
Глава 5
ПИТАТЕЛЬНЫЕ СРЕДЫ И РЕАКТИВЫ’
1. КОНСЕРВАНТЫ
Глицериновая смесь
Состав: Натрий хлорид (NaCl) (0,85%
раствор) — 1000 мл
Глицерин нейтральный — 500 мл
Натрий гидрофосфат безводный
(Na2HPO4) 20% раствор — 150 мл
Приготовление: смешивают первые два ингредиента и
добавляют раствор натрия гидрофосфата в таком количестве,
чтобы довести pH до 7,8—8,0, затем разливают в пробирки или
флаконы по 10 мл, стерилизуют в автоклаве при 112 "С в тече-
ние 15 мин или текучим паром 3 дня подряд. После стерилиза-
ции pH 7,6—7,8.
Фосфатно-буферная смесь
Состав: Калий дигидрофосфат (КП2РО4) — 0,45 г
Натрий гидрофосфат безводный
(Na2HPO4) — 5,34 г
Вода дистиллированная — 1000 мл
Приготовление: ингредиенты смешивают, разливают по
10 мл в пробирки или флаконы, стерилизуют в автоклаве при
120 °C 30 мии.
Буферная глицерино-солевая смесь [Teague О., С1иг-
mann А., 1916] в модификации Сакса [Sachs А., 1934]
Состав: Натрий хлорид (NaCl) — 4,2 г
Калий гидрофосфат (КгНРО4) — 3,1 г
Калий дигидрофосфат
(КН2РО4) — 1 г
Глицерин нейтральный — 300 мл
Вода дистиллированная — 700 мл
Приготовление: ингредиенты растворяют, перемешива-
ют, смесь разливают в стерильные пробирки по В мл и авто-
* При составлении настоящ.З главы использованы данные, изложенные
в ряде руководств [Руководство по микробиологии и эпидемиологии, т. 1./Под
ред. И. М. Великанова, 1937; Ю. А. Козлов. Питательные среды в медицинской
микробиологии, 1950; С. Д. Татаринова. Основные питательш е среды, исполь-
зуемьс работе с эитероб ктериями, 1980; Справочник по микробиологиче-
ским мето »ам исследования/Под ред, М О. Биргера, 1982] и отдельных стать-
ях и в руководствах, указанных в списке литературы.
258
клавируют при 112 °C 30 мин. Рекомендуется с целью лучшего
просмотра раствор слабо подкрашивать феноловым красным.
Изотонический раствор натрия хлорида
Состав: Натрий хлорид (NaCl) — 8,5 г
Вода дистиллированная — 1000 мл
Приготовление: соль растворяют при подогревании,
фильтруют, устанавливают pH 7,0—7,2, разливают в пробирки
по 5—7 мл, стерилизуют при 121 С 30 мин.
2. СРЕДЫ ОБОГАЩЕНИЯ
I' Селенитовая среда [Leifson Е., 1936], модификация
Среда предназначена для накопления в материале сальмо-
нелл.
Принцип действия: пептон является питательной осно-
вой, натрий гидроселенит — ингибитором сопутствующей микро-
флоры; фосфаты обеспечивают буферные свойства, а лактоза
служит компонентом, влияющим на реакцию среды.
Состав: Натрий гидроселснпт (NallSeOs)
без примеси теллура — 4 г
Пептон (желательно венгерский <Рихтер» или чехословацкий «Снофа») — 5 г
Натрий гидрофосфат безводный (Na2HPO4) — 7 г
Натрий дигидрофосфат безвод нын (NaH2PO4) - 3 ft
Лактоза — 4 г
Вода дистиллированная -- 1000 мл
Приготовление: среду готовят из двух растворов.
I раствор. Предварительно определяют количественные соот-
ношения фосфатов при данном образце пептона (гидроселенита
натрия) с тем, чтобы готовая среда имела pH 6,9—7,1. Такая
подтнтровка нужна всегда при изменении серии любого из вхо-
дящих в среду основных ингредиентов.
После установления количественных соотношений фосфатов
к раствору добавляют пептон н лактозу. Разливают во флако-
ны но ВО мл и стерилизуют тек; чнм паром два дня по 30 мин
или такой же срок при 112®С. Количестно фосфатов в рецепте
среды дано в расчете на безводные препараты. При отсутствии
таковых заранее заготовленные навески <выветривают» в тер-
мостате в течение 15—16 сут.
II раствор. 10% раствор натрия гнлроселенита готовят на
стерильной дистиллированной воде ex tempore.
17'
259
Перед началом работы в каждый флакон с 50 мл основного
(I) раствора добавляют 2 мл раствора натрия гидроселенита
(раствора II), асептически разливают по 5—7 мл в стерильные
пробирки и закрывают плотно пробками. Дальнейшая стерили-
зация не требуется. Основной (I) раствор среды можно хранить
в холодильнике 1—2 мес. Для приготовления среды следует ис-
пользовать высококачественный пептон.
Магниевая среда [Rappaport Е., Konforti N., Navon В..
1956]. Модифицирована В. Л. Шигановой и Г. П. Калиной
в 1972 г. (среда М)
Среда предназначена для накопления сальмонелл и содер-
жит три раствора.
Принцип действия: ингибирующий эффект среды для
сопутствующей микрофлоры основан на влиянии бриллианто-
вого зеленого и дегидратирующем действии магния хлорида,
при этом на рост сальмонелл указанные вещества в данных
количествах не влияют; пептон с дрожжевым диализатом соз-
дают достаточную питательную основу для активного размно-
жения сальмонелл, а КН2РО4 — буферность среды.
Состав: Раствор I
Пептон — 4,2 г
Натрий хлорид (NaCl) — 7,15 г
Калий дигидрофосфат (КН2РО4) — 1,43 г
Дрожжевой диализат — 9 мл
Вода дистиллированная — 890 мл
Раствор II Магний хлорид (MgCI2-6H2O) — 35,7 г
Вода дистиллированная — 90 мл
Раствор III Бриллиантовый зеленый 0,5% водный раствор — 0,9 мл
Приготовление: все три раствора смешивают, разлива-
ют определенные объемы в колбы, флаконы или пробирки, сте-
рилизуют при 112 °C 30 мин.
\J Среда Мюллера [Miiller L., 1923]
Тетратионатовый бульон Мюллера является средой накопле-
ния для сальмонелл.
Принцип действия: в среде при добавлении к ней тио-
сульфата натрия и раствора Люголя ex tempore образуется
тетратионат натрия (Na2S4Oe). Реакция его образования проте-
кает по уравнению: 2I + 2Na2S2Os=Na2S«Oe+2NaI. Это веще-
ство, не влияя на развитие большинства сальмонелл, является
ингибитором для эшерихий и другой микрофлоры кишечника.
В среде бульон обеспечивает питательные вещества, мел обла-
дает буферными свойствами.
260
Состав: Мел, стерилизованный сухим
жаром, или — 45 г
Кальций карбонат (СаСО3), су-
хой, стерильный — 25 г
Бульон Хоттингера, содержа-
щий 1,2—1,3% аминного азо-
та — 900 мл
Раствор Люголя — 20 мл
Натрий тиосульфат (Na5S2O»-
5HjO)* 50% стерильный рас-
твор — 100 мл
Приготовление: в стерильные флаконы помещают по
4,5 г мела, стерилизуют сухим жаром, после чего в каждый
флакон наливают по 90 мл бульона Хоттингера, Стерилизуют
при 121 °C 30 мин. pH 7,2—7,4. Затем ex tempore асептически
добавляют в каждый флакон точно по 2 мл раствора Люголя
[калий йодид (KI) 20 г, йод кристаллический 25 г, вода дистил-
лированная 100 мл] и по 10 мл раствора натрия тиосульфата
(натрин тиосульфат 50 г, вода дистиллированная 100 мл), ХОг
рошо смешивают и разливают по пробиркам. Готовая среда
стерилизации нс подлежит.
Приготовление: в измерительный цилиндр насыпают
натрий тиосульфат и добавляют воду по 100 мл, растворяют,
переливают во флакон, стерилизуют текучим паром 30 мин.
Среда Кауфмана [Kauffmann Г'., 1935]
Состав: Среда Мюллера (стерильная) — 500 мл
Желчь бычья (стерильная) •— 250 мл
Бриллиантовый зеленый (0,1%
водный раствор) — 50 мл
Приготовление-
разливают в стерильные
ннгреднен гы смешивают, асептически
пробирки по 10 мл. Не стерилизуют.
\/ Желчный бульон
Состав: бульон мясопептонный или
Хоттингера — 800 мл
Желчь бычья нативная — 200 мл
Приготовление: pH должен быть равен 7,6. Разливают
в стерильные пробирки или флаконы. Стерилизуют текучим па-,
ром 2 дня по 30 мин.
* Натрий тиосульфат (Na»S,Os-5H,O) часто неправильно именуют гипо-
сульфитом.
261
\/среда Рапопорт [Рапопорт М. и Вайнтрауб А., 1935]
или
(Состав: бульон чясопептониый
Хоттингера — 900 мл
Желчь бычья — 100 мл
Глюкоза — 20 г
Индикатор Андреде — 10 мл
Приготовление: ингредиенты смешивают, разливают во
флаконы с поплавками по 50 мл. Стерилизуют текучим паром
три дня по 30 мин.
Среда обогащения ЕЕ [Mossel D. et al., 1963], в модифика-
ции Г. П. Калины (1981)
Среда ЕЕ предназначена для накопления сальмонелл и эд-
вардсиелл.
Принцип действия: желчные соли и относительно ток-
сичный краситель подавляют развитие сопутствующей микро-
флоры.
Состав:
Пептон — 10 г
Глюкоза — 5 г
Натрий гидрофосфат (Na2HPO4 • 2Н2О) — 8 г
Калий дигидрофосфат (КН2РО4) — 2 г
Желчь бычья — 20 мл
или Желчные соли (по Олькенпцко- му) — 3 г
Бриллиантовый зеленый 0,5% водный раствор — 3 мл
Вода дистиллированная — 1000 мл
Приготовление: все ингредиенты, кроме красителя,
растворяют в воде, стерилизуют при 112 °C 15 мин. Затем до-
бавляют бриллиантовый зеленый и разливают в стерильные
пробирки по 10 мл.
Приготовление желчных солей по И. С. О л ь-
кен и иному (1957)
К 1000 мл желчи (бычьей или свиной) добавляют 40 г гид-
роокиси натрия (NaOH), перемешивают и помещают в авто-
клав. Гидролиз проводят при 1,5 атм в течение 3 ч (можно
дважды по 2 ч). К гидролизату для осаждения жирных кислот
прибавляют 100 мл 20% раствора бария хлорида (ВаС12-
2Н2О) и прогревают в автоклаве 1 ч. На следующий день гид-
ролизат сливают с осадка и фильтруют. Затем при постоянном
помешивании добавляют 20% раствор соляной кислоты (до
кислой реакции) июкгавляют на 18—20 ч. После этого слива-
262
ют, промывают водой н прибавляют, нагревая 40% раствор гид*
роокиси натрия (до щелочной реакции). Полученные натриевые
соли желчных кислот выливают на противень и высушивают до
порошкообразного состояния в сушильном шкафу при 115 °C.
Среда Эт-1 (Калина Г. П., 1981)
Среда Эт-1 описана как среда обогащения для эдвардсиелл.
Принцип действия: основан на относительной устойчи-
вости эдвардсиелл к полимиксину.
Состав: Бульон слабощелочной (сте-
рильный) — 1000 мл
Глюкоза — 2 г
Розоловая кислота (5% спир-
товой раствор) — 2 мл
Полимиксин — 25 000 ЕД
Приготовление: глюкозу и розоловую кислоту раство-
ряют в бульоне при подогревании, затем кипятят в водяной ба-
не 15—20 мин, добавляют полимиксин и разливают асептически
в стерильные пробирки или колбы.
\У Среда обогащения для протеев—11-1 [Калина Г. П., 1975]
Среда П-1 предназначена для преимущественного обнаруже-
ния протеев в патологическом материале и объектах окружаю-
щей среды.
Принцип действия: протеи устойчивы к полимиксину,
желчным солям н токсичным красителям, подавляющим рост
сопутствующей микрофлоры. Мочевина использована в качест-
ве дополнительного источника азота.
Бульон питательный сухой — 15 г
Вода дистиллированная или — 1000 мл
Бульон Хоттингера, стерильный — 1000 мл
ААаннит Желчные соли (по Олькениц- — 1г
кому) Калий ди) идрофосфат — 5 г
(КН9РО«) Кристаллический фиолетовый — 0,8 г
(0,01% водный раствор) или Бриллиантовый зеленый (0,1% — 20 мл
водный раствор) — 5 мл
Мочевина (50% раствор) — 10 мл
Полимиксин — 1000 000 ЕД
Приготовление: все ингредиенты, шюме мочевины и ан-
тибиотика, растворить, хорошо перем» 'шН^Впрофильтровать и
263
стерилизовать кипячением в водяной бане (15 мни). Затем до*
бавпть полимиксин, мочевппу, тщательно смешать и асептиче-
ски разлить в стерильные пробирки по 5—6 мл.
'Среда обогащения для клебсиелл — К-1 [Калина Г. П.,
1980]
Среда К-1 узконаправленного действия для обнаружения
’клебсиелл в патологическом материале или объектах окружаю-
щей среды.
Принцип действия: в среду ограниченного минераль-
ного состава введены рафиноза (в качестве единственного ис-
точника углерода) и мочевина (как единственный источник азо-
та). Указанные вещества не усваиваются многими грамотрпца-
тельнымн бактериями или усваиваются лишь в присутствии до-
полнительных питательных ингредиентов, что делает среду вы-
сокоэлективной для клебсиелл. Развитие грамположительной
микрофлоры ингибируется введением в среду кристаллического
фиолетового.
Натрий хлорид (NaCl) — 5 г
Магний сульфат (MgSO4-7H2O) — 0,2 г
Калий дигидрофосфат (КН2РО«) — 2 г
Калий гидрофосфат (КгНРО4) — 2 г
Рафиноза Бромтимоловый синий (1,6% — 2 г
щелочной раствор) Кристаллический фиолетовый — 2 мл
(0,01 % водный раствор) — 20 мл
Мочевина (50% раствор) Вода деионизированная или — 4 мл
дистиллированная — 1000 мл
Приготовление: после растворения ингредиентов (кро-
ме мочевины) и кипячения их в водяной бане 15 мин добавля-
ют раствор мочевины и асептнчно разливают по 4—5 мл в сте-
рильные пробирки.
Буферная среда обогащения для иерсиний [Ющенко Г. В.,
Дунаев В. И., 1980]
Среда служит при выделении иерсиний для подращивания
материала перед высевом на пластинчатые дифференциальные
среды.
Состав: Натрий хлорид (NaCl)
Натрий гидрофосфат
(Na2HPO412H2O) 1/15 М-рас-
твор
Калий дигидрофосфат
(K1MSEM 1/15 М-раствор
ВодЛфетиллированная
— 8,5 г
— 3 мл
— 7 мл
— 990 мл
264
Приготовление: предварительно готовят по 100 мл
1/15 М-растворов указанных солен. Затем к изотопическому
раствору натрия хлорида добавляют указанное количество при-
готовленных растворов, смешивают, фильтруют, разливают в'
пробирки по 5—6 мл и стерилизуют при 116 °C 10 мин нли-
30 мин текучим паром. pH среды 7,2.
• ।
3. ПЛОТНЫЕ СРЕДЫ ДЛЯ ВЫДЕЛЕНИЯ
чистых культур
Агар Эндо (сухой) .
Агар Эндо — слабоселектнвная дпфференцналыю-диагности-,
ческая среда для выделения энтеробактерии. Готовая среда
прозрачна и имеет бледно-розовый цвет.
Принцип действия: основным реактивом, важным для
дифференциации, является основной фуксин, который обесцве-
чивается в среде при добавлении сульфита натрия (Na2SO3).
Кроме Toi о, присутствие в среде этИх реагентов оказывает ин-
гибирующее действие на грамположптельную микрофлору. Бак-
терии, способ н ые ферментировать л а ктозу, измени ют pH с ре д ы
в кислую сторону вследствие образования конечного продукта,
расщепления — ацетилальдеГПдЭГ Последний, реагируя с суль-;
фнтом натрия, способствует появлению красного окрашивания.
Поэтому лактозоположительйыё' бактерии вырастают В виде
ярко-розовых и красных колоний, часто с металлическим зеле-,
нбватым блеском. Колонпй“бактер|1й, не сбраживающих лакто-f
зу, бесцветны или слабоокрашепы. i
Агар Эндо выпускают в судом виде. Состав и способ приго-
товления среды указаны на этикетке.
Агар с эозин-метиленовым синим (сухой) Си но
Агар с эозин-метиленовым синим (ЭМС-агар) — слабоселек-
тивная среда для выделения энтеробактерий. Готовая среда
прозрачна, имеет фиолетовый цвет.
Принцип* действия: среда обладает некоторым инги-
бирующим действием на грамположптельную микрофлору; диф-
ференцирующая способность основана иа изменении pH под
действием кислоты, образующейся при ферментации бактерия-
ми лактозы к (или) сахарозы. Комплекс индикаторов выпадает
в осадок при pH 4,7, окрашивая колонии кислотообразующих
бактерий в темно сине-фиолетовый, почти черный цвет, часто с
зеленым блеском. Бактерии, не ферментирующие указанные
углеводы, образуют бесцветные или розоватые колонии.
ЭМС-агар выпускают в сухом виде. и способ приго-
товления среды указаны на этикетке.
265
Агар Плоскирева (сухой)
_Агар Плоскирева — селективная среда для выделения ши-
гелл и сальмонелл. Готовая среда прозрачна, имеет розовато-
желтоватый цвет.
Принцип действия: в состав среды входят ингибирую-
щие вещества (желчные соли, бриллиантовый зеленый, йод),
вследствие чего она должна полностью подавлять рост грампо-
Лбжйтёльной флоры, значительно задерживать (первые 24 ч)
рост эшерихий и другой сопутствующей микрофлоры, подав-
лять роение протея; дифференцирующие свойства основаны на
изменении pH в кислую сторону при росте лактозоферментп-
рующнх бактерий, которые образуют колонии брусничного цве-
та (индикатор_нейтральный красный). Лактозоотрицательные
бактерии вырастают в виде бесцветных или слабоокрашенных
колоний. Вегетирующие свойства среды недостаточны для роста
Sh. dysenteriae 1 и некоторых сальмонелл (S. cholerae-suis,
S. pullornin).
Агар Плоскирева выпускают в сухом виде. Состав и способ
пои готовления среды указаны па этикетке.
V Висмут-сульфит агар (сухой)
Висмут-сульфит агар — строго селективная среда для выде-
ления сальмонелл. Готовая среда непрозрачна, зеленовато-го-
рохового цвета.
Принцип действия: бриллиантовый зеленый и висмут,
который находится в среде в виде основного сульфита, подав-
ляют рост грамположительной флоры и многих энтеробакте-
рий, в том числе шигелл; рост сальмонелл также может быть
несколько задержан, вследствие чего чашки с посевами про-
сматривают через 24 и 48 ч; агглютинабельность сальмонелл,
выросших на этой среде, значительно снижена. Дифференци-
рующее действие среды основано на том, что образуемый бак-
терйями пз сулБфатй ‘жё.Теза~сербЁодбр6;Гвызывает почернение
индикатора — бесцветного сульфита висмута — вследствие пе-
рехода его в сульфид висмута, вещество черного цвета. Поэто-
му бактерии, образующие сероводород, формируют совсем чер-
ные пли черные с коричневым или темно-эеленым оттенком
колонии, обладающие часто металлическим блеском. Среда
под колониями при этом окрашена в черный цвет. Бактерии, не
образующие сероводород, могут вырастать в виде мелких бес-
цветных, зеленоватых или коричневых колоний.
Висмут-сульфит агар выпускают в сухом виде. Состав и спо-
соб приготовления среды указаны на этикетке.
Среды с антибиотиками для выделения шигелл [Черномор-
днк А. Б., 1957]
Селективные среды с добавлением антибиотиков успешно
используют для шМ^ення шигелл, имеются наблюдения и о
повышении высей^^^Вн энтеропатогенных эшерихий.
266
Принцип л ей сто и я: основан на устойчивости шигелл
к широко применяемым для лечения антибиотикам (левомице-
тин, тетрациклин и др.). Выбор антибиотика для приготовления
среды зависит от циркуляции в данной местности резистентных'
к нему шигелл (не менее чем в 40—50%). Антибиотики добав-
ляют к обычным коммерческим средам, предназначенным для
первичного выделения.
Состав: Агар Плоскирева, ЭМС или
Эндо (расплавленный) — 1000 мл
Антибиотики (в виде, водно-
спиртового раствора) — 5—12 мл
Спирт этиловый 96° — 10 мл
Вода дистиллированная — 40 мл
Растворы антибиотиков готовят следующим образом:
Раствор левомицетина (1000 мкг/мл)
Состав: Левомицетин — 50 мг
Спирт этиловый 95” — 10 мл
Вода дистиллированная, сте-
рильная — 40 мл
Приготовление: растворить антибиотик в спирте и до-
вести объем до 50 мл стерп тьной дистиллированной водой. Рас-
твор можно хранить в холодильнике в течение месяца.
«
Раствор тетрациклина (1000 мкг/мл)
Состав: Тетрациклин гидрохлорид — 100000 ЕД (100мг)
Вода дистиллированная — 100 мл
Приготовление: раствор готовят непосредственно пе-
ред употреблением.
Антибиотики вводят в питательные среды, снижая концен*
т рацию основного раствора в 4—5 раз
Полоски с антибиотиками [Матвеюк В. К и др., 1975; Пря-
мухина Н. С., Чсрноморднк А. Б. и др., 1979]
Приготовление: полоски фильтровальной бумаги (4Х
Х0,5) укладывают «ребром» по 200 штук в чашки Петри и сте-
рилизуют в автоклаве при 121 '’С 30 мин, затем подсушивают и
пропитывают растворами антибиотиков, содержащих левомице-
тин и тетрациклин по 250 мкг/мл, а стрептомицин 500 мкг/мл.
Могут быть использованы и другие антибиотики. На 200 поло-
сок расходуется около 12,5 мл раствора антибиотика.‘Пропи-
танные полоски подсушивают в термостате 18- -20 ч. Готовые
полоски хранят в банках с притертыми пр^Шками в холодильни-
ке до 3 мес.
267
Среда Эт-2 [Калина Г. П., 1981]
Название среды Эт-2 происходит от понятия «среда 2-го эта-
па исследования». Она является селективно-дифференциальной
специализированной средой для выделения эдвардсиелл.
Принцип действия: кислая реакция среды, возникаю-
щая вследствие гидролиза углеводов в аэробных условиях (рост
колоний на поверхности среды), не позволяет выявлять образо-
вание сероводорода, поскольку тормозит второй этап реакции —
возникновение черного преципитата. Поэтому бактерии, обра-
зующие сероводород, но интенсивно сбраживающие углевод,
формируют колонии без черных центров. Имеющийся в среде
лизин при росте бактерий, обладающих лизиндекарбоксилазой,
расщепляется с образованием щелочных продуктов. В таких
случаях образующие H2S бактерии вырастают в виде колоний
с черными центрами.
, Эдвардсиеллы не сбраживают маннит, образуют сероводород
и обладают лизнндекарбокснлазой, вследствие чего формируют
колонии с черными центрами, чем отличаются от сальмонелл,
цитробактеров и протеев, которые не обладают указанной сово-
купностью признаков.
Желчные соли и цитраты, входящие в состав среды, прида-
ют ей известные ингибирующие свойства.
Экстракт кормовых дрожжей (ЭКД) — 20 г
Маннит — 10 г
Глюкоза — 2,75 г
L-Лизин — 5 г
или
DL-Лизин -Юг ,
Желчные соли (по Олькеницкому) — 2,5 г ‘
Розоловая кислота (5% спиртовой раствор) — 2 мл
Железо (Ш)-амоипй цитрат (смесь солей 1:1): — 0,8 г
а) железо(III) цитрат (FeC6H5O7); б) аммоний цитрат
l(NH4)3C6H5O7]
Натрий тиосульфат (ПагЗгОз-БНгО) — 6,8 г
Агар — 25 г
Вода дистиллированная — 1000 мл
Приготовление: в 20 мл воды растворяют тиосульфат
натрия и смесь цитратов в указанных количествах. Все осталь-
ные ингредиенты растворяют в воде при подогревании в водя-
ной бане до полного расплавления агара и добавляют приготов-
ленный раствор солей, затем среду фильтруют, устанавливают
pH 6,9—7,1. Стерилизуют при 112 °C 30 мин.
268
4. СРЕДЫ ДЛЯ ПЕРВИЧНОЙ ДИФФЕРЕНЦИАЦИИ
v'Arap Клиглера [Kligler I., 1918]
Среда предназначена для дифференциации бактерий по их
способности ферментировать гдщкрзу_и лактозу, а также обра-
зовывать сероводород. Готовая среда имеет красновато-бурый
нли оранжево красный цвет.
11 р и и и и п де й с т в и я: при расщеплении сахаров образу-
ется кислота, что улавливают с помощью индикатора (фенолово-
го красною). окрашивающего среду в желтый цвет. Б среде глю-
кйза имеется в малой концентрации (0,1%)- Поэтому в аэроб-
ных условиях (в скошенной части агара) бактерии, ферменти-
рующие только глюкозу, утилизируют ее полностью в первые
часы роста. К. моменту учета реакции (18—24 ч) для своего пи-
тания они используют уже пептоны, имеющиеся в среде в качест-
ве белковой питательной основы. При этом в скошенной части
происходит образование аммндка и подщелачивание среды
(красный цвет). В ст6лбйкё“ЯП? Жёлтый цвет сохраняется, так
как, хотя глюкоза также за этот срок ферментирована, кислые
конечные продукты ее расщепления в анаэробных условиях еще
сохраняются и поддерживают низкое значение pH. Получается
желтый столбик и красный скос.
Энтеробактерии, сбраживающие глюкозу и лактозу, вызыва-
ют подкисление среды во всей пробирке (желтый столбик и
скошенная часть). Лактоза (1%) входит в соеiан среды в кон-
центрации, превышащей в 10 раз концентрацию глюкозы. По-
этому через 18-24 ч инкубации лактоза еще не исчерпана и в
скошенной части (в аэробных условиях), вследствие чего кис-
лая реакция Сохраняется как в столбике. так и в скошенной ча-
сти агдра.' Однако позднее после 48 ч инкубации посева здесь
также будет наблюдаться щелочение (покраснение скошенной
части среды) за счет расщепления пептонов.
Если бактерии при ферментации углеводов как конечный
продукт метаболизма образуют газ (П2, СО2), появляются раз-
рывы среды различных размеров пли скопление газа на дне
пробирки, приподнимающее весь столбик агара.
Для обнаружения сероводорода существует в среде другая
индикаторная система.
Только некоторые энтеробактерии обладают энзимом—тио-
сульфатрсдуктазой. вследствие чего способны образовыватгГсё-
роводброд'ТГз неорганических соединений серы, что является
дифференцирующим признаком. В агаре Клиглера и ему подоб-
ныхередах реакция проходит в два этапа. Вначале в анаэроб-
ных условиях, в кислой среде под действием микробного энзима
тиосульфат восстанавливается в сульфит с выделением значи-
тельного количества сероводорода, представляющего собой бес-
цветный газ. Затем необходим в юрой этап: для его обнаруже-
ния в среду в качестве индикатора введены соли железа (мало-
269
чувствительный реагент), которые вступают в реакцию с серо-
водородом, образуя сульфид железа в виде нерастворимого
преципитата черного цвета. В результате при положительной
реакции среда в столбике чернеет.
Состав: Бульон мясной — 1000 мл
Пептон — 20 г
Лактоза — 10 г
Глюкоза — 1 г
Натрий хлорид (NaCl) —5 г
Натрий сульфит (Na2SOa) —0,4 г
Натрий тиосульфат (Na2S2O3-5H2O)—0,08 г
Железо (11) сульфат (FeSO4-7H2O) — 0,5 г
Агар — 20 г
Феноловый красный (0,2% раствор в
50% этиловом спирте) — 12 мл
Примечание. Для определения сероводорода в среде
Клиглера, помимо указанной выше прописи, применяют и дру-
гие.
Приготовление: к мясному бульону последовательно
добавляют пептон, соли натрия, агар и кипятят до полного рас-
плавления агара; устанавливают pH 7,8, снова кипятят, фильт-
руют через вату и затем добавляют остальные ингредиенты;
сульфат железа предварительно растворяют в малом количестве
воды. Готовую среду разливают в пробирки по 6—7 мл и стери-
лизуют при 112 °C 30 мни. Скашивают так, чтобы оставить стол-
бик высотой 2—2‘/2 см.
Сухая среда для первичной дифференциации
энтеробактерий (типа Клиглера)
Принцип действия тот же, что для агара Клиглера. Состав и
способ приготовления среды указаны на этикетке.
Примечание. К среде может быть добавлена мочевина.
Для этой цели среду стерилизуют, как указано выше, но в кол-
бах или флаконах, куда ex tempore добавляют 50% водный
раствор мочевины из расчета 4 мл на 1000 мл среды. Тщатель-
но перемешивают и затем асептически разливают в стерильные
пробирки и скашивают.
Трехсахарный агар с солями железа (TSI) в модификации
Центрального НИИ вакцин и сывороток им. Мечникова
Принцип действия среды тот же, что указан для агара
Клиглера.
С о ст а в: Мясная вода —1000 мл
Дрожжевой экстракт жидкий — 100 мл
97П
или
Дрожжевой экстракт по сухой массе —3 г
Пентон — 20 г
Натрий хлорид (NaCI) —3,5 г
Лгар — 15 г
Железо (II) сульфат (FeSOv7H2O),
перекристаллизованное —0,2 г
Натрий тиосульфат (Na2S2O3-5H2O) —0,3 г
Глюкоза — 1г
Лактоза —10 г
Сахароза — 10 г
Феноловый красный (0,2% водный
раствор) —12 мл
Приготовление: сначала готовят основу, для чего к
мясной воде добавляют дрожжевой экстрат, пептон, натрия
хлорид и агар. Смесь подогревают до расплавления агара, ус-
танавливают pH 7,0—7,1. Фильтруют, разливают в матрацы по
0,5 л и стерилизуют при 121 °C 30 мин. К стерильной основе до-
бавляют остальные ингредиенты, растворяют их, хорошо пере-
мешивают, разливают асептично в стерильные пробирки по 6—
7 мл и затем стерилизуют текучим паром или при 112 °C
30 мни. Скашивают в горячем виде так, чтобы оставить столбик
высотой 2*/2—3 см.
(^-Трехсахарный агар с мочевиной (Олькеннцкий И. С., 1958J
Принцип действия: в отношении ферментации углево-
дов и образования сероводорода тот же, что указан для агара
Клиглера. Присутствие в среде мочевины позволяет определять
наличие у бактерий фермента уреазы. Расщепление мочевины
завершается выделением аммиака (NIIS), щелочного соедине-
ния (pH 8,1). под действием которого вся среда (столбик и
скошейная часть) краснеет. Поэтому при уреазоположительных
штаммах учет^ферментанпи углеводов невозможен и для опре-
деления сахаролитической активности выделенных бактерий
требуется применение других сред.
Состав: Агар питательный сухой —25 г
Лакто ia -^10_г
'Сахароза .
Глюкоха
“Аммоний-железо (II) сульфат
[FeSO«- (NH4),SO4-6H-O] —0,2 г
Натрий тиосульфат (NajS2O3-5HsO) —0,3 г
Мочевина __ — 10 г
Феноловый красный (0,4% водный
раствор) —'4 мл
Вода дистиллированная — 1000 мл
271
Приготовление: соли предварительно растворяют в не-
большом количестве дистиллированной воды. Углеводы и моче-
вину растворяют таким же образом, но при подогревании н во-
дяной бане. Сухой питательный агар расплавляют в остальной
воде при нагревании на огне и помешивании. Затем все ингре-
диенты соединяют, перемешивают с расплавленным агаром,
фильтруют через марлевый фильтр, устанавливают pH 7,2—7.4.
Добавляют индикатор, хорошо перемешивают, разливают в про-
бирки по 6—7 мл. Стерилизуют текучим паром 3 дня подряд
по 20 мин. Скашивают, оставляя столбик 2—2’/а см.
Готовая среда бледно-розового цвета.
Двухслойная универсальная комплексная среда (ДУКС)
[Калина Г. П., 1978]
Среда предназначена для первичной дифференциации энте-
робактерий по их способности ферментировать углеводы, обра-
зовывать сероводород и расщеплять мочевину.
Принцип действия: дифференцирующие свойства сре-
ды основаны на принципах, описанных для комбинированных
сред Клиглера и Олькеницкого. Однако среда ДУКС имеет -за-
метное преимущество — распределение ингредиентов в двух сло-
ях создает возможность беспрепятственного чтения реакций.
Состав нижнего слоя:
Агар питательный 0,6% (из сухого — 1000 мл
агара) или 0,5—0,45% (в случае го-
тового плотного питательного агара)
(стерильный)
Глюкоза —1,5 г
Натрий тиосульфат (Na2S2Os-5H2O) —0,2 г
Калий гидрофосфат (К2НРО«) — 1,5 г
Феноловый красный (1,6% щелочной
раствор) — 5 мл
Метиленовый синий (1 % водный рас-
твор) — 6 мл
Кристаллический фиолетовый (0,01%
водный раствор) —20 мл
Приготовление нижнегослоя: все ингредиенты сме-
шивают, доводят до полного растворения при кипячении в водя-
ной бане (3—5 мин). Прибавляют 8 мл 50% водного раствора
мочевины, выдержанного 2—3 сут при комнатной температуре
для самостерилизации.
Среду хорошо перемешивают и стерильно разливают по 2 мл
в пробирки и остужают столбиком или хранят во флаконах при
272
Состав верхнего слоя:
Агар питательный 2% (стерильный) — 1000 мл
Лимита —Ю г
Сахароза — 5г
Железо (111)-аммоний цитрат (смесь
солей 1:1) — 0,2 г
а) железо (1111 нитрат (I еСвПкОт)
Г») аммоний нитрат(NЫ«)зС«115О7]
Калий гидрофосфа г (К2НРО4) —1 г
Калий дигпдрофосфат (КН2РО4) —0,4 г
Кристаллический фиолетовый (0,01%
водный раствор) —20 мл
Феноловый красный (1,6% щелочной
раствор) —5 мл
П р и гото в л е н и е верхнего слоя: ингредиенты рас-
творяют при кипячении в водяной бане (2- Г> мин), разливают
асептнчно по 4 мл поверх застывшего нижнею слоя и скашива-
ют, оставив столбик высотой до 2 см или хранят во флаконах
прн 4 °C до 3 иед.
Примечание. Готовить двухслойную среду следует не бо-
лее чем за 1—2 дня до применения, учитывая возможность диф-
фузии метиленового синего из нижнего слоя в верхний.
Прн отсутствии железо-аммоний цитрата можно использо-
вать аммоннй-железо (II) сульфат (соль Мора). В этом случае
содержание тиосульфата натрия увеличивают до 6,8 г на 1 л.'
среды, а соль Мора вводят в количестве 0,8 г (на 1 л среды).
5. СРЕДЫ ДЛЯ ДАЛЬНЕЙШЕЙ ДИФФЕРЕНЦИАЦИИ
^/Цитратный агар Симонса (Simmons J., 1926]
Цитратная среда Симонса предназначена для дифференциа-
ции энтеробактерий по их способности использовать натрия цит-
рат *В~качестве едйпственнбгб источник» уТЛероДаТ Она пред-
ставляет собой модификацию жидкой синтетической среды Ко-
ser (1923), заключающуюся в добавлении агара и индикато-
ра pH.
Принцип действия: бактерии, обладающие соответст-
вующими энзимами (цитратазой и др.), способны развиваться,
используя в качестве единственного источника углерода входя-
щий в среду, цитрат. Имеющиеся в среде ионы магния способст-
вуют действию энзимов. В реакции расщепления цитрата одним
из конечных продуктов является двуокись углерода (СО;),,
вступающая далее во взаимодействие с нопами натрия и водой,
в результате чего образуется натрий~карбонат (Ма»СО») — ве-
щество, сдвигающее pH среды в щелочную сторону. Щелочению'
способствует и аммиак (NH»), образующийся в среде при рас-
щеплении солей аммония, вводимых в среду как источник азота..
В результате указанных метаболических реакций вегетирую-
18—417 27Э
щие бактерии изменяют^ оливковый цвет среды на___ярко-синий
Энтеробактерии, не обладающие способностью утилизировать
цитрат в качестве единственного источника углерода, на среде
Симонса не растут, цвет среды остается без изменения.
Состав: Натрий хлорид (NaCl) —5 г
Магний сульфат (MgSO4-7H2O) —0,2 г
, Аммоний дигидрофосфат (NH4H2PO4) — 1 г
\1 Калий гидрофосфат (К2НРО4) —1г
Натрий 1цитрат* (CeHsOyNas • 5Н2О) — 3 г
Бромтимоловый синий — 0,08 г
Агар (тщательно промытый) —20 г
Вода дистиллированная — 1000 мл
Примечание. Аммоний дигндрофосфат может быть заме-
нен на аммоний гпдрофосфат—(NH4)2HPO4 или на натрий-ам-
моний гидрофосфат (NaNH4HPO4), взятые по 1,5 г на 1 л сре-
ды. Калий гидрофосфат может быть заменен тем же количест-
вом калия дигпдрофосфата (КН2РО4).
Приготовление: предварительно тщательно отмытый
агар расплавляют при подогревании в свежеприготовленной
дистиллированной воде. Все соли сначала растворяют в неболь-
шом объеме воды, затем раствор добавляют к расплавленному
агару и доводят до 1000 мл. Устанавливают pH 7,2, добавляют
индикатор в виде 0,2% водного раствора в объеме 40 мл, хоро-
шо перемешивают и разливают в пробирки по 5—7 мл. Стери-
лизуют при 121 °C 15 мин пли при 112 °C 30 мин. При охлажде-
нии скашивают, оставляя столбик 2—2*/2 см.
I^/Ацетатный агар [Trabulsi L., Ewing W., 1962]
Ацетатный агар предназначен в основном для дифференциа-
ции шигелл и эшерихий, а также некоторых сальмонелл, на-
пример S. paratyphi В (ацетат —) и S. java (ацетат +).
Принцип действия тот же, что указан для цитратной
среды Симонса. В качестве дифференцирующего субстрата вве-
ден натрия ацетат. Бактерии, способные использовать ацетат в
качестве единственного источника углерода, в процёССё'мёта^
болизма подщелачивают среду, окрашивая ее в синий цвет.
Состав: Натрий хлорид (NaCl) —5 г
Магний сульфат (MgSO4-7H2O) —0,2 г
Аммоний дигидрофосфат (NH4H2PO4) — 1 г
Калий гидрофосфат (К2НРО4) — 1 г
х) Натрий ацетат* (НаСгНзО2) —2 г
Агар (тщательно отмытый) —20 г
Бромтимоловый синий — 0,08 г
Вода дистиллированная — 1000 мл
Приготовление: в свежеприготовленной дистиллирован-
ной воде при подогревании расплавляют агар, добавляют пред-
274
варите л ьно растворенные соли, устанавливают pH 7,2, фильт-
руют через ватномарлевый фильтр, добавляют 40 мл индика-
тора (в виде 0,2% водного расiнора), хорошо перемешивают и
разливают в маленькие (агглютинациоииые) пробирки по 3—
4 мл. Стерилизуют при 112 °C 15 мин, скашивают. Ватные проб-
ки асептически заменяют на стерильные корковые. Готовая сре-
да зеленовато-оливкового цвета. Ацетатный агар при 4 °C мож-
но хранить до 2 мес.
Ацетатный агар (сухой)
Ацетатный агар, выпускаемый в сухом виде, имеет принцип
действия, указанный для плотной агаровой среды.
Состав и способ приготовления сухой среды указаны на эти-
кетке.
Среда с алгинатом (Davis В. R., Ewing W., 1964]
Диагностическая среда с натрия алгинатом предназначена
для дифференциации бактерий внутри родов Klebsiella и Ente-
robacter, а также представителен некоторых других родов.
Принцип действия: основан на способности ряда бак-
терий усваивать натрия алгинат в качестве единственного ис-
точника углерода.
Состав: в среду входят те же ингредиенты, что и в цитрат-
ный агар Симонса, но вместо натрия цитрата добавляют 2,5 г
натрия алгината.
Приготовление среды, как указано для агара Симонса..
М^итратный агар Кристенсена (Christensen W., 1949]
в модификации Центрально!<> НИИ вакцин и сывороток
им. Мечникова
(Зрела предназначена в основном для дифференциации шп-
гелл и эшерихий; может способствовать дифференциации S.gal-
iinarum (цитрат I ) и S. piillorinii (цитрат—).
Принцип действия: основан на способности некоторых
бактерий утилизировать натрия цитрат в присутствии органиче-
ских субстратов, образуя щелочные продукты. Другие бактерии
(например, шигеллы) этой способностью не обладают. Цистеин
(источник азота), дрожжевой экстракт и глюкоза обеспечива-
ют питательные ресурсы, достаточные для роста всех энтеробак-
терий. Готовая среда имеет желтый цвет (индикатор pH фено-
ловый красный).
При росте бактерий, не способных расщеплять цитрат и в
этих условиях, цвет срепы не изменяется. При положительной
реакции pH смещается в сторону щелочения н агар окрашива-
ется в розовый или красный цвет (в зависимости от интенсив-
ности реакции).
18» 275
«Состав: Натрий цитрат, нейтральный
(Na3CeH5O7-5H8O) — 3 г
Глюкоза —0,2 г
Дрожжевой экстракт жидкий
или —22 мл
Сухой —3 г
Цистеин гидрохлорид —0,1 г
Калий дигидрофосфат (КН2РО«) — 1 г
Натрий хлорид (NaCl) —5 г
Феноловый красный (0,4% водный
раствор) —3 мл
Агар — 15 г
Вода дистиллированная — 1000 мл
Приготовление: предварительно все ингредиенты рас-
творяют в небольших объемах воды, затем все соединяют, до-
бавив недостающее количество воды, хорошо перемешивают,
присоединяют агар. Смесь нагревают до полного растворения
агара, фильтруют через полотняную ткань — балтинг, устанав-
ливают pH, который в готовой среде должен быть 6,7 и добав-
ляют индикатор. Разливают по 5 мл в стерильные пробирки.
Стерилизуют при 112 °C 30 мин или при 121 °C 15 мин. Охлаж-
дают в полускошенной позиции, оставляя столбик высотой
~2 см.
Приготовление дрожжевого экстракта:
Состав: Дрожжи прессованные хлебные (луч-
ше маточные) —0,5 кг
Вода дистиллированная — 1000 мл
Дрожжевой экстракт изготовляют двумя способами:
1. Дрожжи измельчают и кипятят на слабом огне 1 ч, вновь
размешивают, разливают во флаконы, стерилизуют при 121 °C
30 мин. Готовый экстракт помещают в холодильник на 5—
7 дней. Для приготовления сред используют надосадочную жид-
кость. Консервируют добавлением 0,5% хлороформа. Консерви-
рованный экстракт можно хранить при 4—10 °C несколько ме-
сяцев. -V
2. В 1 л дистиллированной воды разводят 0,5 кг хлебных
дрожжей, кипятят в течение 1 ч (сохраняя первоначальный
объем добавлением воды); фильтруют через полотняный фильтр.
Консервируют 1% хлороформа, хранят несколько месяцев.
Цитратный агар Кристенсена (сухой)
Цитратный агар Кристенсена, выпускаемый в сухом виде,
имеет принцип действия, указанный для жидкой агаровой
среды.
Состав и способ приготовления сухой среды указаны на эти-
кетке.
27о
Среда с малонатом [l.eifson Е., 1938] в модификации
W. Ewing с соавт. (1957)
Среда с малонатом предназначена для дифференциации эн-
теробактерий, в том числе S. arizonae, от других сальмонелл.
Принцип действия: дифференциация основана на спо-
собности некоторых энтеробактерий расщеплять малонат натрия
с образованием щелочных продуктов. Присутствие в среде глю-
козы и дрожжевого экстракта обеспечивает развитие в бульоне
всех энтеробактерий. Прн этом бактерии, ферментируя глюкозу,
•образуют кислоту (рН<6.0) и среда из бледно-оливковой ста-
новится желтоватой (индикатор бромтимоловый синий). Однако
позднее, через 24—48 ч бактерии, способные расщеплять мало-
нат натрия, вызывают изменение pH в сторону щелочения
(рП>7,6) и среда приобретает ярко-синий цвет. Механизм ути-
лизации малоната натрия изучен еще недостаточно.
Дрожжевой экстракт жидкий — 30 мл
или
Сухой — 1г
Аммоний сульфат [(NH4)2SO4] — 2 г
Калий дцгидрофосфат (КН2РО4) — 0,4 г
Калий гидрофосфат (К2НРО4) — 0,6 г
Натрий хлорил (NaCl) — 2 г
Натрий малонат (CH2COOHCOONa) — 3 г
Глюкоза — 0,25 г
Бромнтмоловый синий (0,2% водный
рас гвор) — 12 мл
Вода дистиллированная —1000 мл
Приготовление: в кипящей воде растворяют ингредиен-
ты в указанной последовательности. После добавления каждого
реактива среду следует доводить до кипения. Затем фильтруют,
доводят до первоначального объема, охлаждают и устанавлива-
ют pH 6,7, добавляют индикатор, разливают в серологические
пробирки по 2 мл, стерилизуют при 112 °C 30 мин или при
121 °C 15 мин.
Готовая среда имеет бледно-оливковый цвет.
V ИАгар с фен нл ал ан ином в модификации W. Ewing et al.
(1957) ---------------
Среда предназначена для дифференциации бактерий рода
Proteus, включая Р. inconstans (Providencia), от других энтеро-
бактерий.
Принцип действия: основан на способности бактерий
рода Proteus расщеплять с помощью фермента фенилалаипн-
дезамнназы (флавопротеина) аминокислоту фенилаланин. В ре—,
зультате реакции образуются конечные продукты — фенилпиро^ I
виноградная кислота и аммиак. Кислота эта. бесцветна и для/
ее обнаружения применяют тест-реактив, содержащий хлорид'.
железа (III), который присоединяется к фенилпировиноградной
кислоте, вызывая зеленое окрашивание.
Состав: Дрожжевой экстракт жидкий — 100 мл
или
Сухой — 3 г
Натрий хлорид (NaCl) —5 г
Натрий гидрофосфат (Na2HPO4) — 1 г
L-Фенилаланин — 1г
или
DL-Фенилаланин —2 г
Агар — 12 г
Вода дистиллированная — 1000 мл
Приготовление: дрожжевой экстракт вносят в холод-
ную воду, после чего ее нагревают. Затем последовательно до-
бавляют остальные ингредиенты и кипятят до полного расплав-
ления агара (5—10 мин), фильтруют через ватно-марлевый
фильтр и разливают по 2—3 мл в агглютинационные пробирки.
Без подтитровки реакция среды должна иметь pH 7,0—7,2.
Стерилизуют при 112 °C 30 мин и охлаждают в скошенном
положении.
Готовая среда не окрашена.
Тест-реактив: готовят 10% водный раствор железа (III) хло-
рид— FeCh- Хранят при 4—6 °C, без доступа света.
Бульон с фенилаланином и малонатом [Shaw С., Clarke Ph.,
1955]
Комбинированная среда для дифференциации бактерий по
их способности утилизировать фенилаланин и малонат натрия.
Принцип действия: тот же, что описан для сред, со-
держащих отдельно указанные субстраты, входящие в комбини-
рованную среду.
В этой среде учет реакций производят последовательно:
сначала учитывают расщепление малоната (при положительной
реакции среда становится синей, при отрицательной цвет не ме-
няется). Затем для учета расщепления фе'Ьнлаланина среду
подкисляют прибавлением 3—5 капель 0,1 N Ьаствора IIC1 до
пожелтения среды. Далее в пробирку добавляют 3—4 капли
тест-реактива (10% водного раствора FeCla). При положитель-
ной реакции на фенилаланиндезаминазу среда через 2—3 мин
становится зеленой.
Состав: Дрожжевой экстракт жидкий — 30 мл
или
Экстракт сухой — 1г
Натрий малонат —3 г
L-Феиилаланин — 1 г
или
DL-Фенилаланин —2 г
97R
Аммоний сульфат [(NH^SO*] —2 г
Калий дигндрофосфат (КН2РО<) —0,4 г
Калий гидрофосфат (KjHPO<) —0,6 г
Натрий хлорид (NaCl) —2 г
Бромтимоловый синий (0,2% водный — 12 мл
раствор)
Вода дистиллированная — 1000 мл
Приготовление: все укатанные ингредиенты последова-
тельно растворяют в кипящей воде, охлаждают, устанавлива-
ют pH. добавляют индикатор, разливают в пробирки, стерили-
зуют при Нб^С 10 мин. Конечное значение pH в среде должно
быть 6.3. Готовая сред? бледно тел йоге иве га.
Qi/Среда с мочевиной Кристенсена {Christensen W., 1946]
Это диффсренннруюшаятредГ. предназначенная для выяв-
ления у энтеробактерий фермента уреазы.
Принцип действия: бактерии, обладающие ферментом
уреазой, способны производить гидролиз мочевины, образуя в
виде конечных продуктов аммиак п углекислоту, тем самым из-
меняя pH среды в щелочную сторону. Среда из желтоватой
становится красной в срок от нескольких часов до 4 сут (инди-
катор феноловый красный).
Состав: Пептон —1 г
Натрий хлорид (NaC.ll —5 г
Калий дигндрофосфат (КН2РО4) —2 г
Агар —20 г
Глюкоза — 1г
Феноловый красный (0.2% раствор) —6 мл
Мочевина (20% водный раствор)* —100мл
Вода дистиллированная — 1000 мл
Приготовление: пептон, соли и агар растворяют при на-
гревании, устанавливают pH, фильтруют, стерилизуют при
115СС 20 мин. Затем добавляют глюкозу и индикатор, стерили-
зуют текучим паром 1 ч, охлаждают до 50—55°C. Раствор мо-
чевины после стерилизующей фильтрации асептически добав-
ляют к основе. Готовую среду асептически разливают в сте-
рильные пробирки и охлаждают в скошенном положении.
Жидкая среда с мочевиной (модификация среды
Кристенсена)
Состав: Пептон — 1 г
Натрий хлорид (NaCl) —5 г
* Применение 50% иодного раствори ючевинн (40 мл на 1 л среды),
предварительно выдержанного 2—3 срок для <самостернлизации>, исключает
необходимость его фильтрации.
279
Калий дигидрофосфат (КН2РО4) — 2 г
Глюкоза — I г
Мочевина (50% водный раствор) — 40 мл
Феноловый красный (0,2% водный
раствор) —6 мл
Вода^дистиллированная до 1000 мл
Приготовление: к воде добавляют пептон, соли и кипя-
тят 2—3 мин, вносят глюкозу. Устанавливают реакцию среды
pH 6,8—6,9 (особо точно), добавляют индикатор, фильтруют
через бумажный фильтр, разливают во флаконы по 150—200 мл
(мерно) и стерилизуют при 115°С 30 мин. Асептически добав-
ляют мочевину (50% водный раствор, выдержанный 2—3 сут
для «самостерилизации») из расчета конечного содержания мо-
чевины в среде 2%. Разливают в стерильные пробирки асепти-
чески.
<££реда с мочевиной Преуса gH. Preus, цит. по Г. Дрегеру,
1957] в модификации Центрального НИИ вакцин и сыворо-
ток им. Мечникова
Назначение среды и принцип действия те же, что указаны
для среды с мочевиной Кристенсена. Бактерии, обладающие эн-
зимом уреазой, расщепляя мочевину, подщелачивают среду, ко-
торая из оливковой становится синей (индикатор pH бромтимо-
ловый синий). Другие бактерии, уреазоотрицательные, сбражи-
вая глюкозу, сдвигают pH в кислую сторону и среда стано-
вится1 желтой. Учет результатов через 24 и 48 ч.
Состав: Бульон Хоттингера — 1000 мл
Агар — 15 г
Глюкоза —5 г
Мочевина (50% водный раствор) — 20 мл
Бромтимоловый синий (6,2% водный — 12 мл
раствор)
Приготовление: агар расплавляют в бульоне при подо-
гревании, фильтруют, устанавливают pH 6,9—7,0. Стерилизуют
при 121 °C 20 мин. К стерильному питательному агару добав-
ляют глюкозу, мочевину, индикатор. Стерилизуют текучим паром
однократно 15 мин, после чего скашивают. Цвет готовой среды
оливковый.
>/ Среда Кларка [Clark W., Lubs Н., 1915]
Среда Кларка представляет собой буферированный глюкозо-
пептонный бульон, используемый для выращивания-бактерий
при постановке реакций с метиловым красным (M'R-тест) и Фо-
геса— Проскауэра (VP-тест). Культуру обычно' выращивают
при 37 или 22 °C в течение 2—5 сут.
280
Принцип действия. 1. В реакции с метиловым красным
определяют степень ферментации глюкозы с образованием сме-
си кислот (молочной, уксусной, муравьиной и др.), подкисляю-
щих срецудо pH 4,0—45,0. В этом случае реакция считается по-
ложительного бесцветкаяГср да с выросшей культурой после
добавления реактивг станет ярко-красной. Если же кислотооб-
разование будет слабым назначение pH окажется около 6,0—
7,0, то среда станет желтой (реакция отрицательная).
2. В реакции Ф< теса — Проскауэра определяют наличие аце-
тоина (ацетидметилкарбипола), являющегося промежуточным
продуктом при расщеплении глюкозы до бутилен-гликоля неко-
торыми энтеробактериями, например клебсйеллами, гафниями
и др. Для этой цели предпочтительно используют метод, кото-
рый предложил М. Ban ill (1936) :'к 4 5-суточной культуре до-
бавляют сначала а-нафгол, затем раствор КОН, и пробирку
хорошо встряхивают для лучшего доступа кислорода. Указан-
ный порядок добавления реактивов обязателен. Происходит ре-
акция окисления ацетоина в присутствии щелочи и а-нафтола
(как катализатора), что приводит к образованию диацетила.
Диацетил рассматривают как основной реагент, лающий цвет-
иую реакцию с пептоном и КОН. Установлено, что беа_аргини-
на и других азотных соединений, входящих в пептон, красный
цвет не возникает (Mac Faddin J., 1976].
Интенсивность появляющегося г верхней части среды красно-
го окрашивания (при ночожителЫюй реакции) лвиент от ко-
личества ац< .оипа в испытуемой культуре и правильности по-
становки реакции.
Состав: Пептон — 5 г
Калий гидрофосфат (КаНРОД —5 г
Глюкоза —5 г
Вода дистиллированная — 1000 мл
Приготовл е.п и с: ингредиенты растворяют в воде, кипя-
тят 2— 3 мин, фильтруют через бумажный фильтр, устанавли-
вают pH 6,9—7,0, разливают в пробирки. Стерилизуют при
112 °C 20 мин или 3 дня текучим паром по 20 мин.
Тест-реактивы
А. Для реакции с метиловым красным
Состав: Метиловый красный —0,1 г
Спирт этиловый 96° —300 мл
Вода днетптлировачиая —200 мл
Приготовление: краску растворяют в спирте, затем до-
бавляют воду до 500 мл.
Примечание. К 2 мл испытуемой культуры добавляют
5—6 капель тест-раствора.
Б. Для реакции Фогеса — Проскауэра
281
Состав: 1) а-нафтол — 30 г 1 1 а-нафтол
Спирт этиловый 6% спирто-
96° — 500 мл 1 1 вой раствор
' 2) Калий гидро-
окись (КОН) — 120 г ] I 40% водный’
Вода дистилли- раствор
рованная — 300 мл 1 । кон
Применение. К 2,5 мл культуры добавляют 1 мл рас-
твора и-нафтола, затем 0,4 мл 40% КОН.
Полужидкая среда для реакций с метиловым красным*
и Фогеса— Проскауэра ’[Серов Г. Д., 1977J
Среда сконструирована на основе буферированного глюкозо-
лептонного бульона Кларка и предназначена для определения
в одной пробирке реакций с метиловым красным и Фогеса —
Проскауэра, а также газообразования и подвижностд.
Принцип действия: указан ранее (см. «Среда Клар-
ка»). Добавленный в среду Кларка агар позволяет сокращать
срок выращивания испытуемых культур и, кроме того, опреде-
лять образование газа..из глюкозы и подвижность бактерий.'
Состав: Среда Кларка —1000 мл
Агар порошковидный — 1,9—2,2 г
Приготовление: в среду Кларка добавляют агар и рас-
плавляют его при нагревании и помешивании. Затем среду раз-
ливают в стерильные пробирки по 4—5 мл и стерилизуют теку-
чим паром 3 дня по 20 мин.
Применение: испытуемую культуру засевают уколом и
помещают в термостат на 18—24 ч. После инкубации учитыва-
ют визуально подвижность (характер помутнения агара) и га-
зообразование (наличие пузырьков в толще среды или на ее по-
верхности). Затем в пробирку добавляют 4—5 капель 0,04%
спиртового раствора метилового красного. При положительной
реакции в течение 3—5 мни наступает покраснение. ^После уче^
та реакции в пробирку добавляют .8—10 мл водного раствора
КОН и после перехода цвета среды в желтый приливают еще
15—20 капель 5% раствора а-нафтола. Наличие ацетоина учи-
тывают через 15—30 мин, при положительной реакции нйс^упа-
ет покраснение. ।
Среды с углеводами [Hiss Р., 1904—1905J
Углеводные среды предназначены для дифференциации бак-
терий по их способности ферментировать те или иные из угле-
водных субстратов.
Принцип действия: углеводы разделяют на моно- и
полисахариды и многоатомные спирты (табл. 113). Соответ-
282
Таблица 113. Углеводы, используемые в бактериологии [Саватеев А.
1937; Cowan S., 1974J
Химическая группа Название Растворимость в воде прн во*с (масса/%)
'Пентозы Гексозы Дисахарпды ( Трнсахарпды Полисахариды Гликозиды X Спирты' трех атомрые четырехагом иые пятна томные шестна1ом- ные \ (не углевод) (Арабино ^Глюкоза Фрукто? Галакто Манноза Сорбоза ^Лактоза (“Сахароз Мели био 1регалоз Целлобн Гафиноз Мелнцит Гликоген Крахмал Инулин Эскулин Салицин Амигдал Арбутин (Глицсрн! Эритрит Лдаш,т QlainiH ft Инозит j^(L+) “(древесный сахар) >(изодульцит) 1(декстроза) f а (левулеза) «а ^(молочный сахар) Г^солодовый сахар) Т* РТтростннковый сахар) за / я (грибной сахар) оза а оза (животный крахмал) растворимый ин i) 40 50 40 50 50 ЗД Г.0 40 15 50 50 10 25 10 10 10 5 (раствор опалесци- рует) Растворим в горячей воле 20 прн 70 °C (рас- твор слегка опалесци- рует) 0,1; 7,5 при нагрева- нии 3 7.5 10 Смешивается в лю- бой пропорции 40 40 5 15 50 15
Примечание Кроме манных а таблице углеводов, используют также араби-
тол. декстрин, рн<юэу и др.
ственно числу атомов углерода в молекуле моносахарида раз-
лнчают тетрозы, пентозы и гексозы. Простые моносахариды кон-
денсированием могут образовывать более сложные соедине-
ния— полисахариды (олигосахариды), которые в зависимости
283
от числа входящих в них моносахаридов имеют следующие наи-
менования. Дисахариды содержат два моносахарида. К ним от-
носят наиболее употребительные: лактоза-»-глюкоза+галактоза,
сахароза—«-глюкоза 4-фруктоза, мальтоза-»-2 единицы глюкозы.
Трисахарид рафиноза состоит из трех моносахаридов — глюко-
зы, фруктозы и галактозы. Крахмал т^кже является полисаха-
ридом.
Многоатомные спирты представляют собой восстановленные
реду« а >я
моносахариды, например, глюкоза-----------*- сорбит (шести-
атомный спирт). Все указанные углеводные субстраты зачастую
называют «сахарами».
Полисахариды являются слишком сложными соединениями
для проникновения в бактериальную клетку в качестве пита-
тельных веществ. Поэтому они подвергаются расщеплению на
более простые комплексы — моносахариды — под действием
внеклеточных энзимов (пермеаз). Далее действуют внутрикле-
точные строго дифференцированные специфические ферменты.
Ферментация — окислительно-восстановительный процесс об-
мена веществ, заканчивающийся образованием как восстанов-
ленных, так и окисленных продуктов. Пути ферментации и тип
конечных продуктов зависят от вида бактерий, природы фермен-
тируемого вещества и условий, в которых происходит процесс
(температура, pH и т. д.). В общих чертах ферментация это .
анаэробный процесс, где исходное расщепление углевода (глю-
козы) происходит путем первичного фосфорилирования до обра-
зования соединения глюкоза-б-фосфат. Конечные продукты фер-
ментации углеводов н спиртов в основном сводятся к образова-
нию нескольких кислот, спиртов, альдегидов и газообразных ве-
ществ (Н2 и СО2).
Наборы ферментов и пути расщепления углеводов у предста-^
вптелей энтеробактерий различны, что отражается на образова-
нии конечных продуктов и служит для дифференциации родов,
видов и иногда более мелких внутривидовых категорий. Бакте-
рии-ферментаторы являются факультативными анаэробами.
Большинство энтеробактерий имеют тип ферментации раз-
личных углеводов, приводящий к образованию смеси кислот .
(молочной, уксусной, углекислоты и др.). В отличие от этого /
представители триб Klebsielleae и Erxyinieae в качестве, конеч/ I
ного продукта ферментации образуют бутилен-гликоль. J
Состав: Пептон ' —10 г
Натрий хлорид (NaCl) —5 г
Индикатор Андреде — 10 мл
Углевод —5 или 10 г
Вода дистиллированная — 1000 мл
Примечание 1. В качестве индикатора pH могут быть
использованы растворы бромтимолового синего, фенолового
красного или бромкрезолового пурпурного.
284
2. Среду с лактозой готовят иногда с большим содержанием!
сахара (2—10%).
3. К средам может быть добавлен агар (0,2—0,4%).
Приготовление: пе'птоп растворяют в воде при подогре-
вании, добавляют натрия хлорид и индикатор, фильтруют, уста-
навливают pH 7,1—7,2, стерилизуют при 121 “С 15 мин. К сте-
рильной основе добавляют соответствующий углевод в количест-
ве: лактозу, глюкозу, маннит или сахарозу 1%; рамнозу, ксилозу,,
мальтозу, арабинозу, салицин, трегалозу, рафинозу, целлобиозу,
дульцит, сорбит, адонит или глицерин — 0,5%. Разливают в не-
большие (а-гглютинационные) стерильные пробирки по 3—4 мл,
в пробирки с глюкозой помещают поплавки (перевернутые бро-
дильные пробирки Дюрхсма). Стерилизуют при ПО °C 30 мин.
В связи с тем что добавление некоторых углеводов может
вызвать подкисление среды (легкое порозовеиие при индикато-
ре Андреде), в среду рекомендуется вводить по каплям 0,1 N
NaOH до установления исходного цвета (среда должна быть
бесцветной, слегка желтоватой).
Дисахариды являются лабильными соединениями, вследствие
чего режим их стерилизации должен быть особенно щадящим.
Для этой цели применяют сзернлизующую фильтрацию через
мембранные фильтры с диаметром пор 0,45 мкм или другие сте-
рилизующие системы. Фильтрованию подвергают 10% водные
растворы углеводов. Более приемлемым для большинства лабо-
раторий является метод дробной стерилизации текучим паром
(два дня но 30 мин). Предложена для этой цели и стерилизация
при, 121 °C 10 мни. Ксилоза, арабиноза, рамноза, салицин и гли-
церин также являются лабильными веществами и должны под-
вергаться стерилизации в таком же режиме, как и дисахариды.
Все готовые углеводные среды выглядят одинаково и поэто-
му. чтобы избежать возможных ошибок, должны быть марки-
рованы непосредственно при их изготовлении и далее храниться
в отдельных, специально обозначенных контейнерах (ящиках,
ячейках и т. п ).
Примечание. Пептоны, входящие в основу углеводных
сред, должны быть свободны <>т углеводов.
/ Углеводные среды с индикатором ВР (сухие)
Сухие углеводные среды с глюкозой, лактозой, сахарозой,
мальтозой или маннитом служат для дальнейшей дифференциа-
ции бактерий по определению их способности ферментировать
тот или иной углевод и выявлению подвижности.
Принцип действия: в отношении ферментации углево-
дов тот же, что указан для жидких углеводных сред. Комплекс-
ный индикатор ВР (водный голубой 1-розоловая кислота) улав-
ливает изменение pH, меняя цвет от розового (щелочение) че-
рез сероватый тон (нейтральная реакция) R голубому и ярко-
синему (кислотообразование). В связи с тем что эти среды со-
285-
держат агар, они в готовом виде представляют собой полужид-
кий субстрат. Это позволяет учитывать в среде газообразование
(появление пузырьков) -и подвижность (диффузное помутнение
•среды).
Углеводные среды с индикатором ВР выпускают в сухом
виде. Состав сред и способ приготовления указаны на этикетке.
Желатин питательный
Среда предназначена для определения протеолитической
(желатиназной) активности бактерий с целью их дифференциа-
ции. Энтеробактерии некоторых родов (протеи, клебсиеллы,
сальмонеллы II—IV подродов) обладают способностью разжи-
жать желатин.
Принцип действия: желатин является растворимым
белком, полученным обработкой нерастворимого белка живот-
ных тканей — коллагена. Химическаяструктура Желатина и кол-
лагена одинакова,; тогда как физические свойства различны.
Желатин расплавляется при температуре около 25 °C.
Бактерии, обладающие ферментом желатиназой, разжижают
желатин гидролизом. Подвергаются гидролизу аминокислоты,
входящие в желатин, вследствие чего этот белок теряет свои
желирующие свойства, оставаясь жидким и при низкой темпе-1
ратуре.
Питательной основой среды является бульон Хоттингера, так
как желатин не содержит питательных веществ, обеспечиваю-
щих успешное развитие бактерий.
Для учета результатов теста на желатиназу засеянные про-
бирки с желатином охлаждают в вертикальном положении.
Состав: Бульон Хоттингера стерильный —1000 мл
Желатин пищевой высшего сорта — 100 г
Приготовление: в бульон вносят желатин и оставляют
для набухания на 1—2 ч, затем подогревают в водяной бане
при 40—50 °C до полного расплавления желатина. Устанавли-
вают pH 7,2. Если среда мутная, ее просветляют взбитым бел-
ком из свежих яиц. Для этой цели белок из 2 куриных яиц хо-
рошо размешивают с двойным объемом холодной воды и вносят
в среду, которую затем нагревают в кипящей водяной бане или
в автоклаве текучим паром 20 мин до свертывания белка. После
этого горячую среду фильтруют через ватно-марлевый фильтр и
разливают в стерильные пробирки по 8—9 мл. Стерилизуют при
ПО °C 30 мин или текучим паром 3 раза по 30 мин.
Среды для определения индолообразования
Среды служат для выращивания энтеробактерий с целью по-
следующего определения образования индола.
286
Принцип действия: среда, содержащая аминокислоту
триптофан, служит питательной основой для размножения бак-
терий. Обладающие ферментом триптофаиазой бактерии рас-
щепляют триптофан, образуя индол (орто-бензопиррол), пиро-
виноградную кислоту и аммиак. При добавлении к 2-суточной
бульонной культуре тест-реактнва (кислотно-спиртовой раствор
пара-димстиламийобензальдс! ида) образовавшийся индол всту-
пает с ним в реакцию, давая розовое или красное окрашивание
(реакция на индол положи тельная).
Состав: Бульон из триптического перевара казеина (1,2—
1,4% аминного азота), содержащий 0,5% хлоридов.
Приготовление: трннгнческий перевар предварительно
проверяют на содержание, триптофана и отсутствие индола,
устанавливают pH 7,3—7,4. разливают в пробирки по 4—5 мл,
стерилизуют при 121 °C 15 мин.
Можно для этой же цели использовать бульон Хоттингера,
который всегда содержит триптофан, 2% пептонную воду или
1% пептонную воду с добавлением 0,3% триптофана.
Тест-реактивы на индол
Реактив Эрлиха
Состав: Пара-диметиламинобензальдегид —1 г
Спирт этиловый 96° —95 мл
Кислота хлористоводородная (НС1),
концентрированная — 20 мл
Приготовление: растворить альдегид в спирте и доба-
вить кислоту. Хранить без доступа света.
Реактив Ковача
Состав: Пара-диметпла тинобензальдегид —5 г
Спирт амиловый —75 мл
Кислота хлористоводородная (НО),
концентрированная —25 мл
Приготовление: рас торить альдегид в спирте при лег-
ком нагревании (в водяной бане при 50—55^С). Остудить и до-
бавить кислоту. Реактив дот жен быть желтого цвета. Хранить
при 4 СС.
Индикаторные бумажки на индол [Gillies R., 1956]
Определять наличие пн юла можно с помощью индикатор-
ных бумажек, помещаемых под пробку над средой — бульоном
на триптических переварах или агаром Клиглера, проверенными
на содержание триптофана с помощью тест-штаммов или хими-
ческим путем.
Свободный триптофан в среде можно обнаружить с помощью
качественной реакции, возникающей при взаимодействии в кис-
287
лой среде триптофана с галоидами (хлором, бромом) и дающей
красное окрашивание.
Для этой цели к 5 мл испытуемой среды добавляют 2 капли
уксусной кислоты, хорошо перемешивают и по каплям (до появ-
ления розового окрашивания) вносят 1% водный раствор хлор-
амина. Последний необходимо хранить без доступа света [Пеш-
ков М. A., 1949J. '
Состав: Пара-дпметиламинобензальдегид —5г
Орто-фосфорная кислота (Н3РО4),
очищенная, концентрированная — 10 мл
Спирт метиловый — 50 мл
Вместо метилового можно использовать этиловый спирт 96°
в том же количестве. V - - -
Приготовление: ингредиенты смешивают, как уже было
указано. -Затем в тепловатом реактиве смачивают лист фильтро-
вальной бумаги, которую далее высушивают при комнатной тем-
пературе и нарезают полосками (0,5X6 см). Цвет бумажек жел-
тый. Хранить в банке темного стекла.
Примечание. Индикаторные бумажки можно пригото-
вить, используя реактив Ковача.
Полужидкий агар для определения подвижности ! V
Состав: Натрий хлорид (NaCl)
Гидролизат Хоттингера
Агар
Вода дистиллированная
— 5 г
— 120— 150 мл
— 3—4 г
— 1000 мл
Приготовление: гидролизат Хоттингера разводят водой
до содержания в среде 1,3—1,4% аминного азота, добавля-
ют натрий хлорид, устанавливают pH 7,2—7,4, добавляют агар
п полностью расплавляют его, подогревая среду при постоянном
помешивании. Затем фильтруют в горячем состоянии через мит-
калевый фильтр, проверяют прозрачность (визуально) и при не-
обходимости просветляют с помощью яичного белка (см. «Пита-
тельный желатин») или освобождаются от мути отстаиванием в
узких сосудах. Среду разливают по 5 мл в пробирки и стерилизу-
ют при 121 °C в течение 30 мин.
Готовый полужидкий агар охлаждают в виде столбика. Сре-
да должна быть совершенно прозрачной.
Среды с аминокислотами — лизином, орнитином и аргинином
[Moeller V., 1955, 1956], модификация
Эти среды предназначены для определения дифференцирую-
щей способности некоторых энтеробактерий расщеплять различ-
ные аминокислоты.
Принцип действия: бактерии, обладающие специфиче-
скими декарбоксилирующими энзимами, расщепляют ампнокис-
288
лоты в их карбоксильных концевых группах (—СООН), образуя
амии или диамин и двуокись углерода (СО2), изменяя тем са-
мым pH среды в щелочную сторону. Бактерии используют лево-
вращающие аминокислоты. Процесс декарбоксилирования про-
исходит успешно в анаэробных условиях н протекает схематиче-
ски следующим образом:
, лизинлекарбоксилаза
I. лизин-----------------кадаверин (диамин) + СО,;
орнйтнндекарбокенлаэа
L-opiiHTHii ---q-j-------путресцин (диамин) -|- СО,.
Кадаверин и путресцин остаются стабильными, если реакция
происходит в анаэробных условиях.
L-Аргинин расщепляется бактериями несколько иначе — с по-
мощью декарбоксилазной и деги д рол азной систем, которые мо-
гут осуществляться одновременно нлн отдельно. Здесь функцио-
нирует энзимный комплекс, который через промежуточные про-
дукты обмена (L-цитрулин, L-орнитин, мочевина и др.) доводит
расщепление аргинина до образования путресцина + СО2 и при
наличии уреазы до 2NII3 I СО2. Реакция, протекающая более
быстро и интенсивно, свидетельствует в какой-то мере о гидро-
лазном пути усвоения аргинина.
Таким образом, во всех случаях расщепления аминокислот
конечные каталитические продукты повышают значение pH.
В среды с аминокислотами входит г/уцкода,-которую все эн-
теробактерии ферментируют в 1-е часы, снижая л>Ц„вследствне
чего пробирки с аминокислотами и контрольная (без аминокис-
лот) желтеют. Через 24 ч инкубации посева и позднее (до
4 сут) при расщеплении аминокислот происходит подщелачи-
ванце сред, которые становятся фиолетовыми нлн синеют (при
индикаторе бромтимоловый синий). Цвет контрольной среды
остается желтым.
Состав: Мясная вода —400 мл
Пептон — 5 г
Глюкоза — 1г
Вода дистиллированная —600 мл
Бромкрезоловый пурпурный (1,6%
спиртовой раствор) —0,6 мл
Крезоловый красный (0,1% спиртовой
раствор) —5 мл
L-Аминокислота — 10 г
или
DL-Аминокислота —20 г
Примечание. Белковая питательная основа может состо-
ять, помимо указанной прописи, из 5 г пептона и 3 г дрожжево-
го экстракта или из триптическою гидролизата казеина (5 мл)
и дрожжевого экстракта (5 мл) на 1000 мл среды.
19—817
289
Указанный в прописи оригинальный индикатор pH может,
быть заменен на бромтимоловый синий (1 мл 1,6% спиртового*
раствора). Используют также пропись, где количество амино-
кислот снижено вдвое (до 0,5 и 1 % соответственно).
Приготовление: в воде растворяют белковую питатель-
ную основу и глюкозу. Устанавливают pH 6,0—6,1. Затем среду
делят на 4 равные части. В каждую нз трех порций вносят одну
из аминокислот (лизин, орнитин или аргинин) в количестве, за-
висящем от кристаллизационной формы реактива (L или DL).
В последнюю порцию питательной основы аминокислот нс до-
бавляют, оставляя се в качестве koitiрольной. Среды кппятмг
Г>—10 мни и вновь устанавливают pl I 6.0 6.1. Во все iiopmnii
вносят раствор индикатора, перемешивают, разливают в агглю-
тинационные пробирки по 2—3 мл. Стерилизуют при 110 °C
30 мин.
v Среды с органическими кислотами — D-, L- и 1-тартрат,
мукат, цитрат [Кауфман Ф., 1959]
Среды предназначены для дифференциации сальмонелл.
Принцип действия: в пептонных средах, содержащих
оптически активные или инертные образцы винной кислоты (или
ее солей), а также мукат (слизевую кислоту) нлнцитрат натрия,
определяют способность тех или иных сальмонелл расщеплять
с помощью специфических энзимов эти субстраты. Белковой пи-
тательной основой сред является, пептон, индикатором — бром-
тимоловый синий. Незасеянные среды имеют синий цвет с чуть
зеленоватым оттенком.
При положительной реакции среда постепенно обесцвечцва,-
ется от зеленовато-желтого цвета до мутно-белого; при отрица-
тельной реакции — мутнеет, но остается синей. В среде с мука-
том эта реакция отчетлива, тогда как-в средах с тартратами и
цитратом рекомендуется добавлять тест-реактив. В качестве
тест-реактива, повышающего демонстративность и интенсив-
ность реакции, применяют насыщенный раствор ацетата свинца.
Здесь при положительной реакции выпадает вдзнацц тельцый
осадок, а при отрицательной — большой осадок (около vT объе-
ма жидкости в пробирке). Реактив следует, применять лишь в
конце срока инкубации, добавляя в пробирки с отрицательными
результатами.
Состав:
Основа: Пептон — Юг
Натрий гидроокись (NaOH) 0,1 N
раствор —8,5 мл
? Бромтимоловый синий (0,2% водный
! раствор) —12 мл
' Вода дистиллированная —1000 мл
Органические кислоты:
290
D-Тартрат- (правовращающая^:-. соль
винной кислоты) — 10 г
L-Тартрат (левовращающая соль вин-
ной кислоты) — 5 г
i (или мезо)-Тартрат (оптически
инертная соль винной кислоты) — 5 г
Натрий цитрат, нейтральный — 10 г
Мукат (слизевая кислота) — 10 г
Приготовление: готовя г основу среды, стерилизуют при
120 °C 15 мни, добавляют одну из органических кислот, устанав-
ливают pH 7,4, псгитичегки разливают в стерильные пробирки
по 5— 6 мл и стерилизуют текучим паром 20 мни.
Готовить среду можно иначе: к указанной основе присоеди-
нить одну из органических кислот, установить pH 7,4, разлить в
пробирки и стерилизовать при 112 °C 20 мин.
Глицерино-фуксиновый бульон Штерна [Stern W., 1916]
Бульон Штерна служит для дифференциации сальмонелл.
Принцип действия: тот же, что указан для агара Эндо.
Однако в этой среде вместо лактозы имеется глицерин, из кото-
рого некоторые сальмонеллы при ферментации извлекают аль-
дегиды. Свежая, незасеянная среда, хранящаяся при 4—6 °C,
бесцветна. При 37 °C она слегка розовеет. Сальмонеллы, рас-
щепляющие глицерин, nocieneniio подкисляют среду, вызывая ее
окрашивание до фиолетового цвета. Наблюдения проводят 8 сут.
При отрицательной реакции изменения цвета нет (обязательно
в сравнении с контрольной пробиркой).
Состав: Бульон Хоттингера стерильный, pH 8.0 — 1000 мл
Фуксин основной, насыщенный 10%
спиртовой раствор —2,5 мл
Натрий сульфит (Na2SO.,) 10% вод-
ный раствор —16,6 мл
Глицерин ней|ральный —10 мл
Приготовление: к бульону добавляют спиртовой раствор
фуксина, свежеприготовленный 10% водный раствор сульфита
натрия и глицерин, хорошо смешивают, разливают в пробирки
по 6—7 мл. стерилизуют при 112®С 15 мни. Хранить среду мож-
но в холодильнике не более 14 дней.
Среда Ворфеля — Фергюсона [Worfel М., Farguson W., 1951]
в модификации Р. Edwards, W. Ewing (1955)
Среда предназначена для выращивания клебсиелл с целью
стимулирования развития у них капсульной субстанции.
Состав: Натрий хлорид (NaCl) —2 г
Калий сульфат (KaSOi) —1 г
19*
291
Магний сульфат (MgSO4-7H2O) —0,25 г
Сахароза — 20 г
Дрожжевой экстракт сухой — 2 г
или
Жидкий — 88 мл
Агар — 15 г
Вода дистиллированная — 1000 мл
Примечание. Возможно применение жидкой среды (без
добавления агара) согласно оригинальной прописи.
Приготовление: агар расплавляют в теплой воде, до^
бавляют остальные ингредиенты, растворенные в малых коли-
чествах воды, хорошо перемешивают, фильтруют, pH не уста-
навливают, разливают в колбы или флаконы, стерилизуют при
121 °C 15 мин. Перед употреблением разливают в чашки Петри. \
i
' Глицериновый агар [Дауман А. Г., 1927] j
г » 1
1 лицериновыи агар в основном предназначен для внутриви-
довой дифференциации шигелл. S. flixneri 1—5 и S. boydii 12
в отличие от других шигелл не сбраживают глицерин.
Принципдействия: дифференцирующее действие основа- »
но на выявлении способности одних представителей шигелл
ферментировать глицерин от других, лишенных этого свойства-.
При ферментации образуются кислые продукты метаболизма,
вследствие чего положительно реагирующие бактерии вызывают
яркое порозовспис или покраснение среды (через 24—48 ч выра- <
щивапия в термостате). При отрицательной реакции среда оста-
ется без изменений или бледнеет за счет щелочения при расщеп-
лении белковых субстратов. Белковая основа обеспечивает нор- 1
мальную вегетацию бактерий, что позволяет использовать суточ-
ную культуру, выросшую на глицериновом агаре, для серологи-
ческой идентификации.
Состав: Агар питательный сухой —18 г
Вода дистиллированная — 1000 мл
или
Агар (1,8%) на переваре Хоттингера —1000 мл
Глицерин нейтральный -1 —10 мл
Индикатор Андреде — 10 мл
Приготовление: расплавляют агар, добавляют глицерин,
устанавливают pH 7,2—7,4, добавляют индикатор, хорошо сме-
шивают, разливают в пробирки по 6—7 мл, стерилизуют при
112 °C 20 мнн. Цвет готовой среды бледно-розовый.
Бульон с 0,2% глюкозы для клебсиелл
Бульон с 0,2% глюкозы способствует развитию капсул у
клебсиелл.
292
Состав: Бульон питательный pH 7,2—7,4 (сте-
Fильный) — 1000 мл
люкоза — 2 г
Приготовление: в небольшом количестве теплого бульо-
на растворяют глюкозу, раствор добавляют к остальному бульо-
ну, тщательно перемешивают, разливают в стерильные пробирки
по 5—6 мл, стерилизуют при 112 °C 30 мин.
Среда с KCN [Moeller V., 1954]
Среда предназначена для теста дифференциации энтеробак-
терий по их способности расти в присутствии калия цианида.
Принцип действия: одни энтеробактерии (клебсиеллы,
гафнии, цитробактеры и некоторые другие) относительно устой-
чивы к действию KCN и способны расти в среде при определен-
ной его концентрации. Рост других бактерий (например, шигелл,
эшерихий) в этой же среде под действием калия цианида пол-
ностью подавлен. Среда забуферирована и содержит пептон в
качестве питательной основы.
Реакция считается положительной, если через 24—48 ч ин-
кубации появится помутнение или легкая опалесценция (замет-
ная в сравнении с контрольной незасеянной пробиркой). При
отрицательной реакции среда остается прозрачной, в то время
как в контрольной пробирке (без KCN) имеется нормальный
рост бактерий того же штамма (замегное помутнение).
Состав: Пептон — 10 г
Натрий хлорид (NaCl) —5 г
Калин дпгидрофосфат (КН2РО4) —0,225 г
Натрин гндрофосфат (Na2HPO«-— 5,64 г
2Н2О)
Вода дистиллированная — 1000 мл
Калий цианид (KCN) 0,5% водный
раствор — 15 мл
Приготовление: для приготовления основного раствора
в дистиллированной воде растворяют пептон и соли, устанавли-
вают pH 7.6. фильтруют через бумажный фильтр, разливают во
флаконы мерно (по 1000 мл), стерилизуют при 112°C 30 мин
нли при 121 °C 15 мин, затем быстро охлаждают в холодиль-
нике. t
Непосредственно перед применением добавляют по 1,5 мл на
100 мл среды свежеприготовленного 0,5% водного раствора ка-
лия цианида, хорошо перемешивают и асептически разливают
в стерильные агглютпнационные пробирки по 1,5—2 мл, быстро
закрывают их стерильными корковыми пробками и заливают
парафином. В хорошо закупоренных пробирках среда может
храниться при 4 °C до 1—2 нед.
Готовая среда должна быть абсолютно прозрачна.
293
Примечание. Вследствие чрезвычайно высокой токсич-
ности KCN получение реактива, хранение и работу с ним про-
водят согласно соответствующей инструкции МВД СССР.
- ^Тест на р-галактозидазу : [Le Minor L., Ben Hamida F., 1962]
Тест предназначен для определения р-галактозидазиой ак-
тивности, характеризующей энтеробактерии, замедленно сбражи-
вающие ^лактозу (некоторые штаммы эшерихий, клебсиелл, цит-
робактеров и др.), а также дифференцирующей S. arizonae
(тест ONPG положительный) от большинства других сальмо-
нелл (тест ONPG отрицательный). Однако этот тест не заменя-
ет определение ферментации лактозы.
Принцип действия: в ферментации лактозы участвуют
два энзима: «пермеаза, фермент, способствующий проникнове-
нию лактозы внутрь бактериальной клетки и «З-Р-галактозидаза,
внутриклеточный фермент, катализирующий гидролиз лактозы
на ее два моносахаридных компонента — гдда^т^зу^и^глюдозу^
Поэтому бактерии, утратившие способность продуцировать лак-
тоза-пермеазу, являются лактоэосцдицательныму, но некоторые
из них обладают рггал^сшзипазой^ТТля того чтобы определить
р-галактозидазную активность/гфименяют О-нитрофенил-p-D-
галактопиранозид (ONPG). Этот-реагент гидролизуется тем же
самым энзимом, р-Р-гялактпан.чаэой, который гидролизует лак-
тозу. Одним из конечных продуктов гидролиза ONPG, бесцвет-
ного реактива, являетс^^О-нитроФенол 4- вещество желтого,
цвета. Поэтому появлениёжелтого цветав пробирке с бульон-]
ной культурой испытуемого штамма после добавления тесдфе-
актива считается положительной реакцией.^
Состав и приготовление реактивов
Реактив 1: буферный раствор pH 7,0
Натрий дигидрофосфат (NaH2PO4-
• 2Н2О) — 6,9 г
Вода дистиллированная —45 мл
С помощью концентрированной гидроокиси натрия (NaOH)
устанавливают pH 7,0 и доводят дистиллированной водой объем
раствора до 50 мл.
Реактив 2: раствор ONPG
О-нптрофенил-р-галактопиранозид
(ONPG) —80 мг
Вода дистиллированная — 15 мл
(растворы 1 и 2 хранят в холодиль-
нике).
Реактив 3: натрий хлорид (0,9% сте-
рильный раствор) — 100 мл
Реактив 4: толуол
Применение: непосредственно перед опытом соединяют в
равных количествах реактивы 1 и 2, в объеме, необходимом для
294
данного опыта. Смесь на несколько минут помещают в термо-
стат. Затем к 5 мл 18-часовой бульонной культуры, выращенной
при 37 °C, добавляют 0,25 мл 0,9% раствора натрия хлорида,
перемешивают и вносят каплю толуола. Пробирку хорошо
встряхивают в течение нескольких секунд для извлечения энзи-
ма из бактериальных клеток, помещают в термостат. Через 5—
10 мин выдерживания в термостате добавляют в пробирку
0,25 мл свежеприготовленного раствора ONPG и снова помеща-
ют в термостат. Учет результатов производят через 20 мин, за-
тем через 1-, 2, 3 и 24 ч. При 'положительной реакции в пробирке
появляется желтое окрашивание, при отрицательной — цвет не
изменен.
Основа среды для определения р-галактозидазы
энтеробактерий (сухая)
Среда предназначена для выращивания энтеробактерий при
определении р-галактозидазной активности с помощью реакти-
ва ONPG, добавленного к питательной основе.
Принцип действия: указан ранее.
Среду выпускают в сухом виде. Состав и подробный способ
приготовления указаны на этикетке. Реактив О-нитрофенил-р-
D-галактоннранозид прикладывают к среде отдельно.
Среда с глюконатом {Shaw С., Clarke Р. Н.» 1955]
Бульон с глюконатом может быть использован для диффе-
ренциации клебсиелл и эшерихии.
Принцип действия: некоторые бактерии способны пе-
реводить окислением глюконат натрия (калия) в 2-кетоглюко-
нат, который может быть обнаружен в виде восстановленной
субстанции после добавления реактива Бенедикта.
Состав среды: Пептон — 1,5 г
Дрожжевой экстракт — 1 г
Калий гндрофосфат (К2НРО4) —1г
Калий глюконат —40 г
Вода дистиллированная — 1000 мл
Примечание. Глюконат калия можег быть заменен
глюконаюм натрия в количестве 37,25 г на 1 л среды.
Приготовление среды: ингредиенты растворяют в во-
де прн нагревании. Устанавливают pH 7,0, фильтруют, разлива-
ют в пробирки по 5 мл и стерилизуют при 115 °C 20 мин.
Реактив Бенедикта для теста с глюконатом [Cowan S. Т.,
1974|
Состав: Натрий цитрат —17,3г
Натрий карбонат, безводный
(Na2CO3) — 10 г
295
Меди сульфат (CuSO4-5H2O) —1,73 г
Вода дистиллированная — 100 мл
Приготовление: растворить цитрат и карбонат в 60 мл
воды. Растворить сульфат меди в 20 мл воды и с постоянным
помешиванием добавить в первый раствор. Затем к смеси до-
лить воду до полного объема.
Примечание. Раствор легко кристаллизуется при охлаж-
дении и должен храниться в теплом месте.
Применение: в среду с глюконатом вносят петлю испы-
туемой культуры и выдерживают при 37 °C 48 ч. Затем в про-
бирку добавляют 1 мл реактива Бенедикта, смешивают и кипя-
тят 10 мин. При положительной реакции образуется коричне-
вый, оранжевый или рыжевато-коричневый осадок.
Среда для определения лецитиназы [McClung L. S., Тоа-
be Т., 1974]
Тест определения лецитиназы можно применять для внутрн-
родовой дифференциации иерсиний, хотя предложен он был для
идентификации патогенных анаэробов.
Принцип действия: бактерии, обладающие энзимом ле-
цитиназой, относящейся к фосфолипазам, способны расщеп-
лять гидролизом лецитин, органическое вещество из группы фос-
фатидов. В состав среды входит яичный желток, содержащий
большое количество лецитина. Вокруг выросших на среде коло-
ний, состоящих из бактерий, обладающих лецитиназой, возника-
ет опалесцирующая зона. Она образуется, как предполагают, за
счет жиров (формирующихся под действием лецитиназы и сво-
бодных жиров желтка) и водонерастворимых белков яичного
желтка, которые образуют преципитат со свободными жирами.
Состав: Казеин панкреатического переварива-
ния — 40 г
Натрий гидрофосфат (Na2HPO4) —5 г
Калий дигидрофосфат (КН2РО4) — 1 г
Натрий хлорид (NaCl) —2 г
Магний сульфат (MgSO4-7H2O) —0,1 г
Глюкоза —2 г
Агар —25 г
Вода дистиллированная — 1000 мл
Яйцо куриное —2 шт.
Приготовление: агар, питательную основу, соли и дру-
гие ингредиенты смешивают и расплавляют, устанавливают
pH 7,6, разливают в колбы, автоклавируют при 121 °C 15 мин,
охлаждают до 50—55СС. Тем временем тщательно щеткой от-
мывают в проточной воде яйца и помещают их на 1 ч в 96° спирт.
Затем асептически отсасывают желтки, добавляют по одному
296
желтку в колбу с 500 мл охлажденной среды, суспендируют их
стерильной пипеткой. Готовую среду немедленно разливают в
чашки Петри с соблюдением стерильности.
Среда для определения i риптофандезамнназы [Singer J.,
Volcani В. Е., 1955]
Среда предназначена для дифференциации энтеробактерий
но нх способности дезаминировать аминокислоту триптофан.
Положительная реакция характерна для протеев. Среда с трип-
тофаном может заменять среду с фенилаланином.
Принцип действия: бактерии, обладающие триптофан-
дезамнназой, расщепляют триптофан с образованием соедине-
ния иидол-3-пнровиноградная кислота, что может быть выявле-
но при добавлении раствора хлорида железа (III): появление
вишнево-красного окрашивания.
С о ст а в: DL-Триптофан —2 г
Вода дистиллированная — 1000 мл
Готовая среда имеет pH 6,7—6,9.
Но ст а и о яка реакции: подозрительную колонию поме-
щают в пробирку с 0,2—0,5 мл рас твора триптофана и выдер-
живают в термостате при 37 °C 30 мин. Затем добавляют 1 кап-
лю 10% водного раствора хлорида железа (Ill) (см. «Агар с
фенилаланином»), встряхивают и через 5 мин учитывают реак-
цию (вишнево-красный цвет при положительной реакции, жел-
тый — прн отрицательной).
6. СРЕДЫ И РЕАГЕНТЫ
ДЛЯ ДИФФЕРЕНЦИАЦИИ ЭНТ1 РОБАКТЕРИЙ
ОТ ПРЕДСТАВИТЕЛЕЙ ДРУГИХ СЕМЕЙСТВ
Среда для теста на окисление — ферментацию [Hugh R.,
Leifson Е., 1953]
Среда предназначена для установления путей расщепления
углеводов бактериями (OF-тест), что характеризует определен-
ные семейства; у энтеробактерий расщепление углеводов проис-
ходит ферментацией, у псевдомонад — окислением. Кроме того,
существуют бактерии, у которых метаболизм углеводов пол-
ностью отсутствует.
Принцип действия: процесс ферментации, требующий
анаэробных условий, кратко изложен при описании принципа
действия «Сред с углеводами». Окислительный же процесс рас-
щепления углевода (глюкозы) начинается с прямого окисления
его карбоксильной группы п протекает в присутствии атмосфер-
ного кислорода.
297
Состав: Пептон - —2 г
Натрий хлорил (NaCl) —5 г
Калий гидрофос<|>ат (К2ПРО4) —0,3 г
Агар —3 г
Бромтимоловый синий (1% полный
раствор) — 3 мл
Глюкоза — 10 г
Вода дистиллированная — 1000 мл
Приготовление: среда требует особо тщательного при-
готовления (аккуратного взвешивания, употребления хорошо
проверенных ингредиентов и т. п.). Все вещества, входящие в
состав среды, растворяют при подогревании в водяной бане,
фильтруют, разливают в пробирки по 5—6 мл и стерилизуют
при 118°С 10 мин. Готовая среда имеет pH 7,1—7,2.
Используют и другой способ приготовления: основу (все ком-
поненты, кроме глюкозы) готовят, как сказано выше, затем
разливают в пробирки мерно по 5 мл и стерилизуют при 12 PC
в течение 15 мнн. Глюкозу в виде 10% водного раствора под-
вергают стерилизующей фильтрации и добавляют асептически
по 0,5 мл в каждую пробирку со стерильной основой. После тща-
тельного перемешивания среду можно использовать. Допустимо
хранение при 4 °C 2—3 дня.
Среда с KNO3 для определения редукции нитратов
Это дифференциальная среда, предназначенная для под-
тверждения принадлежности испытуемого штамма к энтеробак-
териям, а также для дифференциации нейссерий и некоторых
других грамотрицательных бактерий.
Принцип действия: в микробиологии под восстановле-
нием нитратов подразумевается способность микробов редуци-
ровать соли азотной кислоты (нитраты) [NO3_], например ка-
лия нитрат, в соли азотистой кислоты (нитриты) [NO2~] с вы-
делением аммиака (NO3) или свободного азота (N2) и других
продуктов. Процесс этот осуществляется энтеробактериями с
помощью фермента нитратредуктазы и обычно протекает в
анаэробных условиях, где микроорганизм извлекает необходи-
мый кислород из нитратов. Наличие нитратредуктазы устанав-
ливают определением с помощью тест-реактива одного из про-
дуктов расщепления нитратов — нитритов. Их определяют по
красному окрашиванию среды после добавления тест-реактива,
содержащего а-нафтиламин.
Состав: а) Оригинальная пропись:
Калий нитрат (KNO3), свободный
от нитритов —0,2 г
Пептон — 5 г
Вода дистиллированная — 1000 мл
298
Приготовление: ингредиенты смешивают, устанавлива-
ют pH 7,4, разливают в пробирки по 5 мл и стерилизуют при
121 СС 15 мни.
б) Модификация Центрального НИИ
вакцин и сывороток им. Мечпи-
.' кова:
.Калий нитрат (KNO3) —0,1 г
, , Пептонная вода (0,5% раствор) —1000 мл
Натрий хлорид (NaCl) —2,5 г
Приготовление: Пептонную 1 % воду разводят пополам
дистиллированной водой, прибавляют натрий хлорид (до кон-
центрации хлоридов 0,5%), вносят калия нитрат, все ингреди-
енты растворяют и хорошо перемешивают, фильтруют через бу-
мажный фильтр, устанавливают pH 7.1—7,2, разливают в про-
бирки по 5 мл и стерилизуют при 112 ГС 30 мии.
Примечание. Калий нитрат (KNO8) должен быть свобо-
ден от нитритов (KNO2).
Тест - реактивы
Состав: Раствор А. '
Сульфониловая кислота — 8 г
Уксусная кислота (5N раствор) — 1000 мл
Раствор Б.
а-Нафтиламин —5 г
или
Диметил-а-иафтилампн —6 г
Уксусная кислота (5N раствор) —1000 мл
Приготовление растворов А иБ: соответствующие
ингредиенты растворяют при слабом нагревании. Реактивы ток-
сичны, требуют осторожного обращения. Хранить их необходи-
мо в склянках темного стекла с нрииртыми пробками при 4 °C.
Срок годности реагентов 2—3 мсс (при периодическом контро-
ле на известных тест-штаммах).
Тест-реактивы для определения цитохромоксндазы [Gaby W.,
lladly С., 1957] в модификации W. Ewing, J. Johnson (1960)
Представители семейства Enterobacteriaceae не обладают ци-
тохромоксидазной активностью, что служит дли дифференциа-
ции их от псевдомонад и некоторых других грамотрицательных
бактерий.
Состав: Раствор А.
Спирт этиловый 95° — 100 мл
а-Нафтол —1 г
Раствор Б.
Диметил-р-фенилендиамин
гидрохлорид — 1г
Вода дистиллированная — 100 мл
299
Пр и мела н ие. Раствор А можно хранить в холодильнике
до 10 дней, раствор Б — только один день.
Реактивы для окраски бактерий по Граму
Реактив 1 (для первичной окраски)
Состав: Генцианвиолет или кристалвиолет —1г
Спирт этиловый 96° — 10 мл
Фенол — 2 г
Вода дистиллированная — 100 мл
Приготовление: в ступке растирают краситель с фено-
лом, постепенно добавляя спирт и воду. Тщательно перемешан-
ную жидкость сливают во флакон, выдерживают сутки и затем
фильтруют через бумажный фильтр.
По другому способу смешивают 10 мл насыщенного (4,8%)
спиртового раствора красителя со 100 мл 2% феноловой воды.
Реактив 2. Раствор Люголя (в модификации Грама)
Состав: Калий йодид (KI) —2 г
йод кристаллический — 1 г
Вода дистиллированная — 300 мл
Приготовление: йод и калий йодид хорошо размешива-
ют в 10 мл воды, оставляют на сутки в мерной колбе, после чего
добавляют воду до 300 мл.
Реактив 3. Спирт этиловый 96° — 100 мл
Реактив 4. Фуксин феноловый, разведенный
Состав: а) Фуксин основной —10 г
Спирт этиловый 96° — 100 мл
Ингредиенты смешивают и ставят в хорошо закрытом фла-
коне в термостат на 18—20 ч.
б) Фенол — 5 г
Вода дистиллированная — 100 мл
Прнготовлени е: когда оба раствора будут готовы, до-
бавляют 10 мл раствора фуксина к 100 мл фенолового раствора.
При этом получается крепкий феноловый фуксин, который для
работы разводят дистиллированной водой 1 : 10.
7. СРЕДЫ ДЛЯ ХРАНЕНИЯ И ПЕРЕСЫЛКИ КУЛЬТУР
Яичная среда
Яичную среду используют для хранения и пересылки штам-
мов.
Состав: Яйцо куриное (свежее, диетическое) —4 шт.
Натрий хлорид (0,9% стерильный
раствор) —100 мл
300
Приготовление: скорлупу яиц тщательно отмывают, об-
рабатывают спиртовым раствором йода, затем спиртом и обжи-
гают. Содержимое яиц сливают в банку с бусами и встряхива-
ют до образования гомогенной массы, добавляют раствор нат-
рия хлорида, тщательно перемешивают, разливают в стерильные
пробирки по 4—5 мл п стерилизуют в скошенном положении в
аппарате Коха при 80 °C в течение 1 ч, два дня подряд.
П р и м е н е й и е: бактериальную культуру засевают частым
штрихом по поверхности среды. Пробирки закрывают стериль-
ными корковыми пробками и заливают парафином.
Полужидкий голодный агар [Крушинская Е. А., 1957]
Среда предназначена для хранения культур.
Принцип действия: основан на том, что невысокое со-
держание питательных веществ понижает жизнедеятельность
бактерий, особенно в условиях хранения при 4—6 °C. Замедлен-
ные процессы обмена веществ ограничивают скопления метабо-
литов, что в свою очередь положительно влияет на сохранение
исходных свойств штамма.
Состав: Бульон питательный, содержащий
0,6—0,9% общего азота, pH 7,2—
7,4 — 1000 мл
Агар . —2—4 г
Приготовление: агар расплавляют в горячем бульоне,
фильтруют, разливают по 8—10 мл в пробирки или по 1 мл в
мелкие ампулы, стерилизуют прн 121 °C 30 мин.
Применение: культуру засевают 1—2 уколами в толщу
среды, помещают в термостат и после 18—20-часового выращи-
вания выросшие культуры оставляют для хранения. Ватные
пробки в пробирках заливают парафином или заменяют на сте-
рильные корковые, ампулы запаивают. Штаммы хранят при 4—
6 °C, пересевают через 2—3 мсс.
Питательный желатин [Хоменко Н. А., Дмитровская Т. С.,
1962]
Питательный 10% желатин, разлитый в ампулы, может слу-
жить средой для сохранения и пересылки культур.
П р н г о т о в л е и и е среды опт ано ранее.
Бактериальные культуры, засеянные уколом в ампулы со
средой, после 18- 20 ч подращивания помещают в холодильник
в запаянных ампулах. Проверку со< тояния и пересевы сохраняе-
мых штаммов производят через 1 2 года.
301
8. ИНДИКАТОРЫ
Индикатор Аидреде
Состав: Фуксин кислый —5 г
Натрий гидроокись (NaOH)
1 N раствор — 150—180 мл
Вода дистиллированная — 1000 мл
Приготовление: кислый фуксин растворяют в воде и до-
бавляют раствор щелочи, перемешивают и оставляют при ком-
натной температуре на 24 ч, периодически встряхивая. Цвет
должен измениться от красного до коричневого. Если цвет не
изменился, то добавляют еще 10 мл щелочи и выдерживают ин-
дикатор еще 1 сут.
По другой прописи смешанные ингредиенты выдерживают
24 ч в термостате при 37 °C и затем 48 ч при комнатной темпе-
ратуре на свету.
Хранят готовый индикатор в бутыли темного стекла с при-
тертой пробкой в обычных условиях.
Бромтимоловый синий (0,2% щелочной раствор)
Состав: Бромтимоловый синий —1 г
Натрий гидроокись (NaOH) 0,1 N
раствор —25 мл
Вода дистиллированная —475 мл
Бромтимоловый синий (1,6% щелочной раствор)
Состав: Бромтимоловый синий — 1,6 г
Натрий гидроокись (NaOH) 0,25 N
раствор —20 мл
Вода дистиллированная — 80 мл
Феноловый красный (0,2% щелочной раствор)
Состав: Феноловый красный — 1 г
Натрий гидроокись (NaOH) 0,1 N
раствор —40 мл
Вода дистиллированная —460 мл
Феноловый красный (1,6% щелочной раствор)
Состав: Феноловый красный —1,6 г
Натрий гидроокись (NaOH) 0,25 N
раствор — 20 мл
Вода дистиллированная — 80 мл
302
Феноловый красный (0,4% водный раствор)
Состав: Феноловый красный —0,1 г
Вода дистиллированная стерильная —25 мл
П римечание. Раствор хранят при 4вС не долее 10 дней.
Феноловый.красный (0,2% спиртовой раствор)
Состав: Феноловый красный ‘ —0,2 г
Спирт этиловый 50% — 100 мл
Бром крезоловый пурпурный (1,6% спиртовой раствор)
Состав: Бромкрезоловый пурпурный —1,6 г
Спирт этиловый 96° — 100 мл
Крезоловый красный (0,1% спиртовой раствор)
Состав: Крезоловый красный —0,1г
Спирт этиловый 96° — 100 мл
Бриллиантовый зеленый (0,1 или 0,5% водный раствор)
Состав: Бриллиантовый зеленый —0,1 или
0,5 г
Вода дистиллированная — 100 мл
Кристаллический фиолетовый (0,01% водный раствор)
Состав: Кристаллический фиолетовый —0,01г
Вода дистиллированная — 100 мл
Метиленовый синий (1% водный раствор)
Состав: Метиленовый синий —1 г
Вода дистиллированная — 100 мл
Розоловая кислота (5% спиртовой раствор)
Состав: Розоловая кислота —5 г
Спирт этиловый 96° — 100 мл
Приготовление индикаторных растворов: су-
хое красящее вещество растирают в ступке с постепенным до-
бавлением горячей воды, щелочи или спирта (в зависимости от
характера изготавливаемого раствора). Затем жидкость осто-
рожно, смывая ступку, перекосят в мерную колбу, добавляя не-
обходимое количество волы или спирта. Колбу плотно закупо-
ривают и помещают на 2—3 дня в термостат (37 °C).
303
После этого индикатор фильтруют через многослойный бу-
мажный фильтр и хранят в темных флаконах с притертыми
пробками.
Срок годности не более 1—2 мес, кроме водного раствора
фенолового красного, который можно хранить в холодильнике
только до 10 дней.
9. НЕКОТОРЫЕ ДОПОЛНИТЕЛЬНЫЕ СВЕДЕНИЯ
Показания манометра и соответствующие давлению
температуры
Давление, кг/см2
0
0,5
0,6
0,7
1,0
Температура
по Цельсию, °C
99—100
111,8
112,7
115
119,6—121
Тесты для контроля стерилизации
Работу стерилизующей аппаратуры рекомендуется постоянно
контролировать, закладывая вместе с подвергаемым обработке
материалом запаянные ампулы, содержащие небольшое коли-
чество соответствующего температурному режиму вещества. Для
большей наглядности к нему добавляют крупицу красителя
(фуксин или др.).
1. Суховоздушная стерилизация. Тест-реактив — сахароза,
которая плавится при 170 °C.
2. Стерилизация под давлением. Тест-реактивы: бензонаф-
тол, который плавится при ПО °C, антипирин — при ИЗ °C, ре-
зерпин и сера — при 119 °C, бензойная кислота — при 120 °C.
ПРИЛОЖЕНИЯ
1. ПРИЛОЖЕНИЕ к ГЛАВЕ 1
Классификация семейства Enterobacteriaceae
по Bergey’s Manual of Systematic Bacteriology (1984)*
Данное руководство находилось в печати, когда вышло 9-е*
переработанное н дополненное издание Bergey’s Manual of
Systematic Bacteriology (1984). В связи с тем что в этом изда-
нии классификация семейства Enterobacteriaceae значительно
изменена, целесообразно поместить ее в настоящем приложении.
D. J. Brenner (председатель Подкомитета по таксономии Ente-
lobactcriaceae Международного комитета систематической бак-
териологии) описал основные свойства семейства Enterobacte-
riaceae, относящегося к факультативно анаэробным грамотри-
цательным бактериям (Секция 5), и привел подробные сведе-
ния о морфологических, биохимических и генетических харак-
теристиках его представителей. Автор сопоставил новую клас-
сификацию энтеробактерий с данными 8-ю издания, и указал
на существенные, но труднорешаемые проблемы таксономии.
D. J. Brenner подчеркнул важность решения Юридической ко-
миссии Международного комитета систематической бактерио-
логии, которое узаконило сохранение прежнего наименования '
семейства Enterobacteriaceae с типовым родом Escherichia.
Вероятно, полезно ознакомить читателей с определением ос-
новных свойств, характеризующих семейство, поскольку оно не-
много отличается от приведенного в издании 1974 г.
Семейство Enterobacteriaceae — грамотрицательные тонкие
палочкн, 0,3—1,0-1,0—6,0 рм; подвижные перитрихи, кроме
Tatumella, или неподвижные. Они не образуют эндоспоры или
мнкронпсты, не кислотоустойчивы. Растут в присутствии кисло-
рода нли без него. Хорошо развиваются в пептонных и мясных
средах н обычно на среде Мак Конки. Некоторые используют
D-глюкозу как единственный источник углерода, другие требу-
ют в качестве добавок витамины и (или) аминокислоты. Пита-
ние осуществляют за счет органических соединений; механизм
метаболизма дыхательный н ферментативный. Не галофилы.
Кислоту и часто видимые объемы газа продуцируют при фер-
ментации D-глюкозы, других углеводов и многоатомных спир-
тов. Каталазоположительны, за исключением Shigella dysenteriae
* 'ergey’s Manual of Systematic Bacteriology. — 9th rd./Eds J. G. Holt,
N. R. Krieg. — Baltimore — Landon: Williams a Wilkins, 1984, vol 1, p. 408—
516.
20- 817
305
Ю-грунны 1 п Xeiiorhabdus neniatophilus; окспдазопсгатпнпы.
Нитраты редуцируют в нитриты, за исключением некоторых
штаммов Erwinia и Yersinia. Содержание Г+Ц в ДНК 38—
•60 моль%. ДНК видов, принадлежащих к большинству родов,
родственны между собой не больше чем на 20%. также и к
Escherichia coli, типовому виду всего семейства. Составляют
исключение некоторые виды Yersinia, Proteus, Providencia,
Hafnia и Edwardsiella, ДНК которых имеют 10—20% родства
с ДНК видов, принадлежащих к другим родам.
Все изученные виды содержат энтеробактериальный общий
антиген (СА) [Kunin et al., 1962; Whang, Neter, 1962; Kunin
1963; Vosti et. al., 1964; Le Minor et al., 1972], кроме Erwinia
chrysanthemi [Le Minor et al., 1972].
Типовой род — Escherichia Castellani и Chalmers 1919 —
определен Юридической комиссией Международного комитета
•систематической бактериологии в 1958 г.
В прежних изданиях семейство Enterobacteriaceae было раз-
делено на трибы (группы) на основании биохимических харак-
теристик, а в 8-м частично учитывался и генетический анализ.
Известно, что комбинации соединения родов в трибы и нх число
заметно отличались от издания к изданию. В настоящее время
•отвергнута диагностическая значимость триб, а их таксономиче-
ское значение вызывает сомнение. В связи с этим семейство
Enterobacteriaceae разделено непосредственно иа роды, а поня-
тие «триба» опущено. Дальнейшему пересмотру с этих позиций
подлежит «Одобренные списки названий бактерий», где еше
указаны трибы, не соответствующие приведенным в 8-м издании.
Описания отдельных родов составлены различными ведущи-
ми исследователями, работающими в соответствующих областях
бактериологии (F. Orskov, В. Rowe, R. Gross, L. Le Minor, R. Sa-
kazaki, I. Orskov, C. Richard, I. R. Lelliott, R. Dickey, P. Gri-
mont, F. Grimont, J. J. Farmer III, A. McWhorter, J. Penner,
H. Bercovier и H. Mollaret), однако все сведения были пред-
ставлены по общей схеме. Для каждого рода даны основные оп-
ределения, внутривидовая классификация, культуральные, био-
химические и генетические характеристики, антигенная струк-
тура, отношение к бактериофагам и колицинам, оттенены глав-
ные дифференцирующие признаки внутри рода и по отношению
к другим сходным бактериям.
По новой классификации рассматриваемое семейство состо-
ит из общеизвестных 14 родов (в ранг рода внесены Providen-
cia и Morganella). Кроме того, в 9-м издании J. J. Farmer III
представил дополнительные сведения о малоизученных или не-
давно описанных энтеробактериях. Одни из них не привлекали
внимания из-за их ограниченного распространения (например,
Obesumbacterium), другие были мало известны исследователям
(например, Kluyvera) пли недавно описаны (например, Ctde-
сеа). В настоящее время они составили группу нз 6 так назы-
ваемых «других родов».
306
Попая классификация ирииедсиа ниже.
Классификация семейства Enterobacteriaceae
(по Bergsy's Manual of Systematic Bacteriology, 1984)
Семейство Типовой род 1. Enterobacteriaceae Rahn 1937; Nom. fam. cons. Opin. 15, Jud. Comm. 1958; Ewing, farmer, Brenner. 1980; JudicaK Commission 1981 Escherichia Castellani, Chalmers 1919
Род I. Escherichia Castellani, Chalmers 1919
Вид 1. Г-cherichia coli
2 Escherichia blattae
Род II. Shigella Castellani. Chalmers 1919
Вид 1. Shigella dysenteriae
2. Shigella flexneri
3. Shigella boydii
4. Shigella sonnei
Род III. Salmonella l.igniers 1900
11одрод 1. SI
II. S1I, atypical S (II)
III. SIH («S. arizonae»)
IV. SIV («S. houtenae»)
- V. SV («S. bongor»)
Род IV. Citrobacter Werkman, Gillen 1932
Вид 1. Citrobacter fretindii
2. Citrobacter diversus
3. Citrobacter ainalonaticus
Род V. Klebsiella Trevisan 1885
Вид 1. Klebsiella pneumoniae
la. Klebsiella pneumoniae подвид pneumoniae
th. Klebsiella pneumoniae подвид ozaenae
Ic. Klebsiella pneumoniae подвид rhinoscleromatis
2. Klebsiella oxytoca
3. Klebsiella lerrigena
1 Klebsiella planticola
Р о д VI. Enlerobacfer Hormaeche, Edwards 1960
Вид 1. Enterobacter cloacae
2. Enterobacter sakasakii
.4. Enterobacter aggloinerans
I. Enterobacter aerogenen
5. Enterobacter gergoviae
Другие микроорганизмы,
принадлежащие к роду Enterobacter
a. b. c. d. Enterobacter intermedium Enterobacter amnlgenus Erwinia dissolvens Erwinia nimipressuralis
Род VII. Erwinia Winslow, Broadhurst, Rogers, Smith 1920 Buchanan, Krumwiede
Вил 1. 2. Erwinia amylovora Erwinia tracheiphila
20’
307
Род
Вид
Род
Вид
Род
Вид
’Род
Вид
Род
Вид
Род
Вид
Род
Вид
3. Erwinia mnllotivora
4. Erwinia rubrifaciens
5. Erwinia quercina
6. Erwinia salicis
7. Erwinia herbicola
8. Erwinia ananas
9. Erwinia rhapontici
10. Erwinia carotovora
10a. Erwinia carotovora подвид carotovora
10b. Erwinia carotovora подвид atroseptica
«Erwinia carotovora подвид betavasculorum»
11. Erwinia chrysanthemi
12. Erwinia cypripedii
13. Erwinia nigrifluens
14. Erwinia stewartii
15. Erwinia uredovora
.Species Incertac Sedis (виды с неопределенной таксономи-
ческой позицией)
a. Erwinia cancerogciia
b. Erwinia carnegieana
c. Erwinia dissolvens
d. Erwinia nimipressuralis
VIII. Serratia Bizio 1823
1. Serratia marcescens
2. Serratia liquefaciens
3. Serratia plymuthica
4. Serratia rubidaea
5. Serratia odorifera
6. Serratia ficaria
IX. Hafnia Moller 1954
1. Hafnia alvei
X. Edwardsiella Ewing, McWhorter 1965
1. Edwardsiella tarda
2. Edwardsiella hoshinae
3. Edwardsiella ictaluri
XI. Proteus Hauser 1885
1. Proteus vulgaris
2. Proteus mirabilis
3. Proteus myxofaciens
XII. Providencia Ewing 19M
1. Providencia alcalifaciens
2. Providencia stuartii
3. Providencia rettgeri
XIII. Morganella Fulton 1943
1. Morganella morganii
XIV. Yersinia Van Loghem 1944
1. Yersinia pestis
2. Yersinia pseudotuberculosis
3. Yersinia enterocolitica
4. Yersinia intermedia
5. Yersinia frederiksenii
6. Yersinia kristensenii
7. Yersinia ntekeri
308
Другие ромы семейства Enterobacteriaceae
Рол Obesumhacterium Shimwcll 1963
Вид 1. Ohesunibactcrium proteus Biogroitp 1 Biogroiip 2
Род Xenorhabdus Thomas. Pninar 1979
Вид 1. Xenorhabdus tiemalophihis
2. Xenorhabdus lumincscens
Род Khiyvcra Farmer, FanniiiK, Huntley Carter, Holms, Nickman, Richard. Brenner 1081
Вид 1. Khiyvera ascnrbala
2. Khiyvcra cryocrescens
Род Rahnella Izard, Gavini, Trinel, Leclerc 1981
Вид 1. Rahnella aquatilis
Род Odecea Griinont, Grimont, Farmer. Asbury 1981
Вид 1. Ccdecca davisae
2. Odecea lapngei
Непоименованные инды
«Пид 3»
«Вид 4»
«Вид 5»
Род
Вид 1.
Taiumella Hollis, Hickman, Fanning 1982
Taiumella plyseos
Классификация и номенклатура многих лаже хорошо изу-
ченных родов еше не окончательно установлена (например, ро-
да Salmonella) и подлежит дальнейшему совершенствованию
на основе новейших научных данных.
Клиническое значение большинства дополнительно введенных
в семейство Enterobacteriaceae родов и видов еще не изучено.
309
2. ПРИЛОЖЕНИЕ К ГЛАВЕ 3
Новое в классификации1 бактерий рода Shigella
Международная классификация шигелл с 1958 г. не претер-
певала изменений, хотя за эти годы опубликован ряд предложе-
ний по ее усовершенствованию [Геккер В. Д. и др., 1965; Хо-
менко Н. А., 1967—1973; Петровская В. Г., 1973; Новгородская
Э. М. и др., 1974; Петровская В. Г., Бондаренко В. М., 1977;
Петровская В. Г., Хоменко Н. А., 1979; Хоменко Н. А., 1981, и
др.]. Лишь в 1982 г. схема классификации шигелл была пере-
смотрена Международным подкомитетом по Таксономии Entero-
bacteriaceae. Председатель подкомитета D. J. Brenner предста-
вил подробный перечень принятых изменений и дополнений*.
Международный подкомитет принял большинство предложе-
ний В. Г. Петровской и Н. А. Хоменко (1979). Так был подраз-
делен S. flexneri серовар 5 на 2 подсеровара: 5а (V:3,4) и 51>
(V:7,8), что уже упомянуто в 9-м издании Bergey’s Manual of
Systematic Bacteriology (1984). Наоборот, число подсероваров
S. flexneri серовара 3 ограничено двумя: За—антигенная форму-
ла III : (3, 4), 6, 7, 8, и ЗЬ с формулой III : (3, 4), 6. Подсеро-
вары отличаются по стабильному групповому комплексу анти-
генов 7, 8.
Кроме того, полностью были одобрены подкомитетом пред-
ложения В. Г. Петровской и Н. А. Хоменко (1979) в отношении
провизорных сероваров шигелл, основанные на исследованиях,
проведенных Н. А. Хоменко (1974, 1978). Шигеллы провизорных
сероваров 3873-50 и 3341-55, соответствующие по культураль-
ным и биохимическим свойствам виду S. dysenteriae. включены
в этот вид, как серовары 11 и 12 (соответственно). На этом же
основании провизорные серовары 2710-54 и 3615-53 причислены
к виду S. boydii, как серовары 16 и 17. Серовар 2000-53 исклю-
чен из числа провизорных сероваров шигелл, отнесен к эшери-
хиям (лактозоотрицательный, неподвижный, безгазовый ва-
риант), а провизорный серовар 1621-54 оставлен sub judice для
дальнейшего изучения.
Также в схему классификации шигелл было решено ввести
из числа новых провизорных сероваров серовар E10I63, опи-
санный в 1980 г. R. Gross, L. Thomas, В. Rowe, в качестве
S. Boydii серовара 18. В 1982 г. R. Gross с соавт. изучили вы-
деленные от больных диареей возбудители, которые в настоя-
щее время внесены в число провизорных сероваров шигелл и
обозначены как Е16553.
В результате перечисленных изменений и дополнений схемы
международной классификации шигелл (1982) увеличилось чи-
* Brenner D. J. Recommendations on recent proposals for the classification
of Shigella. — Int. J. system. Bact., 1984, vol. 34, N 1, p. 87—88.
310
ело представителей рода (до 44 единиц вместо 39). Модерни-
зированная схема международной классификации шигелл при-
ведена ниже.
Схема классификации бактерий рода Shigella (1082)
Подгруппа, вид Серовар Подсеровар Сокращенная анти- генная формула
A. S. dysenteriae 1-12
В. S. flexneri 1 la 1:4...
II. 1:6...
2 2а 11:3,4...
2b 11:7,8...
3 За П1:(3,4),6,7,8...
3b 111: (3,4,) ,6...
4 1а 1\':3,4...
4Ь 1V:6...
5 ба V:3,4...
5Ь V:7,8...
6 —• VI:—
X-variant — —:7,8...
Y-variant — —:3,4...
С. S. boydii 1- 18 —
D. S. sonnei —
В связи с тем что в главе 3 отсутствуют биохимические ха-
рактеристики новых представителей шигелл (S. dysenteriae 11,
12 S. boydii 16, 17, 18 и провизорного серовара Е16553), необхо-
димые для дифференциации от других шигелл в пределах вида
или рода, такие характеристики приведены в табл. 1, 2, 3.
"I а б л и ц а I. Биохимические спойстпа, необходимые для дифференциации
S. dysenteriae
Серовар индол ДУ-»М|НТ Чг<*Т 11 ЛИ Г\ЙС1р«1 рлмпптя | к. н.члла сорбит арабиноза
11 12 - - -.1- ( ! ) 1 1 ) (+) (4 ) + +
Таблица 2. Биохимические свойства, необходимые для дифференциации
8- boydii
Серовар Тест илн субстрат
ННДПЛ дулепит | КСЯЛО1А сорбит
16 + 4-
17 4- — 4- 4-, (4-)
18 -— — (4) (4-)
311
Целесообразно привести и некоторые сведения, касающиеся
антигенов и антигенных связей вышеуказанных представителей
шигелл.
О- и К-антигены этих шигелл еще не изучены. Вместе с тем
уже установлено внутриродовое антигенное родство: S. boydii
17 и S. dysenteriae 3; S. boydii 18 и S. flexneri 1, а также —
в'ровизорным сероваром 1621-54 и S. boydii 12.
У тех же шигелл выявлены антигенные связи с Е. coli по
О-антигену. Так, S. dysenteriae серовар 11 имеет связь с серо-
группой 029; серовар 12 — с 03, а с 0152 идентичен. S. boydii
серовар 16 имеет связь с Е. coli серогруппы 041, серовар 17 —
с 0124, серовар 18 — с 03, 013, 025, 0115, 0133 и 0152. Упо-
мянутые провизорные серовары также имеют антигенное род-
ство с Е. coli по О-антигенам: серовар 1621-54 с серогруппой 07
(идентичен), а Е16553 родствен с 06, 010 и О18а, с.
Несомненный интерес представляет появление с конца 70-х
годов в СССР этиологической формы дизентерии, вызываемой
S. flexneri с антигенной формулой IV: 7, 8, не предусмотренной
в международной классификации шигелл. Специальными иссле-
дованиями [Прямухина Н. С. и др., 1984] показано повсемест-
ное и нередкое выделение в нашей стране у больных дизенте-
рией этого необычного серологического варианта S. flexneri в
отличие от ранее известных его «эпизодических» выделений за
рубежом. Целенаправленное коллекционирование и изучение
указанных штаммов во Всесоюзном центре по шигеллезам
(ВЦП!) позволило составить их биохимическую характеристи-
ку и сравнить ее с характеристиками известных сероваров
S. flexneri 4а, 4b, S. flexneri var. X по данным ВСШ и CDC
(Центр контроля за заразными заболеваниями, США). При
этом были установлены небольшие колебания по некоторым
признакам, присущим всему виду S. flexneri и не имеющим
дифференцирующего значения.
Кроме того, по ряду биохимических свойств штаммы S. flex-
neri IV: 7, 8, выделенные у больных дизентерией в СССР, были
сравнены с аналогичными штаммами, выделенными за рубежом,
или штаммами другого происхождения (табл. 4). При этом вы-
dl 2
Таблица 4. Некоторые биохимические свойства штаммов S. flexneri IV:7,8
ратного происхождения
Тест или субстрат Биохимические свойства штаммов, выделенных
от людей от обезьяны (1 штамм) П1 воды (1 штамм)
в СССР (137 штям- мов) в ЧССР (1 штамм) в Лондоне (1 пианы)
Сахароза - —. — — —
Рамноза — — — —
Мальтоза + + 1 + +
Арабиноза -1. (-1) (-I-) 1- + +
Рафиноза (I-). 1 (+) (н 4- +
Сорбит — — — —. —
Индол — — — —
явлено, что все они идентичны по отсутствию ферментативной
активности в отношении сахарозы, рамнозы, сорбита и образо-
вания индола и по способности сбраживать мальтозу, арабинозу
и рафинозу.
Таким образом, при проведении бактериологической диагно-
стики дизентерии в качестве ее возбудителя возможен описан-
ный вариант шигелл — S. flexneri IV: 7. 8. При его идентифи-
кации и дифференциации от других шигелл полезно учитывать
приведенные биохимические характеристики.

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
Андреева 3. М., Лавровская В. М„ Богоявленская Л. Б. и др. Система инди-
каторная бумажная для идентификации энтеробактерий. — Журн микро-
биол., 1983, № 4, с. 20—23.
Барбан П. С., Пантюхина Л. Н. Методика получения и контроля флуоресци-
рующих Fab-фрагментов ангител против белков сыворотки лошади,—
Журн. микробиол., 1984, Хе 2, с. 102—105.
Barypi А. П., Рагинская В. П. Разработка схемы дифференциации бактерий
Hafnia по Н-антигену. — Журн. микробиол., 1976, № 11, с. 87—90.
Батуро Л. Л., Рагинския В. 11.. Кизевальтер Ю. Провизорная диагностиче-
ская схема дифференциации бактерий Hafnia по О-антигену.—Жури,
мнкробиол., 1974, Хе 2, с. 103—106.
Белая Ю. .4., Белая О. Ф. Получение дизентерийных и сальмонеллезных диа-
гност икумов для реакции коагглютинации в лиофилизированном виде и
разработка рапид-системы. — Лабор. дело, 1982, № 8, с. 486—488.
Голубева И. В. Ускоренные методы лабораторной диагностики кишечной ко-
ли-инфекцин. — В кн.: Научные достижения в изучении коли-инфекции/
Под ред. И. В Голубевой. М.: ВНИИМИ, 1973, с. 112—119.
Голубева И В., Киселева Б. С. Роль Всесоюзного центра по эшерихиям в
улучшении лабораторной диагностики эшерихиозов.— В кн.: Сборник
тру гов «Диагностические препараты и методы лабораторной диагностики
заболеваний, вызываемых энтеробактериями»./Моск. НИИ вакцин и сыво-
роток им. И. И. Мечникова.—М., 1977, ч. 1, с. 3—29.
Голубева И. В., Улиско И. Н. Классификационное положение Е. coli — В кн.:
Научные достижения в изучении колн-ннфекцин./Под ред. И. В. Голубе-
вой. М.: ВНИИМИ, 1973, с. 3—15.
Голубева 11 В., Кузякина Т. А., Киселева Б. С. Организация работы Всесоюз-
ного центра по эшерихиям и опорных баз Центра по выяснению этиологи-
ческой структуры коли-инфекции в СССР. — В кн.; Новые методы лабо-
раторной диагностики и применение новых препаратов для диагностики
кишечных инфекций; классификация шигелл./Моск. НИИ вакцин и сыво-
роток им. И. И. Мечникова. М., 1973, с. 18—29.
Калина Г. 11. Роль экологического фактора при решении некоторых таксоно-
мических проблем (на примере бактерий рода Proteus). — Журн. микро-
биол., 1974, № 12, с. 54—57.
Калина Г. П. Edwardsiella tarda. — Журн. микробиол., 1980, Xs 5, с. 25—33.
Калина Г. 11. Питательные среды для целевых исследований на эдвардсиел-
лы. — Журн. микробиол., 1981, № 2, с. 27—33.
Калина Г. П. О так называемом оксидазном тесте, его механизме и о терми-
нологии. — Журн. микробиол., 1982, Xs 6, с. 3—5.
Киселева Б. С. Капсульные антигены клебсиелл как основа для разработки
диагностических и щюфилактических препаратов. — В кн.: Бактериальные
антигены./Под ред. Семенова Б. Ф. М.: Моск. НИИ вакцин и сывороток
им. И. И. Мечникова, 1982, с. 30—39.
Киселева Б. С., Голубева И. В. Современное состояние вопроса о дифферен-
циации возбудителей острых кишечных заболеваний. — В кн.: Новые ме-
тоды лабораторной диагностики н применение новых препаратов для диа-
гностики кишечных инфекций; классификация шигелл./Моск. НИИ вак-
цин и сывороток нм. И. И. Мечникова. — М., 1973, с. 4—И.
Киселева Б. С.. Голубева И. В. Дифференциация и идентификация бактерий
<емейства Enterobacteriaceae. — В кн.: Сборник трудов. «Диагностические
препараты и методы лабораторной диагностики заболеваний, вызываемых
чнтеробактернями»./Моск. НИИ вакцин и сывороток им. И. И. Мечнико-
ва,— М., 1977, ч. 1, с. 30—49.
314
Киселева Б. С., Голубева И. В., Дробышевская Э. И. и др. О роли бактерий
из трибы Klebsielleae при кишечных и других заболеваниях человека, ме-
тоды их идентификации и перспективы приготовления диагностических
препаратов. — В кн.: Новые методы лабораторной диагностики и приме-
нение новых препаратов для диагностики кишечных инфекций; классифи-
кация шигелл./Моск. НИИ вакцин и сывороток им. И. И. Мечникова. М.,
1973, с. 75—80.
Киселева Б. С., Голубева И. В., Дробышевская Э. И. и др. Биологическая
характеристика энтеропатогенных эшерихий серологической группы
0151 : К. — Журн. микробиол., 1976, Ns 9, с. 129—133.
Киселева Б. С., Скибенко Л. В., Гедзе Г. И. и др. Характеристика эшерихий
серологической группы 0144 : К, выделенных при острых кишечных забо-
леваниях.— Журн. микробиол., 1975, Ns 5, с. 49—52.
Киселева Б. С., Солодова Т. Л., Шляпников В. Н. и др. Серологические раз-
новидности К. pneumoniae при пневмонии. — Журн. микробиол., 1982, №9,
с. 34—42.
Красильников А. П. К систематике рода Klebsiella. — В ки.: Актуальные проб-
лемы теоретической и клинической медицины. Минск, 1975, с. 175—177.
Красноголовец В. И., Киселева Б. С. Клинические особенности клебсиеллезной
инфекции. — Клин, мед., 1982, Ns 2, с. 88—90.
Кудлай Д. Г. Внехромосом-ные факторы наследственности бактерий и их зна-
чение в инфекционной патологии. — М.: Медицина, 1977. — 224 с.
Литинский Ю. И., Герок Г. И., Сидоровский Ю. И. и др. Использование фено-
мена роения с целью выделения чистых культур сальмонелл из испражне-
ний. — Жури, микробиол., 1976, Ns 6, с. 73—79.
Никитин В. М., Плугару С. В. Ускоренные методы энзимо-индикации микро-
бов.-— Кишинев: Штиннца, 1979.— 171 с.
Одобренные списки названий бактерий. — Ереван: Айастан, 1982. — 420 с.
Петровская В. Г. Современное состояние таксономии и ее значение для меди-
цинской микробиологии. — Жури, микробиол., 1982, Ns 5, с. 18—24.
(Петровская В. Г., Хоменко И. A.) Petrovskaya V. G., Khomenko N. A. Pro-
posals for improving the classification of members of the genus Shigella. —
I nt. J. System. В act., 1979, v. 29, N 4, p. 400—402.
П рямухина H. С., Колобова Л. Ф. Животные — носители шигелл. —• В кн.: Со-
хранение н индикация шигелл в окружающей среде./Под ред. В. И. По-
кровского.— М.: ВНИИМИ, 1983, с. 21—25.
Прямухина Н. С., Ягина В. С., Молочаева И. С. и др. Характеристика Shigella
sonnei, выделенных на некоторых территориях СССР в 1974—1979 гг.—
Журн. микробиол., 1981, Ns 5, с. 33—39.
Рогинская В. П. Антигенная структура и О-антигенные связи бактерий рода
Citrobacter. — Ж. микробиол., 1973, Ns 6, с. 78—83.
Рогинская В. П. Состояние вопроса о патогенной роли бактерий рода Citro-
- bacter. — В кн.: Тезисы Всесоюзного научно-практ. семинара бактериол.
28 мая — 1 июня. М., 1973, с. 61—63.
Ратинер Ю. А. Антигенное строение жгутиков Е. coli и их серологическая иден-
тификация. — В кн.: Научные достижения в изучении коли-инфекции./Под
ред. И. В. Голубевой. М.: ВНИИМИ, 1973, с. 57—71.
Рожнова С. Ш. Характеристика некоторых биологических свойств «госпиталь-
ных» штаммов S. typhimurium. — В кн.: Современные проблемы сальмо-
неллезов и вакцинопрофнлактики кори./МЗ СССР, М3 Арм. ССР, ЦНИИЭ
и др. — М., Ереван, 1976, с. 90—92.
Тимаков В. Д., Петровская В. Г., Бондаренко В. М. Биологические и генети-
ческие характеристики бактерий рода Shigella. — М.: Медицина, 1980. —
293 с.
Улиско И. Н. Иммунофлуоресцентный метод лабораторной диагностики кишеч-
ной коли-инфекции. — В кн.: Научные достижения в изучении коли-ннфек-
ции./Под ред. И. В. Голубевой. М.: ВНИИМИ, 1973, с. 120—126.
Хазенсон С. Л. Использование реакции коагглютинации для идентификации
Shigella flexneri — Жури, микробиол., 1983, № 7, с. 89—92.
Хазенсон С. Л. Реакция коагглютинации н ее применение для идентификации
и обнаружения бактерий, вирусов, растворимых антигенов. — Журн. мик-
робиол., 1983, Ns 2, с. 8—13.
315
Хазенсон С. Л., Еремеева М. В., Носков Ф. С. Использование коагглютинации
для серотнпирования Shigella dysenteriae и Shigella boydii. — Жури, мик-
робиол., 1982, № 12, с. 65—69.
Холодкова Е.В, Биохимическая и серологическая характеристика штаммов
Providencia, выделенных от больных. — В кн.: Сборник трудов «Диагно-
стические препараты и методы лабораторной диагностики заболеваний,
вызываемых эитеробактериями>./Моск. НИИ вакцин и сывороток им.
И. И. Мечникова. М., 1977, ч. 2, с. 182—189.
Хоменко Н. А. Идентификация шигелл. — В кн.: Сборник трудов «Диагности-
ческие препараты и методы лабораторной диагностики заболеваний, вы-
зываемых энтеробактернями»./Моск. НИИ вакцин и сывороток им.
И. И. Мечникова. — М., 1977, ч. 1, с. 50—85.
Хоменко Н. А. Номенклатура бактерий рода Shigella и их классификационное
положение в семействе Enterobacteriaceae. — Журн. микробиол., 1978,
№ 9, с. 7—13.
Хоменко Н. А. Изучение шигелл провизорных сероваров. Сообщ. II. Антигены
и антигенные связи. — Жури, микробиол., 1981, Ns 6, с. 43—46.
Ющенко Г. В., Дунаев В. И. Методика выделения и идентификации Yersinia
pseudotuberculosis и Yersinia enterocolitica. — Лабор. дело, 1980, Ns 6,
с. 367—370.
Ющенко Г. В., Дунаев В. И. Об антигенном родстве Y. enterocolitica с предста-
вителями рода Brucella. — Журн. микробиол., 1980, Ne 6, с. 48—50.
Anderson Е. S.. Threlfall Е. J. The characterization of plasmids in the entero-
bacteriaceae.— J. Hyg., 1974, vol. 72, p. 471—473.
Approved lists of bacterial names./Eds. V. B. D. Skerman, V. McGowan,
P. H. A. Sneath. — Int. J. System. Bact., 1980, vol. 30, N 1, p. 225—420.
Bascomb S„ Lapage S. P., Willcox W. R., Cuttis M. A. Numerical classification
of the tribe Klebsielleae. — J. gen. Microbiol., 1971, vol. 66, N 3, p. 279—
295.
Bergey’s manual of determinative bacteriology. '8-th ed. Eds. R. E. Buchanan,
N. E. Gibbons. — Baltimore: Williams & Wilkins, 1974.— 1268 p.
Brenner D. J. Deoxyribonucleic acid reassociation in the taxonomy of enteric
bacteria. — Int. J. System. Bact., 1973, vol. 23, N 4, p. 298—307.
Brenner D. J. Opposition to the proposal to replace the family name Enterobac-
teriaceae.— Int. J. System. Bact., 1983, vol. 33, N 4, p. 892—895.
Brenner D. J., Fanning G. R., Steigerwalt A. G. Deoxyribonucleic acid related-
ness among Erwinia and other Enterobacteriaceae: the Gall, Willt and Dry-
necrosis organisms (Genus Erwinia Winslow et al. sensu stricto).— Int. J.
System. Bact., 1974, vol. 24, N 2, p. 197—204.
Brenner D. J., Farmer J. J., Ill, Fanning G. R. et al. Deoxyribonucleic acid
relatedness of proteus and providencia species. — Int. J. System. Bact., 1978,
vol. 28, N 2, p. 269—282.
Brenner I., Bercovier H„ Ursing I. et al. Yersinia intermedia: A New species of
of enterobacteriaceae compposed of rhamnose positive, melibio3e — positive,
raffinose positive strains (Formerly Called Yersinia enterocolitica of Yer-
sinia enterocolitica — Like). — Curr. Microbiol., 1980, vol. 4, p. 207—212.
(Broda P.) Брода П. Плазмиды: Пер. с англ. —М.: Мир, 1982. — 220 с.
Casewell М. W. Titres and cross reactions of commercial antisera for the capsu-
lar typing of Klebsiella. — J. clin. Microbiol., 1975, vol. 28, N 1, p. 33—36.
Cheasty T., Rowe B. Antigenic relationships between the enteroinvasive Esche-
richia coli О antigens O,28ac, O112ac, 0124, 0136, 0143, 0144, 0152, and
0164 and Shigella О antigens. — J. clin. Microbiol., 1983, v. 17, N 4.
p. 681—684.
Cherubin С. E. Antibiotic resistance of Salmonella in Europe and the United
States. — Rev. Infect. Dis., 1981, v. 3, N 6, p. 1105—1126.
Colwell R. R., Johnson R., Wan L„ Lavelage T. E., Brenner D. J. Numerical
taxonomy and deoxyribonucleic acid reassociation in the taxonomy of some
Giam-negative fermentative bacteria. — Int. J. System. Bact., 1974, vol. 24,
p 422-433.
316
Cowan S. T, Steel K- 1. Cowan & Steel’s manual for the identification of me-
dical bacteria. 2d ed. Cambridge: University Press, 1974. — 238 p.
Cowan S. T., Steel K. J, Shaw C. et al. A classification of the Klebsiella
group. — J. gen. Microbiol., 1960, vol. 25, p. 601—612.
Datta N. Infections drag resistance. — Brit. med. Bull., 1965, vol. 21, p. 254—
259.
Paita N., Hedges R. W. Host ranges of R-f actors.— J. gen. Microbiol., 1972,
vol. 70, p. 453—457.
Edwards P. R., Ewing W. H. Identification of Enterobacteriaceae. 3-d ed. Min-
neapolis: Burges Publishing Co., 1972.— 357 p.
Edwards P. R., West M. G., Bruner D. W. Antigenic studies of paracolon bac-
teria (Bethesda group). — J. Bact., 1948, vol. 55(5), p. 711—719.
Ewing W. H. Biochemical reactions of Shigella. — Atlanta: Center for Disease
Control (CDC), 1973, —42 p.
Ewing W. H. Differentiation of Enterobacteriaceae by biochemical reactions. —
Atlanta: Publ. Health Service. CDC, 1973. — 61 p.
Ewing W. IL, Farmer J. J. III. Brenner D. J. Proposal of Enterobacteriaceae nov.
notii. rev. to replace Enterobacteriaceae Rahn 1937, nom. fam. cons. (Opin.
15, Jud. Comm. 1958), which lost standing in Nomenclature on 1 Jannuary
1980. — Int. J. System. Bact., 1981, vol. 30, N 4, p. 674—675.
Ewing W. H., McWhorter A. C.. Escolar M. R„ Lubin A. H. Edwardsiella, a new
genus of Enterobacteriaceae based on a new species E. tarda. — Int. Bull.
Bact. Nom. Tax., 1965, vol. 15, p. 33—38.
Goodfellow M„ Triiper H. G. Escherichiaceae nom. nov., a name to raplace Ente-
robacteriaceae. — Int. J. System. Bact., 1982, v. 32, N 3, p. 383—383.
(Jawetz E., Melnick J. L., Adelberg E. А.) Джавец Э„ Мельник Дж. Л., Эй-
делъберг Е. А. Руководство по медицинской микробиологии. Пер. с англ.—
М_: Медицина, 1982. — 365 с.
Kauffmann F. The bacteriology of Enterobacteriaceae. — Copenhagen: Munks-
gaard, 1966. — 657 p.
Kauffmann F„ Edwards P. R. Classification and nomenclature of Enterobacte-
riaceae.— Int. Bull. Bact. Nom. Tax., 1952, vol. 2, p. 2—8.
Knapp W.. Thai E. Die biochimische Charakterisierung von Yersinia enterocoli-
tica (Syn. Pasteurella X) als Grundlage eines vereinfachten O-Antigen-
schemas. — Zbl. Bakt. Abt. I Orig. A., 1973, Bd 223, H. 1, S. 88—105.
Koneman E. W., Allen S. D„ Dowel V. R., Sommers H. M. Color atlas and1
textbook of diagnostic microbiology. — Philadelphia — Toronto: J. B. Lip-
pincott Co, 1979. — 495 p.
Lautrop IL, Genus X. Proteus Hauser 1885, 12. — In: Bergey’s Manual of deter-
minative bacteriology. — 8-th ed./Eds. R. E. Buchanan, N. E. Gibbons.—
Baltimore: Williams & Willkins, 1974, p. 327—330.
Le Minor L.. Rohde R.. Taylor J. Nomenclature des Salmonella. — Ann. Inst.
Pasteur, 1970, vol. 119, p. 206—210.
Mac Faddin J. F. Biochemical tests for identification of medical bacteria. 2d
ed. — Baltimore: Williams a. Wilkins Co., 1981, —527 p.
Martin IVZ. /., Washington J. A. II Enterobacteriaceae.—In: Manual of clinical
microbiology. 3d ed./Eds. E. H. Lennette et al. — Washington D. C., ASM,
1980, p. 195 -209.
(Maynell G. G.) Мейнелл Г. Бактериальные плазмиды: Пер. с англ. — М.: Мир,
1976. —237 с.
Mitsuhashi S. The R-factors. — J. Int. Dos., 1969, vol. 119, p. 89—100.
Nlcolle P., Mollaret H„ Hamon Y., Vieu J. F. Etude lysogenique, bactferiocinogfc-
nique et lysotypique de 1’espece Yersinia enterocolitica. — Ann. Inst. Pasteur,
1967, vol. 112, p. 86—92.
Nilehn B., Ericson C. Studies on Yersinia enterocolitica bacteriophages libera-
ted from chloroform treated cultures. — Acta Path. Microbiol. Scand., Sect.
B.. 1969. vol. 75, N 1, p. 177—187.
0rskov F., 0rskov I. Serotyping of Enterobacteriaceae, with special emphasis
on К antigen determination. — In: Methods in microbiology/Ed. T. Bergan,
J. R. Norris. — New York: Acad. Press, 1978, vol 11, p. 3—12.
317
Orskov F„ 0rskov I., lann B. et al. Immunoelectrophoretic patterns of extracts
from all E. coli O- and K-antigens test strains. Correlation with pathogeni-
city. — Acta Path. Microbiol., Scand., Sect. B, 1971, vol. 79, p. 142—
152.
0rskov I. Genus VI. Klebsiella.— In: Bergey’s manual of determinative
bacteriology. 8-th ed./Eds. R. E. Buchanan, N. E. Gibbons. — Baltimore:
Williams & Wilkins, 1974, p. 321—324.
0rskov L, 0rskov F„ Jann B. et al. Serology, chemistry, and genetics of O- and
K-antigens of E. coli. — Bact. Rev., 1977, vol. 41, N 3, p. 667—710.
Richard C. Etude antigenique et biochimiqne de 500 souches de Klebsiella.—
Ann. Biol. Clin., 1973, vol. 31, N 4, p. 295—303.
Richard C.. Alonso J. M. The Enterobacteria meconnue: Enterobacter hafniae. —
Bull. Inst. Pasteur, 1976, vol. 74, p. 339—352.
Sedlak J. Citrobacter. — In: Enterobacteriaceae — Infektionen 2 Aufl./Hrsg von
J. Sedlak, H. Rische. — Leipzig VEB Georg Thieme, 1968, S. 521—
531. (Hrsg).
Sedlak J. Enterobacter. — In: Enterobacteriaceae — Infektionen. 2 Aufl/Hrsg.
von J. Sedlak, H. Rische. Leipzig: VEB Georg Thieme, 1968, S. 595—601.
The Shorter bergey’s manual of determinative bacteriology. Краткий определи-
тель бактерий Берги/Под ред. Дж. Хоулта: Пер. с англ. — М.: Мир,
1980, —485 с.
Slopek S. Klebsiella. — In: Enterobacteriaceae—Infektionen, 2 Aufl/Hrsg von
J. Sedlak, H. Rische. — Leipzig: VEB Georg Thieme, 1968, S. 531—559.
Slopek S. Shigella flexneri. — In: Infektionskrankheiten und ihre Erreger,
Bd. 14. Lysotypie und andere spezielle epidemiologische Laboratoriums-
inethoden. Hrsg. von 14. Rische. — Jena, VEB Gustav Fischer, 1973, S. 215—
245.
Starr M. P. The genus Erwinia.— In: Prokaryotes./Ed. Berlin e. a., 1981, vol. 2,
p. 1260—1271.
Szita S. A. Yersinia enterocolitica bakteriologiai diagnoztikaja as pathogen
jelentosege. — Egeszsegtudomany, 1971, vol. 15, N 1, p. 92—101.
Tschtipe H., Tietze Ё. Genetische und moleculare Grundlagen der Plasmid-spe-
zies-hypothese. — Biol. Zbl., 1981, Bd. 100, S. 353—384.
Ursing L, Brenner I., Bercovier H. et al. Yersinia frederiksenii, A. New species
of enterobacteriaceae composed of rhamnose — positive strains (formerly
Called Atypical Yersinia enterocolitica of Yersinia enterocolitica — Like).—
Curr. Microbiol., 1980, vol. 4, p. 213—217.
Watanabe T. Infective heredity of multiple drug resistance in bacteria. — Bact.
Rev., 1963, vol. 27, p. 87—91.
Watanabe T. Transferable antibiotic resistance in enterobacteria: relationship
to the problems of treatment and control of coliform enteritis. — Ann. N. Y.
Acad. Sci., 1971, vol. 176, p. 371—379.
Wauters G., Le Minor L., Chalon A. M., Lassen J. Supplement au Schema anti-
genique de Yersinia enterocolitica. — Ann. Inst. Pasteur, 1972, vol. 122, N 5,
p. 951—956.
Weiss R. Klebsiella. — In: Handbuch der bakteriellen Infektionen bei Tieren/
/Hrsg von H. Blobel, T. Schliesser. — Jena, 1981, S. 453—479.
Werkman C. FL, Gillen G. F. Bacteria producing trimethylene glycol. — J. Bact.,
1932, vol. 23, p. 167—182.
West M. G., Edwards P. R. The Bethesda-Bellerup group of paracolon bacte-
ria/US Publ. Health Service, Monography, 1954, N 22. Govt. Print. Off.
Washington, 1954. — 35 p.
Westphal O., Kauffmann F., Luderitz O., Stierlin FL Zur Immunochemia der
O-Antigene von Enterobacteriaceae. — Zbl. Bakt. Abt. I Orig., 1960, Bd. 179,
S. 336—342.
Winblad S. Studies on serological typing of Y. enterocolitica. — Acta Path. Mic-
robiol. Scand., 1967, Suppl. 187, p. 115 115.
Zlesche K-, Rische FL Shigella sonnei. — In: Ibfektionskrankheiten und ihre
Erreger, Bd. 14 Lysotypie und andere spezielle epidemiologische Laborato-
riumsmethode./Hrsg. von H. Rische. — Jena: VEB Gustav Fischer, 1973.
S. 245- 343.
318
ENTEROBACTERIA'
Manual of bacteriological investigations.
Ed. by Prof. V. I. POKROVSKY — Academician of the USSR Academy of
Medical Sciences.
The manual contains the modern data on methods of singling out, identifi-
cation and differentiation of the members of all the genera of the Enterobactc-
riaceae family as v. ell as data on determining the epidemiological markers of
these bacteria (biovars, phagovars etc). The book describes the principles and
steps of bacteriological ivestigations for enterobacteria according to modern
world experience in this field. The methods of accelerated and' simplicified iden-
tification of enterobacteria are icluded. The nutrient media are described accor-
ding to the schemes of bacteriological investigations. The contents of the media,
the principles of their action and the methods of preparation are included. The
modern date on general of theoretical aspects of the problem are also described.
The manual is of interest for microbiologists working in sanitary epide-
miological stations, hospitals and research institutes.
ОГЛАВЛЕНИЕ
(Предисловие.......................................................... 3
Глава (.КЛАССИФИКАЦИЯ И НОМЕНКЛАТУРА. Докт. биол.
наук Н. А. Хоменко......................................... 5
Глава 2. ОСНОВНЫЕ ПРИНЦИПЫ И ЭТАПЫ БАКТЕРИОЛОГИ-
ЧЕСКОГО ИССЛЕДОВАНИЯ ..................................... 16
Материал для исследования. Отбор материала и транспор-
тировка проб. Канд. мед. наук С. Д. Татаринова ... 17
Выделение и первичная идентификация. Канд. мед. наук
И. С. Прямухина............................................23
Дифференциация родов. Канд. мед. наук Б. С. Киселева,
докт. мед. наук, проф. И. В. Голубева, канд. мед. наук
С. Д. Татаринова, канд. мед. наук И. С. Прямухина, докт.
биол. наук И. А. Хоменко...................................44
Глава 3. ХАРАКТЕРИСТИКА РОДОВ. ВНУТРИРОДОВАЯ ДИФ-
ФЕРЕНЦИАЦИЯ . .................57
Род Escherichia. Докт. мед. наук, проф. И. В. Голубева,
канд. мед. наук Б. С. Киселева.............................57
Род Shigella. Докт. биол. наук Н. А. Хоменко, канд. мед.
наук И. С. Прямухина.......................................87
Род Salmonella. Докт. мед. наук, проф. В. А. Килессо . ,. 121
Род Citrobacter. Докт. мед. наук, проф. В. А. Килессо . . 164
Род Klebsiella. Канд. мед. наук Б. С. Киселева ... 171
Род Enterobacter. Канд. мед. наук Б. С. Киселева . . . 192
Род Hafnia. Канд. мед. наук С. Д. Татаринова . . . 198
Род Serratia. Канд. мед. наук С. Д. Татаринова . . . 204
Род Proteus. Канд. мед. наук С. Д. Татаринова . . . 208
Род Yersinia. Канд. мед. наук Г. В. Ющенко .... 220
Род Edwardsieiia. Канд. мед. наук С. Д. Татаринова . . 239
Род Erwinia Канд. мед. наук С. Д. Татаринова . . . 242
Глава 4. УСКОРЕННЫЕ И УПРОЩЕННЫЕ МЕТОДЫ БАКТЕ-
РИОЛОГИЧЕСКОГО ИССЛЕДОВАНИЯ. Докт. биол. наук
Н. А. Хоменко, каид. мед. наук С. Д. Татаринова . . . 246
Метод флуоресцирующих антител .......................... 253
Реакция коагглютинации (КОА)........................256
Глава 5. ПИТАТЕЛЬНЫЕ СРЕДЫ И РЕАКТИВЫ. Докт. биол. наук
Н. А. Хоменко........................................258
1. Консерванты.......................................258
2. Среды обогащения..................................259
3. Плотные среды для выделения чистых культур . . 265
4. Среды для первичной дифференциации................269
5. Среды для дальнейшей дифференциации .... 273
б. Среды и реагенты для дифференциации энтеробактерий
• от представителей других семейств ..................... 297
7. Среды для хранения и пересылки культур . 300
8. Индикаторы.............................................302
9. Некоторые дополнительные сведения......................304
Приложения ... 305
‘Список литературы...................................................314